一种胶质瘤类器官复苏液、培养液及复苏培养方法技术

本发明专利技术提供了一种胶质瘤类器官复苏液、培养液及复苏培养方法，属于胶质瘤类器官复苏技术领域。所述复苏液包含紫杉叶素和毛蕊异黄酮。本发明专利技术胶质瘤类器官复苏液，在复苏胶质瘤类器官时可大大降低DMSO对胶质瘤类器官的损伤及冷冻对其的损伤，可显著提高胶质瘤类器官活力，提高胶质瘤类器官复苏后的活率；且不含动物血清及异质源蛋白，可避免病毒、细菌及支原体等污染。原体等污染。原体等污染。

【技术实现步骤摘要】
一种胶质瘤类器官复苏液、培养液及复苏培养方法


[0001]本专利技术属于胶质瘤类器官复苏
，具体涉及一种胶质瘤类器官复苏液、培养液及复苏培养方法。

技术介绍

[0002]胶质瘤是一种常见的中枢神经系统恶性肿瘤，多以浸润性生长方式生长，与周围脑组织分界不清，手术完全切除难度较大，且术后易复发，因此对胶质瘤的体外研究尤为重要。
[0003]类器官研究是一种最新的细胞体外培养技术。类器官模型能够很好的模拟细胞在体内的微环境，对在体外构建具有生理功能的研究模型非常具有优势。胶质瘤类器官的体外培养虽然采用特殊的3D培养方式，其冻存方法却是采用的常规的细胞冻存方法。实验室中细胞的冻存大多采用二甲亚砜、牛血清、培养液等按照一定比例混合后进行细胞的冻存，然而二甲亚砜毒性较大，这种毒性在一定程度上对细胞也会造成毒害和损伤，降低细胞的活力，对胶质瘤类器官的损伤更为明显。因此在胶质瘤类器官复苏时，需要一种试剂能提高胶质瘤类器官的活力，提高成活率。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于解决上述现有技术中存在的难题，提供一种胶质瘤类器官复苏液，在复苏胶质瘤类器官时，将该复苏液添加到培养液中，能够提高胶质瘤类器官的活力和活率，加快胶质瘤类器官的增殖速度。
[0005]本专利技术的第二个目的是提供一种胶质瘤类器官复培养液，能够提高胶质瘤类器官的活力和活率，加快胶质瘤类器官的增殖速度。
[0006]本专利技术的第三个目的是提供一种胶质瘤类器的复苏培养方法。
[0007]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0008]本专利技术的第一个方面，提供了一种胶质瘤类器官复苏液，包含紫杉叶素和毛蕊异黄酮。
[0009]进一步地，所述胶质瘤类器官复苏液主要成分包含有效浓度范围为0.1
‑
10μg/ml的紫杉叶素和1
‑
50μg/ml的毛蕊异黄酮。
[0010]本专利技术的第二个方面，提供了一种胶质瘤类器官复苏培养液，包含所述胶质瘤类器官复苏液。
[0011]进一步地，所述胶质瘤类器官复苏培养液的制备方法，包括以下步骤：
[0012](1)配制1000倍浓缩的胶质瘤类器官复苏液母液：用分析天平精确称取紫杉叶素和毛蕊异黄酮至离心管中，加适量无菌水，轻轻摇晃离心管至紫杉叶素和毛蕊异黄酮溶解，其中母液中含有0.1
‑
10mg/ml的紫杉叶素，1
‑
50mg/ml的毛蕊异黄酮；
[0013](2)过滤除菌：将上述配制的母液，通过物料通道传入实验室，在生物安全柜中用0.22μm的过滤器过滤除菌；
[0014](3)配制复苏培养液：取预热的胶质瘤类器官生长培养液，按照培养液的体积将所述过滤除菌后的复苏液母液稀释1000倍，混匀后备用。
[0015]进一步地，胶质瘤类器官生长培养液包含DMEM高糖细胞培养液、1
×
B27血清替代物、20ng/mL EGF、10mM尼克酰胺、10μM抗坏血酸、25ng/mL FGF10、5μM A83
‑
01、25ng/mL R
‑
spondin
‑
1。
[0016]本专利技术的第三个方面，提供了一种胶质瘤类器的复苏培养方法，利用上述胶质瘤类器官复苏培养液对冻存的胶质瘤类器官进行复苏，所述方法包括：
[0017](1)将基质胶提前放入4℃融化，实验前置于冰上，实验所需枪头需在
‑
20℃冰箱提前预冷，所需培养皿提前放入培养箱预热；
[0018](2)取出冻存的胶质瘤细胞，立刻转入37℃水浴锅内解冻，边解冻边摇晃；
[0019](3)取离心管加入至少5ml预冷的PBS，将解冻的细胞悬液加入离心管中，轻轻混匀后离心；
[0020](4)弃上清液，加入适量胶质瘤类器官生长培养液，轻轻混悬细胞；
[0021](5)将细胞悬液与基质胶以1:5的比例混合，混匀后将混合物滴在培养皿中，注意不要产生气泡，静置3min，将培养皿放入培养箱15min左右使基质胶凝固；
[0022](6)取出培养皿，在培养皿内加入配置好的复苏培养液，放入培养箱中培养；
[0023](7)培养48小时后，换胶质瘤类器官生长培养液继续培养。
[0024]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0025]本专利技术提供的一种胶质瘤类器官复苏液，在复苏胶质瘤类器官时可大大降低DMSO对胶质瘤类器官的损伤及冷冻对其的损伤，可显著提高胶质瘤类器官活力，提高胶质瘤类器官复苏后的活率。
[0026]本专利技术提供的一种胶质瘤类器官复苏液，不含动物血清及异质源蛋白，可避免病毒、细菌及支原体等污染。
附图说明
[0027]图1为紫杉叶素浓度优化的CCK8实验数据分析；
[0028]图2为毛蕊异黄酮浓度优化的CCK8实验数据分析；
[0029]图3为不同浓度药物组合的CCK8实验数据分析；
[0030]图4为免疫组织化学染色结果。
具体实施方式
[0031]下面结合附图对本专利技术作进一步详细描述：
[0032]本专利技术提供了一种胶质瘤类器官复苏液，主要成分包含紫杉叶素和毛蕊异黄酮。
[0033]作为一种可能方案，所述胶质瘤类器官复苏液主要成分包含有效浓度范围为0.1
‑
10μg/ml的紫杉叶素和1
‑
50μg/ml的毛蕊异黄酮。
[0034]具体使用的时候是采用加了复苏液的培养液对细胞进行培养，复苏液包含紫杉叶素和毛蕊异黄酮，有效浓度范围指的是紫杉叶素和毛蕊异黄酮在培养液中的最终使用浓度。
[0035]其中，紫杉叶素是一种二氢黄酮醇类化合物，属于维生素P族，是一种应用广泛的
生物活性剂，与其他的黄酮类化合物一样，在人体中具有多种生物活性，包括抗氧化、清除自由基等作用；特别是其4，7
‑
OH及3
’
，4
’
邻位二羟基的存在，使其抗氧化能力优于一般的生物类黄酮。紫杉叶素被确认为更能有效的保证胶质瘤类器官存活的维生素P之一。本专利技术所述紫杉叶素的有效浓度范围是0.1
‑
10μg/ml。
[0036]毛蕊异黄酮其药理作用可提高免疫功能，增强抗氧化能力，保护胶质瘤类器官，促进胶质瘤类器官成活。本专利技术所述毛蕊异黄酮的有效浓度范围是1
‑
50μg/ml。
[0037]本专利技术还提供一种胶质瘤类器官复苏培养液，包含所述胶质瘤类器官复苏液。
[0038]所述胶质瘤类器官复苏培养液的制备方法，包括以下步骤：
[0039](1)配制1000倍浓缩的胶质瘤类器官复苏液母液：用分析天平精确称取紫杉叶素和毛蕊异黄酮至离心管中，加适量无菌水，轻轻摇晃离心管至紫杉叶素和毛蕊异黄酮溶解，其中母液中含有0.1
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10mg/ml的紫杉叶素，1
‑
50mg/ml的毛本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶质瘤类器官复苏液，其特征在于，所述复苏液包含紫杉叶素和毛蕊异黄酮。2.根据权利要求1所述的胶质瘤类器官复苏液，其特征在于，所述胶质瘤类器官复苏液主要成分包含有效浓度范围为0.1
‑
10μg/ml的紫杉叶素和1
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50μg/ml的毛蕊异黄酮。3.一种胶质瘤类器官复苏培养液，其特征在于，所述培养液包含所述胶质瘤类器官复苏液。4.根据权利要求3所述的胶质瘤类器官复苏培养液，其特征在于，所述胶质瘤类器官复苏培养液的制备方法，包括以下步骤：(1)配制1000倍浓缩的胶质瘤类器官复苏液母液：用分析天平精确称取紫杉叶素和毛蕊异黄酮至离心管中，加适量无菌水，轻轻摇晃离心管至紫杉叶素和毛蕊异黄酮溶解，其中母液中含有0.1
‑
10mg/ml的紫杉叶素，1
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50mg/ml的毛蕊异黄酮；(2)过滤除菌：将上述配制的母液，通过物料通道传入实验室，在生物安全柜中用0.22μm的过滤器过滤除菌；(3)配制复苏培养液：取预热的胶质瘤类器官生长培养液，按照培养液的体积将所述过滤除菌后的复苏液母液稀释1000倍，混匀后备用。5.根据权利要求4所述的胶质瘤类器官复苏培养液，其特征在于，所述胶质瘤类器官生长培养液包含DMEM高糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：王拓，高珂，冒平，
申请(专利权)人：西安交通大学医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：