【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有独特的EPS基因簇的质构化乳酸乳球菌
[0001]本专利技术涉及具有改善的质构特性的新颖乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)乳酸菌(LAB)菌株。本专利技术还涉及使用该菌株制备食品的方法以及包含该菌株的食品。
技术介绍
[0002]乳酸菌(LAB)被食品工业广泛用于食品发酵。通过LAB将新鲜乳转化为发酵乳是延长乳使用期限并提供口感和质构的方式。
[0003]因此,用于乳发酵的菌株的重要特征包括快速酸化、稳定(无/低)后酸化、长货架期和良好的质构。良好的质构通常是高口腔厚度和黏度(使用流变仪测量为高剪切应力)和高凝胶硬度。
[0004]一些LAB菌株明显有助于改善质构,这与它们产生外(或细胞外)多糖(EPS)的能力相关,EPS可以是英膜的(以英膜的形式保持附着在细胞上)或分泌到培养基中。EPS由单一类型的糖(同型外多糖)或由不同糖构成的重复单元(杂
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外多糖)组成。产生EPS的LAB是令人感兴趣的,因为EPS作为发酵食品的天然增黏剂和质构增强剂起作用。此外,具有确定的流变学特性的食品级LAB的EPS具有作为食品添加剂来开发和利用的潜力。众所周知,EPS通过影响黏度、脱水收缩、硬度和感官特性来改善LAB发酵制品的流变学特性。主要结构特征(单糖类型和构型、糖苷键、非糖修饰、电荷)、构象和分子量、多糖的量以及多糖与其他系统组分的相互作用,都是有助于和影响所显示的技术功能特性的所有因素(Zeidan et al.,2017)。
[0005]发酵乳可以由嗜温LAB来产生 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)乳酸菌菌株,包含能够产生胞外多糖(EPS)的活性eps基因簇,其中视情况而定,所述eps基因簇包含(i)至(x)中任何一项限定的下述核苷酸序列(a)至(c):(i)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:11的核苷酸序列(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(b):核苷酸序列,其编码具有多糖转运蛋白活性并且与SEQ ID NO:17的核苷酸序列(本文称为wzx)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;和(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:9的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%同一性;和(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:15的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%同一性;(ii)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:199的核苷酸13939
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15042(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(b):核苷酸序列,其编码具有多糖转运蛋白活性并且与SEQ ID NO:199互补链的核苷酸26029
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27444(本文称为wzx)编码的氨基酸序列具有至少95%的同一性的多肽;和(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:199的核苷酸4174
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4824编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:199的核苷酸7276
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8508编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%同一性;(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:199的核苷酸11042
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12391编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%同一性;(c4):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:199的核苷酸13008
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13934编码的氨基酸序列(本文称为GT4)具有至少95%同一性;和(c5):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:199的核苷酸18528
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19508编码的氨基酸序列(本文称为GT5)具有至少95%同一性;(iii)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:39的核苷酸序列(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(b):核苷酸序列,其编码具有多糖转运蛋白活性并且与SEQ ID NO:45的核苷酸序列(本文称为wzx)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:37的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%的同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:41的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%的同一性;和(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:43的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT3)
具有至少95%的同一性;(iv)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:163的核苷酸序列(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(b):核苷酸序列,其编码具有多糖转运蛋白活性并且与SEQ ID NO:169的核苷酸序列(本文称为wzx)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;和(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:161的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:165的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%同一性;(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:167的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%同一性;和(c4)核苷酸序列,其与SEQ ID NO:181的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT4)具有至少95%同一性;(v)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:224的核苷酸13939
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15042(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;和(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:224的核苷酸4174
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4824编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%的同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:224的核苷酸11042
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12391编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%的同一性;(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:224的核苷酸13008
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13934编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%的同一性;和(c4):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:224的核苷酸18527
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19507编码的氨基酸序列(本文称为GT4)具有至少95%的同一性;(vi)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:67的核苷酸序列(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(b):核苷酸序列,其编码具有多糖转运蛋白活性并且与SEQ ID NO:73的核苷酸序列(本文称为wzx)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:65的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:69的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%同一性;和(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:71的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%同一性;(c4):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:85的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT4)具有至少95%同一性;(c5):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:87的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT5)
具有至少95%同一性;和(c6):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:89的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT6)具有至少95%同一性;(vii)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:244的核苷酸5833
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6927(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;和(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:244的核苷酸4617
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5123编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%同一性;和(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:244的核苷酸5120
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5827编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%同一性;(viii)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:123的核苷酸序列(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(b):核苷酸序列,其编码具有多糖转运蛋白活性并且与SEQ ID NO:129的核苷酸序列(本文称为wzx)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;和(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:121的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%的同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:125的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%的同一性;(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:127的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%的同一性;(c4):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:143的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT4)具有至少95%的同一性;和(c5):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:145的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT5)具有至少95%的同一性;和(c6):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:147的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT6)具有至少95%的同一性;(ix)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:257互补链的核苷酸11201
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12349(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(b):核苷酸序列,其编码具有多糖转运蛋白活性并且与SEQ ID NO:257互补链的核苷酸15538
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16953(本文称为wzx)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;和(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:257互补链的核苷酸9726
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10673编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%的同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:257互补链的核苷酸12336
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13421编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%的同一性;和(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:257互补链的核苷酸13418
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14260编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%的同一性;(x)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:274互补链的核苷酸
10707
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11846(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(b):核苷酸序列,其编码具有多糖转运蛋白活性并且与SEQ ID NO:274互补链的核苷酸15037
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16476(本文称为wzx)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;和(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:274互补链的核苷酸9232
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10179编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:274互补链的核苷酸11833
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12918编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%同一性;和(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:274互补链的核苷酸12915
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13757编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%同一性。2.根据权利要求1所述的乳酸乳球菌乳酸菌菌株,其中视情况而定,所述eps基因簇包含(i)至(x)中任一项限定的核苷酸序列(a)至(m):(i)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:11的核苷酸序列(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(b):核苷酸序列,其编码具有多糖转运蛋白活性并且与SEQ ID NO:17的核苷酸序列(本文称为wzx)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:9的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%的同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:13的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%的同一性;和(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:15的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%的同一性;(d):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:23的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为推定的核苷酸糖脱氢酶蛋白)具有至少95%的同一性;(ii)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:199的核苷酸13939
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15042(本文称为wzy)编码的氨酸序列基具有至少95%同一性的多肽;(b):核苷酸序列,其编码具有多糖转运蛋白活性并且与SEQ ID NO:199互补链的核苷酸26029
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27444(本文称为wzx)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(c):至少一条、优选两条、更优选三条、甚至更优选四条、最优选五条编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其选自:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:199的核苷酸4174
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4824编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%的同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:199的核苷酸7276
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8508编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%的同一性;(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:199的核苷酸11042
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12391编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%的同一性;(c4):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:199的核苷酸13008
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13934编码的氨基酸序列(本文称为GT4)具有至少95%的同一性;
(c5):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:199的核苷酸18528
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19508编码的氨基酸序列(本文称为GT5)具有至少95%的同一性;(d):核苷酸序列,其编码具有dTDP
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葡萄糖4,6
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脱水酶活性并且与SEQ ID NO:199的核苷酸4784
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5695编码的氨基酸序列(本文称为dTDP
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葡萄糖4,6
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脱水酶)具有至少95%同一性的多肽;(e):核苷酸序列,其编码具有dTDP
‑4‑
脱氢鼠李糖还原酶活性并且与SEQ ID NO:199的核苷酸5717
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6631编码的氨基酸序列(本文称为dTDP
‑4‑
脱氢鼠李糖还原酶)具有至少95%同一性的多肽;(f):核苷酸序列,其编码具有dTDP
‑4‑
脱氢鼠李糖3,5
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差向异构酶活性并且与SEQ ID NO:199的核苷酸6586
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7257编码的氨基酸序列(本文称为dTDP
‑4‑
脱氢鼠李糖3,5
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差向异构酶)具有至少95%同一性的多肽;(g):核苷酸序列,其编码多肽DUF1919并且与SEQ ID NO:199的核苷酸8515
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9144编码的氨基酸序列(本文称为DUF1919)具有至少95%的同一性;(h):核苷酸序列,其编码多肽DUF4422并且与SEQ ID NO:199的核苷酸10271
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11029编码的氨基酸序列(本文称为DUF4422)具有至少95%的同一性;和(i):核苷酸序列,其编码具有UDP
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吡喃半乳糖变位酶活性并且与SEQ ID NO:199的核苷酸9159
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10274编码的氨基酸序列(本文称为UDP
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吡喃半乳糖变位酶)具有至少95%同一性的多肽;(iii)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:39的核苷酸序列(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(b):核苷酸序列,其编码具有多糖转运蛋白活性并且与SEQ ID NO:45的核苷酸序列(本文称为wzx)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:37编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%的同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:41的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%的同一性;和(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:43的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%的同一性;和(d):核苷酸序列,其具有多糖丙酮酰转移酶活性并且与SEQ ID NO:51的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为多糖丙酮酰转移酶家族蛋白)具有至少95%同一性;(iv)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:163的核苷酸序列(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(b):核苷酸序列,其编码具有多糖转运蛋白活性并且与SEQ ID NO:169的核苷酸序列(本文称为wzx)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(c):编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其包含:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:161的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%的同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:165的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为
GT2)具有至少95%的同一性;(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:167的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%的同一性;和(c4)核苷酸序列,其与SEQ ID NO:181的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为GT4)具有至少95%的同一性;和(d)核苷酸序列,其编码与SEQ ID NO:175的核苷酸序列编码的氨基酸序列(本文称为核心
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2/I
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分支蛋白)具有至少95%同一性的多肽;(v)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:224的核苷酸13939
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15042(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;(c):至少一条、优选两条、最优选三条编码具有糖基转移酶(GT)活性的多肽的核苷酸序列,其选自:(c1):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:224的核苷酸4174
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4824编码的氨基酸序列(本文称为GT1)具有至少95%的同一性;(c2):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:224的核苷酸11042
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12391编码的氨基酸序列(本文称为GT2)具有至少95%的同一性;(c3):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:224的核苷酸13008
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13934编码的氨基酸序列(本文称为GT3)具有至少95%的同一性;和(c4):核苷酸序列,其与SEQ ID NO:224的核苷酸18527
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19507编码的氨基酸序列(本文称为GT4)具有至少95%的同一性;(d):核苷酸序列,其编码多肽DUF1972并且与SEQ ID NO:224的核苷酸7276
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8508编码的氨基酸序列(本文称为DUF1972)具有至少95%的同一性;(e):核苷酸序列,其编码多肽DUF4422并且与SEQ ID NO:224的核苷酸10271
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11029编码的氨基酸序列(本文称为DUF4422)具有至少95%的同一性;(f):核苷酸序列,其编码多肽DUF1919并且与SEQ ID NO:224的核苷酸8515
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9144编码的氨基酸序列(本文称为DUF1919)具有至少95%的同一性;(g):核苷酸序列,其编码具有UDP
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吡喃半乳糖变位酶活性并且与SEQ ID NO:224的核苷酸9159
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10274编码的氨基酸序列(本文称为UDP
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吡喃半乳糖变位酶)具有至少95%同一性的多肽;(h):核苷酸序列,其编码具有dTDP
‑4‑
脱氢鼠李糖3,5
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差向异构酶活性并且与SEQ ID NO:224的核苷酸6586
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7257编码的氨基酸序列(本文称为dTDP
‑4‑
脱氢鼠李糖3,5
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差向异构酶)具有至少95%同一性的多肽;(i):核苷酸序列,其编码具有dTDP
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葡萄糖4,6
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脱水酶活性并且与SEQ ID NO:224的核苷酸4784
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5695编码的氨基酸序列(本文称为dTDP
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葡萄糖4,6
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脱水酶)具有至少95%同一性的多肽;和(j):核苷酸序列,其编码具有dTDP
‑4‑
脱氢鼠李糖还原酶活性并且与SEQ ID NO:224的核苷酸5717
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6631编码的氨基酸序列(本文称为dTDP
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脱氢鼠李糖还原酶)具有至少95%同一性的多肽;(vi)(a):核苷酸序列,其编码具有聚合酶活性并且与SEQ ID NO:67的核苷酸序列(本文称为wzy)编码的氨基酸序列具有至少95%同一性的多肽;<...
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