具有降低的免疫刺激性质的RNA组合和组合物制造技术

本发明专利技术涉及组合等，该组合包括(i)包含至少一种治疗性RNA的第一组分和(ii)包含至少一种RNA感知模式识别受体的至少一种拮抗剂的第二组分。进一步提供了包括至少一种治疗性RNA和至少一种RNA感知模式识别受体的至少一种拮抗剂的组合物。两种组分的组合能够减少第一组分的免疫刺激性质以及促进施用后的表达。另外，提供了第一和第二医疗用途以及治疗或预防疾病、紊乱或病症的方法。紊乱或病症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有降低的免疫刺激性质的RNA组合和组合物
[0001]介绍
[0002]本专利技术涉及组合等等，该组合包含(i)包含至少一种治疗性RNA的第一组分和(ii)包含至少一种RNA感知模式识别受体的至少一种拮抗剂的第二组分。还提供了包含至少一种治疗性RNA和至少一种RNA感知模式识别受体的至少一种拮抗剂的组合物。此外，提供了第一和第二医学用途，以及治疗或预防疾病、紊乱或病症的方法。
[0003]基于RNA的治疗剂可用于如被动和主动免疫疗法、蛋白质替代疗法或基因工程。因此，治疗性RNA有潜力为多种疾病、紊乱或病症的疗法提供高度特异性和个体化的治疗选择。
[0004]除了用作疫苗外，RNA分子还可以用作替代疗法的治疗剂，诸如，如，蛋白质替代疗法，用于取代患者体内缺失或突变的蛋白质，诸如生长因子或酶。然而，与疫苗相比，安全且有效的基于RNA的替代疗法的成功开发基于不同的先决条件。在将编码RNA应用于蛋白质替代疗法时，治疗性编码RNA应在表达水平和持续时间方面赋予目标蛋白质足够的表达，并对先天免疫系统赋予最小刺激，以避免待治疗患者的炎症，以及避免针对施用的RNA分子和编码的蛋白质的特异性免疫应答。
[0005]尽管治疗性RNA的固有免疫刺激性质可能被认为是疫苗的理想特征，但这种作用可能会引起替代疗法中出现不期望的并发症。这对于需要在延长的时间段内重复施用RNA治疗剂的慢性疾病的治疗尤其如此。治疗性RNA引发先天免疫应答的潜在能力可能代表其在体内应用的局限性。
[0006]先天和/或适应性免疫系统的免疫应答的诱导和/或增强在许多疾病中起重要作用。已经鉴定出一些先天免疫受体，它们专门用于检测外来或与损伤相关的核酸。这些核酸感知免疫受体组之一是Toll样受体(TLR)，它们是模式识别受体(PRR)，优先位于不同免疫细胞亚群和某些体细胞的内溶酶体区室中。后一种受体用于识别病原体相关分子模式(PAMP)和危险相关分子模式(DAMP)。PPR作为对致病实体的主要防御，并通过激活促炎细胞因子、趋化因子和干扰素以及B细胞和T细胞的产生来控制适应性免疫的激活和进展。在PPR中，Toll样受体(TLR)受到特别关注。它们在30多年前的发现提高了在调节先天免疫、炎症和细胞因子诱导方面的知识，核酸感知受体的刺激通常导致细胞因子和趋化因子(I型干扰素)的诱导以警告相邻细胞，以及如招募免疫细胞。例如，TLR3、TLR7、TLR8和TLR9是细胞内TLR，它们识别通过内吞作用被细胞吸收并转移到内体的核酸(如，RNA)。其他核酸感知免疫受体包括解旋酶的RIG
‑
I家族(如，RIG
‑
I、MDA5、LGP2)、NOD样受体、PKR、OAS、SAMHD1、ADAR1、IFIT1和/或IFIT5。
[0007]因此，主要由RNA感知模式识别受体如Toll样受体7和8介导的先天免疫应答的诱导可能损害基于RNA的治疗剂的有效性，并因此可能导致治疗效果降低。即使某些细胞因子谱的诱导对于预防性疫苗可能是有利的，但必须避免特征在于发烧和生病的RNA疫苗的反应原性。因此，在诱导先天免疫应答以支持适应性免疫应答和避免发烧和生病之间找到平衡是该领域的挑战。
[0008]在本领域中，该问题已通过使用修饰的RNA核苷酸得到部分解决。通过引入修饰的
核苷酸，治疗性RNA可以在体内显示出降低的先天免疫刺激。然而，包含修饰的核苷酸的治疗性RNA通常在体内显示出降低的表达或降低的活性，因为修饰还可以阻止有益RNA结合蛋白的招募，从而阻碍治疗性RNA的活性，如蛋白质翻译。
[0009]现有技术描述了使用具有修饰的CpG基序的免疫调节寡核苷酸(IRO)作为TLR的拮抗剂来抑制和/或压制基因疗法中使用的由内源性和/或外源性核酸如修饰的信使RNA(mmRNA)治疗剂或DNA诱导的TLR介导的免疫应答(WO2017136399)。含有未甲基化脱氧胞苷
‑
脱氧鸟苷(CpG)二核苷酸的小型合成寡脱氧核苷酸(ODN)能够通过TLR9识别来模拟细菌DNA的免疫刺激活性(Pohar et al,Selectivity of Human TLR9 for Double CpG Motifs and Implications for the Recognition of Genomic DNA,J Immunol March 1,2017,198(5)2093
‑
2104和El
‑
Zayat et al Toll
‑
like receptors activation,signaling,and targeting:an overview,Bulletin of the National Research Centre(2019)43:187)。
[0010]综上所述，降低治疗性RNA的免疫刺激性质并同时保持功效(如这种RNA在细胞中的可翻译性和/或诱导适应性免疫应答)是有问题的。然而，在大多数治疗环境中，这两个特征(降低的或低的免疫刺激性质、体内高翻译率)对于RNA药物来说都是至关重要的。
[0011]上面概述的目的通过本专利技术的要求保护的主题来解决。
[0012]定义
[0013]为了清楚和可读性，提供以下定义。对于这些定义提及的任何技术特征都可以基于本专利技术的每个和每一个实施方式理解。
[0014]数字上下文中的百分比应理解为相对于相应项目的总数。在其他情况下，且根据上下文，百分比应理解为重量百分比(wt.
‑
％)。
[0015]约：当参数或值不一定需要相等，即100％相同时，使用术语“约”。因此，“约”是指参数或值可以偏差0.1％至20％，优选地0.1％至10％；特别是0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％。本领域技术人员将知道，例如根据如何确定参数的方法，某些参数或值可能略有改变。例如，如果某个参数或值在本文中被限定为具有例如“约1000个核苷酸”的长度，该长度可以偏差0.1％至20％，优选地0.1％至10％；特别是0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％。因此，本领域技术人员将知道，在该具体实例中，该长度可以偏差1到200个核苷酸，优选地1到100个核苷酸；特别是5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200个核苷酸。
[0016]适应性免疫应答：如本文所使用的术语“适应性免疫应答”将被本领域普通技术人员认识和理解，例如意指免疫系统(适应性免疫系统)的抗原特异性应答。抗原特异性允许产生针对特定病原体或病原体感染细胞的应答。产生这些针对应答的能力通常由“记忆细胞”(B细胞)在体内维持。在本专利技术的上下文中，抗原可以由本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合，其包括或由以下组成：(i)包含至少一种治疗性RNA的至少一种第一组分；和(ii)包含至少一种RNA感知模式识别受体的至少一种拮抗剂的至少一种第二组分。2.根据权利要求1所述的组合，其中所述至少一种RNA感知模式识别受体在结合RNA激动剂后诱导细胞因子。3.根据权利要求1或2所述的组合，其中所述至少一种RNA感知模式识别受体在结合RNA激动剂后抑制翻译。4.根据前述权利要求中任一项所述的组合，其中所述第二组分的至少一种拮抗剂减少在结合RNA激动剂后所述至少一种RNA感知模式识别受体的细胞因子诱导和/或减少在结合RNA激动剂后所述至少一种RNA感知模式识别受体的翻译抑制。5.根据前述权利要求中任一项所述的组合，其中与施用所述第一组分的至少一种治疗性RNA而不与所述第二组分的至少一种RNA感知模式识别受体的至少一种拮抗剂组合相比，施用所述第一组分的至少一种治疗性RNA和所述第二组分的至少一种RNA感知模式识别受体的至少一种拮抗剂的组合导致降低的先天免疫应答。6.根据权利要求5所述的组合，其中通过测量细胞因子的所述诱导确定先天免疫应答的诱导。7.根据权利要求6所述的组合，其中所述细胞因子选自IFN
‑
α、TNF
‑
α、IP
‑
10、IFN
‑
γ、IL
‑
6、IL
‑
12、IL
‑
8、Rantes、MIP
‑
1α、MIP
‑
1β、McP1或IFNβ。8.根据权利要求6或7所述的组合，其中细胞因子的所述诱导是通过将所述组合施用至细胞、组织或生物体中，优选地hPBMC、Hela细胞或HEK细胞中测量的。9.根据前述权利要求中任一项所述的组合，其中所述至少一种RNA感知模式识别受体是内体受体或细胞质受体，优选地内体受体。10.根据前述权利要求中任一项所述的组合，其中所述至少一种RNA感知模式识别受体是用于单链RNA(ssRNA)的受体和/或用于双链RNA(dsRNA)的受体。11.根据前述权利要求中任一项所述的组合，其中所述至少一种RNA感知模式识别受体选自Toll样受体(TLR)、维甲酸可诱导基因
‑
I
‑
样受体(RLR)、NOD
‑
样受体、PKR、OAS、SAMHD1、ADAR1、IFIT1和/或IFIT5。12.根据权利要求11所述的组合，其中所述至少一种Toll样受体选自TLR3、TLR7、TLR8和/或TLR9。13.根据权利要求11或12所述的组合，其中所述至少一种Toll样受体选自TLR8和/或TLR9，最优选选自TLR7和/或TLR8。14.根据权利要求11所述的组合，其中所述维甲酸可诱导基因
‑
I
‑
样受体(RLR)选自RIG
‑
1、MDA5、LGP2、cGAS、AIM2、NLRP3、NOD2，优选地RIG1和/或MDA5。15.根据前述权利要求中任一项所述的组合，其中所述第二组分的至少一种拮抗剂选自核苷酸、核苷酸类似物、核酸、肽、蛋白质、小分子、脂质、或这些中任一种的片段、变体或衍生物。16.根据前述权利要求中任一项所述的组合，其中所述第二组分的至少一种拮抗剂是核酸。17.根据前述权利要求中任一项所述的组合，其中所述第二组分的至少一种拮抗剂是
单链核酸。18.根据权利要求16或17所述的组合，其中所述第二组分的核酸包括或由选自以下的核苷酸组成：DNA核苷酸、RNA核苷酸、PNA核苷酸、和/或LNA核苷酸、或这些中任一种的类似物或衍生物。19.根据权利要求16至18中任一项所述的组合，其中所述第二组分的核酸包括至少一种修饰的核苷酸和/或至少一种核苷酸类似物或核苷酸衍生物。20.根据权利要求19所述的组合，其中所述至少一种修饰的核苷酸和/或至少一种核苷酸类似物选自骨架修饰的核苷酸、糖修饰的核苷酸和/或碱基修饰的核苷酸、或其任意组合。21.根据权利要求19或20中任一项所述的组合，其中所述至少一种修饰的核苷酸和/或所述至少一种核苷酸类似物选自1
‑
甲基腺苷、2
‑
甲基腺苷、N6
‑
甲基腺苷、2'
‑
O
‑
甲基腺苷、2
‑
甲硫基
‑
N6
‑
甲基腺苷、N6
‑
异戊烯基腺苷、2
‑
甲硫基
‑
N6
‑
异戊烯基腺苷、N6
‑
苏氨酰氨甲酰基腺苷、2
‑
甲硫基
‑
N6
‑
苏氨酰氨甲酰基腺苷、N6
‑
甲基
‑
N6
‑
苏氨酰氨甲酰基腺苷、N6
‑
羟基正戊酰基氨基甲酰基腺苷、2
‑
甲硫基
‑
N6
‑
羟基正戊酰基氨基甲酰基腺苷、肌苷、3
‑
甲基胞苷、2'
‑
O
‑
甲基胞苷、2
‑
硫胞苷、N4
‑
乙酰基胞苷、赖氨酸、1
‑
甲基鸟苷、7
‑
甲基鸟苷、2'
‑
O
‑
甲基鸟苷、辫苷、环氧辫苷、7
‑
氰基
‑7‑
脱氮鸟苷、7
‑
氨基甲基
‑7‑
脱氮鸟苷、假尿苷、二氢尿苷、5
‑
甲基尿苷、2'
‑
O
‑
甲基尿苷、2
‑
硫尿苷、4
‑
硫尿苷、5
‑
甲基
‑2‑
硫尿苷、3
‑
(3
‑
氨基
‑3‑
羧基丙基)尿苷
′
、5
‑
羟基尿苷、5
‑
甲氧基尿苷、尿苷5
‑
氧乙酸、尿苷5
‑
氧乙酸甲基酯、5
‑
氨基甲基
‑2‑
硫尿苷、5
‑
甲基氨基甲基尿苷、5
‑
甲基氨基甲基
‑2‑
硫尿苷、5
‑
甲基氨基甲基
‑2‑
硒基尿苷、5
‑
羧基甲基氨基甲基尿苷、5
‑
羧基甲基氨基甲基
‑
2'
‑
O
‑
甲基尿苷、5
‑
羧基甲基氨基甲基
‑2‑
硫尿苷、5
‑
(异戊烯基氨基甲基)尿苷、5
‑
(异戊烯基氨基甲基)
‑2‑
硫尿苷、或5
‑
(异戊烯基氨基甲基)
‑
2'
‑
O
‑
甲基尿苷。22.根据权利要求19至21中任一项所述的组合，其中所述至少一种修饰的核苷酸是糖修饰的核苷酸，优选地2'核糖修饰的RNA核苷酸。23.根据权利要求22所述的组合，其中所述2'核糖修饰的RNA核苷酸是2'
‑
O
‑
甲基化RNA核苷酸。24.根据权利要求23所述的组合，其中所述2'
‑
O
‑
甲基化RNA核苷酸选自：2'
‑
O
‑
甲基化鸟苷(Gm)、2'
‑
O
‑
甲基化尿嘧啶(Um)、2'
‑
O
‑
甲基化腺苷(Am)、2'
‑
O
‑
甲基化胞嘧啶(Cm)、或这些核苷酸中任一种的2'
‑
O
‑
甲基化类似物。25.根据权利要求16至24中任一项所述的组合，其中所述第二组分的核酸包括至少一个或多个三核苷酸M
‑
X
‑
Y基序，其中M选自Gm、Um或Am，优选地其中M是Gm；其中X选自G、A或U，优选地其中X是G；和其中Y选自G、A、U、C、或二氢尿苷，优选地其中Y是C。26.根据权利要求16至25中任一项所述的组合，其中所述第二组分的核酸包括根据式I的核酸序列或由其组成：N
W
‑
M
‑
X
‑
Y
‑
N
Z
(式I)其中N独立地选自G、A、U、C、Gm、Am、Um、Cm或修饰的核苷酸；其中W是0或1至15的整数；
其中Z是0或1至15的整数；其中M、X和Y根据权利要去25中限定进行选择。27.根据权利要求16至26中任一项所述的组合，其中所述第二组分的核酸包括根据式I的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个核酸序列或由其组成，其中根据式I的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个核酸序列中每个是同一的或彼此独立地选择。28.根据权利要求16至27中任一项所述的组合，其中所述第二组分的核酸包含不含三磷酸基团的5'端。29.根据权利要求16至27中任一项所述的组合，其中所述第二组分的核酸包含在5'端的三磷酸基团。30.根据权利要求16至29中任一项所述的组合，其中所述第二组分的核酸的长度为约3至约50个核苷酸、约5至约25个核苷酸、约5至约15个、或约5至约10个核苷酸，优选地约5至约15个核苷酸。31.根据权利要求16至30中任一项所述的组合，其中所述第二组分的核酸的长度为5个核苷酸、6个核苷酸、7个核苷酸、8个核苷酸、9个核苷酸、10个核苷酸、11个核苷酸、12个核苷酸、或13个核苷酸，优选地9个核苷酸。32.根据权利要求16至31中任一项所述的组合，其中所述第二组分的核酸是单链寡核苷酸。33.根据权利要求32所述的组合，其中所述单链寡核苷酸是单链RNA寡核苷酸。34.根据权利要求16至33中任一项所述的组合，其中所述第二组分的核酸包括衍生自细菌tRNA，优选地细菌tRNA
Tyr
的核酸序列，或由其组成。35.根据权利要求34所述的组合，其中所述核酸序列是细菌tRNA
Tyr
或衍生自细菌tRNA
Tyr
，优选地衍生自细菌tRNA
Tyr
的D
‑
环，最优选地大肠杆菌tRNA
Tyr
的D
‑
环。36.根据权利要求16至35中任一项所述的组合，其中所述第二组分的核酸包括与选自SEQ ID NO:85
‑
212的核酸序列或这些序列中任一个的片段同一或具有至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核酸序列，或由其组成。37.根据权利要求36所述的组合，其中所述第二组分的核酸包括与选自SEQ ID NO:85
‑
87、149
‑
212的核酸序列或这些序列中任一个的片段同一或具有至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核酸序列，或由其组成，优选地其中所述第二组分的核酸包括与根据5'
‑
GAG CGmG CCA
‑
3'(SEQ ID NO:85)的核酸序列或其片段同一或具有至少70％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的核酸序列，或由其组成。38.根据前述权利要求中任一项所述的组合，其中所述第一组分的至少一种治疗性RNA选自编码RNA、非编码RNA、环状RNA(circRNA)、RNA寡核苷酸、小干扰RNA(siRNA)、小发夹RNA(shRNA)、反义RNA(asRNA)、CRISPR/Cas9指导RNA、mRNA、核糖开关、核酶、RNA适配体、核糖体RNA(rRNA)、转运RNA(tRNA)、病毒RNA(vRNA)、逆转录病毒RNA、小核RNA(snRNA)、自我复制RNA、复制子RNA、小核仁RNA(snoRNA)、微小R...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：库尔维科公司，
类型：发明
国别省市：