一种硫酸阿米卡星注射液未知杂质的制备及结构鉴定方法技术

本发明专利技术属于药物技术分析领域，具体涉及一种硫酸阿米卡星注射液中未知杂质的制备方法及结构鉴定方法。方法为先将硫酸阿米卡星注射液结晶、经硅胶初步分离，然后采用制备液相色谱梯度分离得到含量大于80％未知杂质，并通过LC

【技术实现步骤摘要】
一种硫酸阿米卡星注射液未知杂质的制备及结构鉴定方法


[0001]本专利技术属于药物技术分析领域，具体涉及一种硫酸阿米卡星注射液中未知杂质的制备及结构鉴定方法。

技术介绍

[0002]硫酸阿米卡星的化学名称为O
‑3‑
氨基
‑3‑
脱氧
‑
α
‑
D
‑
葡吡喃糖基
‑
(1
→
4)
‑
O
‑
[6
‑
氨基
‑6‑
脱氧
‑
α
‑
D葡吡喃糖基
‑
(l
→
6)]‑
N3
‑
(4
‑
氨基
‑2‑
羟基
‑1‑
氧代丁基)
‑2‑
脱氧
‑
L
‑
链霉胺硫酸盐，是由发酵产品卡那霉素合成而得，氨基羟丁酰链结合在卡那霉素A分子的链霉胺部分为其结构特点，其理化、药理学和药动学特点与其它氨基糖苷类抗生素相似，作用位点为细菌核糖体的30S亚单位，抑制细菌蛋白质的合成过程产生杀菌作用。硫酸阿米卡星特点是对许多肠道革兰阴性杆菌所产生的氨基糖苷类钝化酶稳定，此类酶发生钝化，进而失去抗菌活性，耐药菌株产生很少，对其它氨基糖苷类抗生素耐药的菌株对本品仍敏感。阿米卡星可在肾脏皮质细胞和内耳液中积蓄，因而有一定肾毒性和耳毒性。
[0003]国内制剂临床较严重不良反应还有肌肉注射部位产生硬块与脓肿，导致患者无法耐受，而原研制剂无此现象。硫酸阿米卡星是感染性疾病的常规用药，其制剂质量对用药的安全性和有效性影响重大。
[0004]基于氨基糖苷类抗生素的耐药机制，是对卡那霉素进行理性的化学改造而获得阿米卡星，其为广谱半合成氨基糖苷类抗生素，衍生化反应经硅烷化、酯化、酰化、水解、肼解反应和纯化反应，使得卡那霉素分子中脱氧链霉胺上的C
‑
1氨基被L
‑
(
‑
)
‑
4氨基
‑2‑
羟基丁酸(L
‑
AHBH)酰化。卡那霉素的分子结构中除了目标点C
‑
1氨基外，还包含有3个可被不是目标点的L
‑
AHBH酰化的氨基，因此有可能产生4个同分异构体(图1)，但其它3个异构体杂质[A(K
‑
29)、C(K
‑
11)、K
‑
6]几乎均无抗菌活性，应在衍生化过程中予以控制。合成路线如下：
[0005][0006]硫酸阿米卡星注射液中的有关物质如下来源：一为工艺杂质；二为硫酸阿米卡星降解反应生成的降解产物，目前主要有USP、JP、ChP等法定标准收载硫酸阿米卡星注射液，结合各法定标准，硫酸阿米卡星的已知杂质信息见下表1：
[0007]表1硫酸阿米卡星注射液中的有关物质
[0008][0009][0010]根据EMA发布的《抗生素中相关杂质质量标准制定的指导原则》未知单杂的鉴定限为0.2％，其中参比制剂和自研产品中均有一个未知单杂超过0.2％，申请人检测杂质如下
表2所示。
[0011]现有方法和文献对其中的有些杂质进行了归属，但仍有该较大杂质属未知杂质。现有技术并未对其进行控制。硫酸阿米卡星含有未知杂质，将直接影响产品使用的安全性，导致不良反应不可控，为进一步保证药品的质量，对样品中的杂质进行彻底研究，分析其原因，严格限制杂质含量，成为一个亟待解决的技术问题。
[0012]表2参比制剂与样品未知杂质检测
[0013]样品未知杂质含量(％)参比制剂0.40样品0.25加速1月样品0.24加速2月样品0.22加速3月样品0.26加速6月样品0.28

技术实现思路

[0014]针对现有技术存在的不足，本专利技术提供一种硫酸阿米卡星注射液中未知杂质的制备及结构鉴定方法及控制策略制定。
[0015]为了实现本专利技术目的，采用的技术方案如下：
[0016]一种硫酸阿米卡星注射液中未知杂质的制备方法，包括如下步骤：
[0017](1)将硫酸阿米卡星注射液重结晶，过滤，得结晶母液；
[0018](2)将结晶母液过硅胶柱，经石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱，收集Rf为0.45
‑
0.55的组分，浓缩得未知杂质粗品；
[0019](3)将未知杂质粗品加水溶解，配制成溶液，用制备液相色谱仪分离洗脱，检测波长为190
‑
210nm，收集该未知杂质的馏分，干燥得未知杂质；其中流动相A为4
‑
6％乙腈水溶液，流动相B为9
‑
12％乙腈水溶液，二者体积比为48
‑
52：48
‑
52。
[0020]优选地，步骤(1)中所述结晶母液中未知杂质的含量为0.8
‑
1.0％。
[0021]优选地，步骤(2)中所述过硅胶柱前，先将结晶母液减压至干，然后采用干法制样上柱。
[0022]优选地，所述干法制样为将结晶母液减压至干的固体样，加二氯甲烷溶解，再与硅胶混合，减压至干。
[0023]优选地，步骤(2)中所述洗脱为依次采用体积比20:1、10:1、0:1的石油醚
‑
乙酸乙酯混合溶液洗脱。
[0024]优选地，步骤(2)中所述体积比20:1、10:1、0:1的石油醚
‑
乙酸乙酯混合溶液体积各为480
‑
520mL；所述未知杂质粗品中未知杂质的含量为9
‑
12％。
[0025]优选地，步骤(3)中所述制备液相色谱仪分离的色谱条件中流速为1
‑
1.5ml/min；检测波长为200nm，进样体积为0.5
‑
2ml，柱温为35
‑
45℃，杂质在保留时间9
‑
10min出峰。
[0026]优选地，步骤(3)中所述溶液的浓度为20
‑
200mg/ml。
[0027]优选地，步骤(3)中所述流速为1.3mL/min，柱温40℃，进样体积1mL，所述杂质在9.5
‑
10min出峰。
[0028]优选地，步骤(3)中所述流动相A和流动相B中含有缓冲液，缓冲液在流动相A或流动相B中的质量浓度分别为4
‑
6％，所述缓冲液的配制为取辛烷磺酸钠1.8g和无水硫酸钠20.0g，加pH3.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液溶解即得。
[0029]优选地，磷酸盐缓冲液制备为0.2mol/L磷酸二氢钾溶液，用0.2mol/L磷酸溶液调节pH值至3.0。
[0030]优选地，步骤(3)中所述未知杂质的含量≥80％。
[0031]本专利技术的再一目的是提供一种硫酸阿米卡星注射液中未知杂质的结构鉴定方法，所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种硫酸阿米卡星注射液中未知杂质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将硫酸阿米卡星注射液重结晶，过滤，得结晶母液；(2)将结晶母液过硅胶柱，经石油醚和乙酸乙酯混合溶液洗脱，收集Rf为0.45
‑
0.55的组分，浓缩得未知杂质粗品；(3)将未知杂质粗品加水溶解，配制成溶液，用制备液相色谱仪分离洗脱，检测波长为190
‑
210nm，收集该未知杂质的馏分，干燥得未知杂质；其中流动相A为4
‑
6％乙腈水溶液，流动相B为9
‑
12％乙腈水溶液，二者体积比为48
‑
52：48
‑
52。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述结晶母液中未知杂质的含量为0.8
‑
1.0％。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述过硅胶柱前，先将结晶母液减压至干，然后采用干法制样上柱。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述干法制样为将结晶母液减压至干的固体样，加二氯甲烷溶解，再与硅胶混合，减压至干。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述洗脱为依次采用体积比20:1、10:1、0:1的石油醚
‑
乙酸乙酯混合溶液洗脱。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述体积比20:1、10:1、0:1的石油醚
‑
乙酸乙酯混合溶液体积各为480
‑
520mL；所述未知杂质粗品中未知杂质的含量为9
‑
12％。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述制备液相色谱仪分离的色谱条件中流速为1
‑
1.5ml/min；检测波长为200nm，进样体积为0.5
‑
2ml，柱温为35
‑
45℃，杂质在保留时间9
‑
10min出峰。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述溶液的浓度为20
‑
200mg/ml。9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈轶嘉，徐兵勇，董燕华，陈渊，李元飞，黄燕斌，李艳，韩上上，范东东，庹皓，
申请(专利权)人：杭州沐源生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：