一种液相色谱-电喷雾电离串联质谱法检测三斑海马中牛磺酸和精氨酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种液相色谱
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电喷雾电离串联质谱法检测三斑海马中牛磺酸和精氨酸的方法


[0001]本专利技术属于分析检测
，具体涉及三斑海马中牛磺酸和精氨酸的检测。

技术介绍

[0002]《本草纲目》记载:“海马，主难产及血气痛；暖水脏，壮阳道；消瘕块，治疗疮肿毒”，故有温肾壮阳，散结消肿之功效；主治阳痿、肾虚作喘、症瘕积聚、瘰疠痰核、跌打损伤，外治痈肿疗疮。近年来的药理研究表明海马不仅有激素样作用，可增强造血功能，还显示了抗癌、抗衰老、抗疲劳和Ca
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阻断等作用。有学者对雄性小鼠连续摄入膨腹海马(H.abdominalis)酶水解物12周后发现，雄性小鼠的精子活力和精子数量增加，睾酮水平升高，主要源于碱性蛋白酶水解产物和胃蛋白酶水解产物(alcalase hydrolysate and pepsin hydrolysate，ALC和PEP)刺激小鼠睾丸间质细胞(睾酮激素主要由此细胞分泌增殖，提高了血清睾酮水平。海马的多样化药学活性，使其成为近年来的研究热点。
[0003]牛磺酸(Taurine)和精氨酸(Arginine)是海马中含有的活性成分。检测海马中牛磺酸和精氨酸的含量，有助于对海马进行品种鉴定、质量评价、药效活性检测等。但现有的针对牛磺酸、精氨酸等的检测方法，往往需要经过HPLC管柱前衍生化或柱后衍生化方可实现，操作较为繁琐。
[0004]近几年，液相色谱
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电喷雾电离串联质谱法(Liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry，LC
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ESI/MS/MS)广泛地运用于有机小分子化合物例如氨基酸等的检测，其优点为需要的样品的量较少，具有侦测专一性及高敏感度的特点，针对大部分不会被UV吸收的化合物，可利用适当的游离方法使其被质谱仪所检测到。但截至目前并未有利用液相色谱
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电喷雾电离串联质谱法检测三斑海马中牛磺酸和精氨酸的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种液相色谱
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电喷雾电离串联质谱法(LC
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ESI
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MS/MS)检测三斑海马中牛磺酸和精氨酸的方法，该方法无须经过HPLC管柱前或后衍生化即可检测牛磺酸和精氨酸的含量，从而可以对三斑海马中的牛磺酸、精氨酸成分进行定性、定量检测，以及用于三斑海马的质量鉴定等。
[0006]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之一是：
[0007]一种液相色谱
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电喷雾电离串联质谱法检测三斑海马中牛磺酸和精氨酸的方法，包括：
[0008]液相条件：Waters CapLC液相色谱系统；色谱柱Waters Atlantis dC18(3μm，75μm
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50μm)；进样量：1μL；柱温：25℃；流动相为溶剂A和溶剂B的混合液，所述溶剂A为0.1％九氟戊酸(NFPA)的水溶液，所述溶剂B为0.1％九氟戊酸(NFPA)的乙腈(ACN)溶液；采用梯度洗脱程序：流动相中溶剂B的初始比例为5％，随后在25min内由5％上升至60％，随后在5min内
降回5％，接着再平衡5min；流动相流速为6μL/min，待进入色谱柱前流速减至0.3μL/min；
[0009]质谱条件：Waters Micromass Q
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TOF Ultima Global质谱仪；电离方式：+ESI模式；电压4.50kV，脱溶剂温度290℃；飞行时间检测控制在加速电压9.1kV、锥电压100V、撞击能量10eV；质谱扫描范围为m/z 50～500；选择反应监测模式(SRM)；以子离子的离子层析波峰面积比对标准品，进而计算三斑海马中牛磺酸和精氨酸的含量。
[0010]进一步地，采用三斑海马的萃取物进行上述检测；所述萃取方法包括：新鲜三斑海马经冷冻干燥后以酒精萃取，得到酒精萃取物；酒精萃取后剩下的海马以体积比为0.8～1.2:0.8～1.2的二氯甲烷
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甲醇混合液连续萃取若干次，得到的萃取液经浓缩后，以水和乙酸乙酯进行液液相分配萃取若干次，分别收集乙酸乙酯层和水层；合并乙酸乙酯层，得到乙酸乙酯萃取物；水层再用正丁醇进行若干次分配萃取，合并正丁醇层，得到正丁醇萃取物；剩余的水层再除去溶剂，得到水萃取物；再以所述酒精萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物进行牛磺酸和精氨酸的检测。
[0011]进一步地，牛磺酸的质荷比为126，牛磺酸的子离子的质荷比为108。
[0012]优选地，牛磺酸产生子离子所需的最佳撞击能量为27eV。
[0013]进一步地，精氨酸的质荷比为175，精氨酸的子离子的质荷比为158。
[0014]优选地，精氨酸产生子离子所需的最佳撞击能量为33eV。
[0015]一实施例中，牛磺酸和精氨酸的检测限分别为0.313μg/mL和0.174μg/mL。
[0016]一实施例中，牛磺酸和精氨酸的定量限分别为0.625μg/mL和0.435μg/mL。
[0017]优选地，仪器控制的软件为MassLynx V4.0。
[0018]优选地，数据收集的软件为ProteinLynx Global Server 2.1 software packages。
[0019]优选地，质谱仪采用的调机及校正标准品为[Glu]‑
Fibrinopeptide B。
[0020]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之二是：
[0021]三斑海马的水萃取物在制备抗炎药物中的用途，所述水萃取物通过以下方法制备得到：新鲜三斑海马经冷冻干燥后以酒精萃取，酒精萃取后剩下的海马以体积比为0.8～1.2:0.8～1.2的二氯甲烷
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甲醇混合液连续萃取若干次，得到的萃取液经浓缩后，以水和乙酸乙酯进行液液相分配萃取若干次，收集水层，再用正丁醇进行若干次分配萃取，收集水层，再除去溶剂，得到所述水萃取物。
[0022]本专利技术所涉及的设备、试剂、工艺、参数等，除有特别说明外，均为常规设备、试剂、工艺、参数等，不再作实施例。
[0023]本专利技术所列举的所有范围包括该范围内的所有点值。
[0024]本专利技术所述“大约”、“约”或“左右”等指的是所述范围或数值的
±
20％范围内。
[0025]本专利技术中，除有特别说明外，所述方法均在常规环境温度下进行，例如可以为10～30℃。
[0026]本技术方案与
技术介绍
相比，它具有如下优点：
[0027]本专利技术提供了一种特殊的液相色谱
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电喷雾电离串联质谱法检测三斑海马中牛磺酸和精氨酸的方法，无须经过HPLC管柱前或后衍生化方法即可侦测牛磺酸和精氨酸的含量，具体分析步骤简单易操作；所得到的化合物为海马中提取、分离纯化得到，这对海洋天然产物有效本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种液相色谱
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电喷雾电离串联质谱法检测三斑海马中牛磺酸和精氨酸的方法，其特征在于：包括：液相条件：Waters CapLC液相色谱系统；色谱柱Waters Atlantis dC18，3μm，75μm
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50μm；进样量：1μL；柱温：25℃；流动相为溶剂A和溶剂B的混合液，所述溶剂A为0.1％九氟戊酸的水溶液，所述溶剂B为0.1％九氟戊酸的乙腈溶液；采用梯度洗脱程序：流动相中溶剂B的初始比例为5％，随后在25min内由5％上升至60％，随后在5min内降回5％，接着再平衡5min；流动相流速为6μL/min，待进入色谱柱前流速减至0.3μL/min；质谱条件：Waters Micromass Q
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TOF Ultima Global质谱仪；电离方式：+ESI模式；电压4.50kV，脱溶剂温度290℃；飞行时间检测控制在加速电压9.1kV、锥电压100V、撞击能量10eV；质谱扫描范围为m/z 50～500；选择反应监测模式；以子离子的离子层析波峰面积比对标准品，进而计算三斑海马中牛磺酸和精氨酸的含量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：采用三斑海马的萃取物进行检测；所述萃取方法包括：新鲜三斑海马经冷冻干燥后以酒精萃取，得到酒精萃取物；酒精萃取后剩下的海马以体积比为0.8～1.2:0.8～1.2的二氯甲烷
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甲醇混合液连续萃取若干次，得到的萃取液经浓缩后，以水和乙酸乙酯进行液液相分配萃取若干次，分别收集乙酸乙酯层和水层；合并乙酸乙酯层，...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖功满，陈永轩，姚政源，张祐维，蒲卫星，
申请(专利权)人：厦门医学院，
类型：发明
国别省市：