功能增强型内皮细胞的驯化方法及驯化得到的细胞制剂技术

本发明专利技术属于生物技术和生物医药技术领域，涉及使用内皮细胞治疗缺血性糖尿病足的方法以及所用的细胞制剂。针对现有ECs移植治疗缺血性DF时细胞不耐受DF高糖、低营养的局部微环境，细胞容易凋亡等问题，本发明专利技术提供了一种体外驯化诱导功能增强型内皮细胞的方法和用于治疗缺血性糖尿病足的FE

【技术实现步骤摘要】
功能增强型内皮细胞的驯化方法及驯化得到的细胞制剂


[0001]本专利技术属于生物技术和生物医药
，涉及使用内皮细胞治疗缺血性糖尿病足的方法以及所用的细胞制剂；更具体的，涉及一种功能增强型内皮细胞的驯化方法及驯化得到的细胞制剂。

技术介绍

[0002]随着现代生活方式的改变和人口老龄化程度的加剧，糖尿病的发病率越来越高。长期高血糖可引起各种急、慢性并发症的发生。其中，糖尿病足(Diabetic foot，DF)是糖尿病最常见的并发症之一，多由血管病变、神经病变和/或感染等综合因素引发，形成局部顽固性皮肤溃烂和/或深部肌肉组织和骨质的破坏，具有极高的致残和致死率。与一般慢性创面修复相比，DF的治疗过程更为复杂，并且治疗周期长，感染难控制，是糖尿病患者反复住院的主要原因。伴随着糖尿病在全世界范围内的高发，DF也将成为我国慢性疾病治疗的主要社会经济负担。
[0003]糖尿病血管病变引起的下肢血供障碍是DF发生、发展的主要原因，治疗血管病变，改善微循环是DF治疗的关键。由于糖尿病所致下肢血管狭窄、闭塞是一个极其复杂的病理过程，血管腔内介入治本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.功能增强型内皮细胞的诱导驯化方法，其特征在于，包括以下步骤：a、取P2或P3代血管内皮细胞，消化内皮细胞，接种后进行常规维持培养；12～24h后，将维持培养基更换为诱导培养基进行诱导驯化培养；b、诱导驯化培养至细胞密度达到85％以上时，进行传代，从P2代开始检测细胞表面标记蛋白CD34表达，待CD34表达达到90％以上，结束诱导驯化培养，获得FE
‑
ECs；c、对步骤b得到的FE
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ECs扩大培养，收集扩增的FE
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ECs，缓慢加入冻存液，混匀，冻存备用；或将扩增的FE
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ECs重悬于生理盐水中，制备成浓度为1
×
105～1
×
107个/mL的FE
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ECs制剂。2.根据权利要求1所述的功能增强型内皮细胞的诱导驯化方法，其特征在于：步骤a所述的血管内皮细胞为脐静脉内皮细胞、自体骨髓来源内皮细胞或自体间充质干细胞转分化而来的内皮细胞中的任意一种。3.根据权利要求1所述的功能增强型内皮细胞的诱导驯化方法，其特征在于：步骤a所述的维持培养基的组成包括：每500ml基础培养基中添加25ml胎牛血清和5ml内皮细胞生长添加物。4.根据权利要求1所述的功能增强型内皮细胞的诱导驯化方法，其特征在于：步骤a所述的诱导培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员：成福义，邓洪新，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：