数字化多路复用检测和/或定量生物分子的方法及其用途技术

本发明专利技术涉及一种用于检测和/或定量样本中的多种靶标生物分子的数字化多路复用方法，所述生物分子选自DNA、RNA和蛋白质。本发明专利技术还涉及所述数字化多路复用方法的不同应用以及涉及一种试剂盒。及一种试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】数字化多路复用检测和/或定量生物分子的方法及其用途


[0001]本专利技术涉及一种基于具有特定分子设计的等温扩增的用于检测和/或定量样本中多种靶标生物分子(例如，DNA、RNA和蛋白质)的数字化多路复用(multiplex)方法。本专利技术还涉及一种用于疾病诊断的方法和农业诊断的方法，所述疾病选自癌症、神经元疾病、心血管疾病、炎性疾病、自身免疫疾病、由病毒或细菌感染引起的疾病、皮肤病、骨骼肌疾病、牙病和产前疾病。本专利技术还涉及在食品农业食品领域和环境中检测生物标记物(生物分子)的方法。所有这些诊断和检测方法都包括使用本专利技术的数字化多路复用方法。本专利技术还涉及一种用于检测和/或定量多种靶标生物分子的试剂盒，所述试剂盒包括用寡核苷酸、酶和分离剂进行功能化的颗粒。

技术介绍

[0002]若干种生物分子，如DNA、RNA或蛋白质用作有吸引力的诊断、预后或预测的生物标记物。这些分子，特别是核酸已经积累与各种疾病(癌症、神经元或心血管疾病、糖尿病等)密切相关的临床证据。此外，它们存在于体液中，因此可以通过微创液体活检(血清、血浆、尿液)获得。可以反本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种数字化多路复用方法，其用于检测和/或定量样本中多种靶标生物分子，包括以下步骤：a)用一种或多种寡核苷酸对颗粒的悬浮液进行功能化，优选是微颗粒的悬浮液，所述寡核苷酸选自作为转换寡核苷酸(cT)的第一寡核苷酸、作为报告寡核苷酸(rT)的第二寡核苷酸、作为扩增寡核苷酸(aT)的第三寡核苷酸以及作为泄露吸收寡核苷酸(pT)的第四寡核苷酸；b)将步骤a)中功能化的颗粒加上条码，以允许区分靶向多种生物分子的颗粒；c)将步骤b)中获得的颗粒与受测样本接触，以捕获多种靶标生物分子；d)将已捕获或未捕获靶标生物分子的颗粒重悬在包含缓冲液、酶、脱氧核苷三磷酸酯(dNTP)和任选的寡核苷酸的共同扩增混合物中；e)将步骤d)中获得的悬浮液中的颗粒相互分离，使得每个颗粒可独立反应；f)在恒定的温度下温育颗粒，使得每个靶标生物分子触发扩增反应，其在携带靶标的颗粒上产生扩增信号，以及g)检测和/或测量所述颗粒的信号，包括每个颗粒的条码信号和扩增信号。2.根据权利要求1所述的数字化多路复用方法，其中步骤a)中所述颗粒的悬浮液的功能化，优选微颗粒的悬浮液的功能化，是使用第一寡核苷酸和第二寡核苷酸进行的，以及其中第三寡核苷酸和第四寡核苷酸添加到步骤d)的扩增混合物中。3.根据权利要求1或2所述的数字化多路复用方法，其中步骤a)和b)同时进行。4.根据权利要求1至3中任一项所述的数字化多路复用方法，还包括回收所述颗粒的步骤e1)。5.根据权利要求1至4中任一项所述的数字化多路复用方法，其中步骤d)中使用的所述酶选自聚合酶、切口酶或限制酶和外切核酸酶。6.根据权利要求1至5中任一项所述的数字化多路复用方法，其中在步骤d)中获得的悬浮液在步骤e)中分离成液滴，优选分离成油包水乳液液滴，优选液滴的尺寸包含在0.001至100pL之间，优选在0.01至10pL之间，更优选在0.1至5pL之间。7.根据权利要求1至6中任一项所述的数字化多路复用方法，其中步骤f)中的所述恒定温度包含在30至55℃之间，优选在37至52℃之间以及更优选在45至50℃之间。8.根据权利要求1至7中任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：G，
申请(专利权)人：国家健康科学研究所巴黎城市物理化工高等学院巴黎科学与文学联大巴黎大学，
类型：发明
国别省市：