一种细胞游离DNA检测试剂盒、检测系统及操作方法技术方案

本发明专利技术涉及肿瘤智能检技术领域，具体涉及一种细胞游离DNA检测试剂盒、检测系统及操作方法，检测试剂盒包括锁式DNA探针、T4连接酶、phi29 DNA聚合酶和脱氧核糖核苷三磷酸；或由细胞游离DNA、锁式DNA探针、T4连接酶、phi29 DNA聚合酶和脱氧核糖核苷三磷酸形成的DNAzyme水凝胶；所述锁式DNA探针的序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术实现了不需要大型仪器就实现了对细胞游离DNA的现场检测和分析，具有携带方便、成本低廉、操作简单等优势。操作简单等优势。操作简单等优势。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞游离DNA检测试剂盒、检测系统及操作方法


[0001]本专利技术涉及肿瘤智能检测
，尤其涉及一种细胞游离DNA检测试剂盒、检测系统及操作方法。

技术介绍

[0002]在过去的几十年里，DNA水凝胶由于其精确的可编程性、稳定性和生物相容性，在药物释放、组织工程、环境分析、生物传感等领域得到了广泛应用，特别是由纯DNA组成的纯DNA水凝胶，引起了广泛的关注。纯DNA水凝胶的构建一般是通过DNA片段的自组装或酶扩增，因此纯DNA水凝胶比DNA杂交水凝胶具有易于合成的优势。
[0003]细胞游离DNA(cell
‑
free DNA，cfDNA)是一种典型的DNA片段，作为一种无创诊断生物标志物引起了人们的广泛关注。此外，细胞游离DNA在生物医学诊断中发挥着重要作用，如早期诊断癌症、评估肿瘤分期、选择有效治疗方案、监测预后等。基于聚合酶链反应(PCR)的方法如液滴数字PCR(ddPCR)、不对称PCR、乳剂数字PCR和反转录定量PCR(RT
‑
qPCR)被认为是细胞游离DNA检测的金标准。此外，近本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞游离DNA检测试剂盒，其特征在于，包括锁式DNA探针、T4连接酶、phi29 DNA聚合酶和脱氧核糖核苷三磷酸；或由细胞游离DNA、锁式DNA探针、T4连接酶、phi29 DNA聚合酶和脱氧核糖核苷三磷酸形成的DNAzyme水凝胶；所述锁式DNA探针的序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述细胞游离DNA检测试剂盒，其特征在于，所述DNAzyme水凝胶的制备方法包括如下步骤：步骤一、将靶标细胞游离DNA与锁式DNA探针、T4连接酶缓冲溶液经混合、孵育后，冷却至室温，得A处理液；步骤二、在A处理液中加入T4连接酶，经培养、添加phi29 DNA聚合酶缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸孵育和phi29 DNA聚合酶后，再在50
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60℃下加热25
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35min，得B处理液；步骤三、在B处理液中加入90
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100μM血红素和20
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25mM磷酸缓冲液的混合液，3
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6℃条件下放置5
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7h，之后用磷酸盐缓冲液对负载血红素的DNAzyme水凝胶进行冲洗，即得具有微孔结构的DNAzyme水凝胶。3.根据权利要求2所述细胞游离DNA检测试剂盒，其特征在于，所述锁式DNA探针的浓度为0.2
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0.5μM，T4连接酶的含量为10
‑
15U/μL，脱氧核糖核苷三磷酸的含量为8
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12mM，phi29 DNA聚合酶1
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5U/μL。4.根据权利要求2所述细胞游离DNA检测试剂盒，其特征在于，所述步骤一中孵育的温度为85
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100℃，时间为8
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12min。5.根据权利要求2所述细胞游离DNA检测试剂盒，其特征在于，所述步骤二中培养的方法是在16℃下培养8
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【专利技术属性】
技术研发人员：毛晓霞，高洪成，孙慧群，赵文瑞，石梦琴，
申请(专利权)人：安庆师范大学，
类型：发明
国别省市：