一种唾液酸的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种唾液酸的检测方法，该方法包括通过试纸条吸取唾液作为待测样品的取样步骤。本发明专利技术提供了一种试纸通过取口腔唾液作为样本，用神经酸苷酶法制定唾液酸浓度和吸光值的关系曲线，可以测得唾液中唾液酸的含量。本发明专利技术的检测方法简便、快捷，并且准确度高，稳定性好，适于推广使用。适于推广使用。适于推广使用。

【技术实现步骤摘要】
一种唾液酸的检测方法


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种唾液酸的检测方法。

技术介绍

[0002]唾液酸(Sialic acid,SA)，学名为“N
‑
乙酰神经氨酸”，是一类广泛存在于生物系统中的糖类化合物。它最早是由Blix从牛下颌唾液腺粘蛋白中分离得到的，所以命名为唾液酸。唾液酸广泛存在于生物体内细胞膜糖蛋白和脂蛋白中，并在生命体的许多重要生理及生化过程中发挥着重要的作用，如参与细胞识别、生存、繁衍、生物膜流动、细胞内吞作用等。感染、肿瘤、冠心病等危害人类健康的疾患多与SA的异常相关联。而对于健康人群来说，唾液酸是神经发育的重要营养素，作为一种新型的脑营养素，SA的相关研究已经成为热点。
[0003]唾液酸是早期脑发育不可缺少的营养物质，其聚合物可修饰神经细胞粘附分子，从而间接介导神经元的生长、突触连接和记忆的形成。SA的异常见于多种神经系统疾病，例如自闭症。
[0004]自闭症又称孤独症或孤独性障碍，该症一般起病于3周岁以内，主要表现为三大类核心症状，即：社会交往障碍、交流障碍、兴趣狭窄和刻板重复的行为方式，因为临床表现多样，且严重程度不等，自闭症往往被称之为自闭症谱性异常(ASD)。近年来，自闭症增长趋势十分明显，来自不同国家的统计表明，自闭症在总人口的患病比例可达2％甚至更高。自闭症的病因尚不明确，也没有明确的生物学或临床标志物来诊断，但科学界都认为，如果ASD患儿能够早期诊断并给予合理的干预，有可能显著改善他们的病情预后。Xiaolei Y等人通过测定自闭症儿童和正常儿童的血清唾液酸，发现自闭症儿童的血清唾液酸水平明显低于正常儿童，认为可将唾液酸测定作为自闭症筛查的重要措施。
[0005]唾液酸对神经细胞具有保护与稳定作用，有研究发现唾液酸神经黏附分子表达的减少与老年退行性学习能力下降有关系，老年人唾液酸水平的下降会导致老年认知轻度损伤，患者日后有可能进展为痴呆，故轻度认知损伤人群为阿尔兹海默氏病(老年痴呆)的高危人群，早期发现并及时干预对于今后预防老年认知障碍意义深远。
[0006]母体唾液酸水平对子代神经系统发育有重要的影响。有研究显示母乳喂养的婴儿(3～5个月)唾液中游离唾液酸含量几乎高出非母乳喂养婴儿的2倍。在对人类的研究中，Dida通过双盲的研究证实，给0～6个月婴儿补充高唾液酸的奶粉会增加血清中神经节苷脂的含量，并能促进认知能力如手眼协调、表现能力的发育。有学者认为生后早期的唾液酸营养摄入可以为以后长期的认知发育起到奠基的作用。
[0007]唾液酸作为炎性标志物存在于机体。研究表明妊娠期有糖尿病的孕母，其在若干年后血清唾液酸水平比无妊娠期糖尿病的妇女要高，认为唾液酸可以成为预测妊娠后2型糖尿病或代谢综合症的发生标志物。
[0008]综上，唾液酸水平在诊断儿童早期自闭症、老年轻度认知损伤、妊娠糖尿病及孕妇或乳母体内唾液酸监测等方面具有重要的意义。
[0009]目前测定人体唾液酸水平主要通过取血分离血清，用酶联免疫法、高效液相层析
法、神经氨酸苷酶等方法测定。例如，申请号为CN202010200381.3的中国专利技术专利公开了一种稳定、抗干扰能力强的血清唾液酸测定试剂盒及其制备方法和应用。又如申请号为201710330265.1的中国专利技术专利公开了一种唾液酸测定试剂盒及其测定方法。本申请专利技术人通过检索现有技术发现，目前，基本上测定人体唾液酸水平的方法均是通过取血来测定血清中唾液酸。由于取血需要专业的医疗机构和医务人员才可进行，不适合大规模人群取样筛查，且取血有很多条件限制，不适合长期多频次操作。此外，从婴幼儿身上取血也会加大医务工作者的操作难度。
[0010]本专利技术通过直接以口腔唾液为样本来进行人体唾液酸水平的检测，在一定程度上满足了临床检测需求。

技术实现思路

[0011]本专利技术所要解决的问题和提出的技术方案是对现有技术进行改进，提供一种唾液酸的检测方法。本专利技术通过提供一种试纸直接提取口腔唾液作为样本，用神经酸苷酶法制定唾液酸浓度和吸光值的关系曲线，可以快速测得唾液中唾液酸的含量。
[0012]本专利技术所述的神经酸苷酶法测定原理为：样品中的唾液酸在神经氨酸苷酶(NRH)的催化下，生成N
‑
乙酰神经氨酸，再在N
‑
乙酰神经氨酸醛缩酶(NAL)的催化下生成丙酮酸和N
‑
乙酰甘露糖胺。丙酮酸在NADH介导的乳酸脱氢酶(LDH)作用下生成乳酸和NAD
+
，测定NADH吸光度下降值可求得样品中的唾液酸浓度。
[0013]本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：
[0014]本专利技术提供了一种唾液酸的检测方法，该方法包括通过试纸条吸取唾液作为待测样品的取样步骤。
[0015]优选地，所述试纸条由棉质纤维制成。
[0016]优选地，所述试纸条的尺寸为1cm
×
6cm～2cm
×
6cm，厚度为0.4～0.6mm，所述试纸条包括检测区域，该检测区域的尺寸为1cm
×
1cm～2cm
×
2cm。
[0017]优选地，所述取样步骤具体为：采用试纸条吸取待测样品至试纸条的虚线处，然后室温下晾干即可。
[0018]优选地，在取样前还包括绘制标准曲线得到标准曲线方程的步骤。
[0019]优选地，在取样后还包括以下步骤：
[0020]将取样后的试纸条的检测区域剪下置于容器中，并加入Tris缓冲液，在振荡器中震荡后离心，取上清液；
[0021]将上述得到的上清液与混合试剂A混合并用酶标仪在340nm处测得初始β
‑
NADH吸光度；然后加入混合试剂B，继续反应后，用酶标仪在340nm处测得最终β
‑
NADH吸光度；
[0022]根据上述初始吸光度和最终吸光度差值以及标准曲线方程，即可获得待测样品中的唾液酸浓度。
[0023]优选地，所述震荡时间为1h；所述离心条件为：转速10000rmp，时间5min。
[0024]优选地，所述混合试剂A包括如下组分及浓度：Tris
‑
Hcl缓冲液25mM，还原辅酶1二钠(β
‑
NADH)0.05mM，L
‑
乳酸脱氢酶400U/L，N
‑
乙酰神经醛缩酶125U/L；所述混合试剂B包括如下组分及浓度：Tris
‑
Hcl缓冲液25mM，神经酸苷酶1000U/L。
[0025]优选地，在加入混合试剂B的反应条件为：温度37℃，时间2h。
[0026]综上所述，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术与现有技术最大的区别在于，本专利技术可以通过试纸条直接吸取待测样品进行唾液酸水平的测定。本专利技术的检测方法简便，快捷，并且准确度高，重复性好，为现有的唾液酸检测方法提供了良好的替换方法。
[0027]综上所述，本专利技术特殊唾液酸的检测方法，步本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种唾液酸的检测方法，其特征在于，该方法包括通过试纸条吸取唾液作为待测样品的取样步骤。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述试纸条由棉质纤维制成。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述试纸条的尺寸为1cm
×
6cm～2cm
×
6cm，厚度为0.4～0.6mm，所述试纸条包括检测区域，该检测区域的尺寸为1cm
×
1cm～2cm
×
2cm。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述取样步骤具体为：采用试纸条吸取待测样品至试纸条的虚线处，然后室温下晾干即可。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在取样前还包括绘制标准曲线得到标准曲线方程的步骤。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，在取样后还包括以下步骤：将取样后的试纸条的检测区域剪下置于容器中，并加入Tris缓冲液，在振荡器中震荡后离心，取上清液；将上述得到的上清液与混合试剂A混合并用酶标仪在340nm处测得初...

【专利技术属性】
技术研发人员：李长红，顾明星，钱锦，
申请(专利权)人：南京盛德瑞尔医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：