一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流控检测系统技术方案

本发明专利技术涉及一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流控检测系统，该检测系统利用微流控芯片进行检测，所述微流控芯片包括芯片本体，所述芯片本体设有加样孔、主流道、微流道、反应孔；所述反应孔包括阳性质控孔、阳性对照孔和至少一个检测孔；所述加样孔与所述主流道连通；每个反应孔分别通过所述微流道与所述主流道连通；每个所述检测孔中，含有一种非结核分枝杆菌的特异性检测引物组。通过该微流控监测系统，可以在等温条件下对十余种非结核分枝杆菌菌种同时进行特异性检测，具有特异性好、灵敏度高、操作简单、检测迅速等优点，具有良好的临床应用前景。临床应用前景。临床应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流控检测系统


[0001]本专利技术涉及微生物检测
，具体涉及一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流控检测系统。

技术介绍

[0002]非结核分枝杆菌(Non
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tuberculous mycobacteria，NTM)是指除结核分枝杆菌复合群、麻风分枝杆菌外的分枝杆菌，广泛存在于自然的各种环境中，是人类条件致病菌种，已成为威胁人类健康的重要公共卫生问题之一。非结核分枝杆菌易引起肺部及皮肤感染，引发肺部疾病最为常见。自20世纪90年代中期以来，特别是随着艾滋病的流行、器官移植以及免疫抑制剂应用的增多，非结核分枝杆菌的感染患病率不断上升。NTM病与结核病在临床表现和影像学表现上都非常相似，临床医生易将非结核分枝杆菌疾病误诊为结核分枝杆菌病或者真菌感染如“孢子丝菌病模式”，从而采取不当的治疗手段，对患者病情造成不良影响，因此，对感染菌株进行鉴定对于非结核分枝杆菌感染性疾病的诊疗至关重要。
[0003]微流控芯片技术(Microfluidic chip)又称芯片实验室(Lab
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chip)，其最大特点是在一个芯片上可以形成多功能集成体系和数目众多的复合体系的微全分析系统。它的目标是把整个化验室的功能，包括采样、稀释、加试剂、反应、分离、检测等集成在微芯片上。具有检测通量高、样品量和实际消耗量小、污染小、成本低、且便携等诸多优点。
[0004]目前，NTM病主要依靠实验室病原学检测进行诊断，对硝基苯甲酸选择性培养基法和MPB64抗原检测法仅可初步鉴别MTBC与NTM；质谱技术可鉴别至菌种水平，但不可直接用于临床标本，只可用于培养阳性菌株，不利于临床及时诊断。因此，本领域亟需发展一种新的非结核分枝杆菌菌种鉴定方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的微流控检测系统，通过该微流控监测系统，可以在等温条件下对十余种非结核分枝杆菌菌种同时进行特异性检测，具有特异性好、灵敏度高、操作简单、检测迅速等优点，具有良好的临床应用前景。
[0006]为此，第一方面，本专利技术提供一种微流控芯片，其包括芯片本体，所述芯片本体设有加样孔、主流道、微流道、反应孔；
[0007]所述反应孔包括阳性质控孔、阳性对照孔和至少一个检测孔；
[0008]所述加样孔与所述主流道连通；每个反应孔分别通过所述微流道与所述主流道连通；每个所述检测孔中，含有一种非结核分枝杆菌的特异性检测引物组。
[0009]进一步，所述反应孔与所述主流道之间还设有缓冲孔。
[0010]通过设置缓冲孔，从而使进样过程中先充满缓冲孔，再进入检测孔或阳性质控孔、阳性对照孔，可实现待测样本在不同反应孔均匀分配，同时各反应孔独立设置，可杜绝不同反应孔之间的交叉污染。
[0011]进一步，所述阳性质控孔和阳性对照孔相对于所述检测孔设置于所述加样孔的远
端。
[0012]进一步，所述反应孔还包括阴性对照孔。
[0013]在一些实施方式中，所述芯片本体的水平截面为圆形，所述检测孔、阳性质控孔、阳性对照孔以芯片本体的圆心为基点阵列排布设置于所述芯片本体。
[0014]进一步，所述非结核分枝杆菌包括胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、龟分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、猿分枝杆菌、海分枝杆菌、土地分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌。
[0015]进一步，所述非结核分枝杆菌的特异性检测引物组包括正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF、反向环引物LB。
[0016]进一步，所述非结核分枝杆菌的特异性检测引物组包括：
[0017]胞内分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：1；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：2；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：3；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：4；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：5；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：6；
[0018]鸟分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：7；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：8；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：9；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：10；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：11；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：12；
[0019]龟分枝杆菌检测用引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：13；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：14；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：15；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：16；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：17；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：18；
[0020]苏尔加分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：19；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：20；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：21；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：22；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：23；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：24；
[0021]猿分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：25；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：26；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：27；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：28；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：29；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：30；
[0022]海分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：31；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：32；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：33；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：34；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：35；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：36；
[0023]土地分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：37；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：38；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：39；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：40；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：41；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：42；
[0024]戈登分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：43；反
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种微流控芯片，其特征在于，包括芯片本体，所述芯片本体设有加样孔、主流道、微流道、反应孔；所述反应孔包括阳性质控孔、阳性对照孔和至少一个检测孔；所述加样孔与所述主流道连通；每个反应孔分别通过所述微流道与所述主流道连通；每个所述检测孔中，含有一种非结核分枝杆菌的特异性检测引物组。2.如权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述反应孔与所述主流道之间还设有缓冲孔。3.如权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，所述阳性质控孔和阳性对照孔相对于所述检测孔设置于所述加样孔的远端。4.如权利要求1所述的微流控芯片，其特征在于，进一步，所述非结核分枝杆菌包括胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、龟分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、猿分枝杆菌、海分枝杆菌、土地分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌；优选地，所述非结核分枝杆菌的特异性检测引物组包括正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF、反向环引物LB。5.如权利要求4所述的微流控芯片，其特征在于，所述非结核分枝杆菌的特异性检测引物组包括：胞内分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：1；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：2；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：3；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：4；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：5；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：6；鸟分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：7；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：8；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：9；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：10；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：11；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：12；龟分枝杆菌检测用引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：13；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：14；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：15；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：16；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：17；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：18；苏尔加分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：19；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：20；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：21；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：22；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：23；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：24；猿分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：25；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：26；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：27；反向内引物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：28；正向环引物LF，其核酸序列为SEQ ID NO：29；反向环引物LB，其核酸序列为SEQ ID NO：30；海分枝杆菌特异性检测引物组：正向外引物F3，其核酸序列为SEQ ID NO：31；反向外引物B3，其核酸序列为SEQ ID NO：32；正向内引物FIP，其核酸序列为SEQ ID NO：33；反向内引
物BIP，其核酸序列为SEQ ID NO：34；正向环引物LF，其核...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈皇佑，刘教，
申请(专利权)人：广州迪澳医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：