用于配体筛选的微放射性结合测定制造技术

本公开文本涉及可以在微放射性结合测定中测量配体与特异性蛋白质靶标的结合的结合测定。特定地，本公开文本涉及可用于低丰度蛋白质如从健康或患病的人供体样品分离的重组或组织源性蛋白质的微放射性结合测定。或组织源性蛋白质的微放射性结合测定。或组织源性蛋白质的微放射性结合测定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于配体筛选的微放射性结合测定
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2019年10月1日提交的美国临时申请号62/909,101和2020年2月6日提交的美国临时申请号62/970,977的优先权权益，将所述临时申请中的每一个出于任何目的通过引用以其整体并入本文。


[0002]本申请涉及用于针对固定于包被表面上的蛋白质进行配体表征和筛选的微放射性结合测定的组合物和方法。

技术介绍

[0003]放射性结合测定旨在确定控制配体与靶标之间的相互作用的结合参数。此类测定可以用于不同的实验范例，包括饱和、竞争和动力学结合实验，以定义配体
‑
靶标相互作用的不同参数。
[0004]需要针对低丰度生物靶标的高度灵敏的测定。

技术实现思路

[0005]饱和测定旨在测量配体对靶标的亲和力，称为K
d
。K
d
是平衡状态下的解离常数，并且定义为占据给定靶标的50％结合位点所需的配体浓度。为了确定K
d
，将靶蛋白与放射性标记的测试配体一起孵育，其中蛋白质本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种确定测试配体对富集的生物样品中的病理蛋白的结合亲和力(K
d
)的方法，所述方法包括：使微阵列上的所述富集的生物样品的多个等分试样与饱和固定浓度的冷测试配体接触；使所述等分试样与多种浓度的放射性标记的测试配体接触，以在所述放射性标记的测试配体与每个等分试样中的所述病理蛋白之间形成放射性标记的复合物；从所述等分试样中去除未结合的放射性标记的测试配体；检测来自每个等分试样中的所述放射性标记的复合物中的放射性标记的测试配体的信号；以及由每个等分试样中的检测到的信号计算所述K
d
。2.一种确定测试配体对富集的生物样品中的病理蛋白的结合亲和力(K
d
)的方法，所述方法包括：使微阵列上的所述富集的生物样品的多个等分试样与多种浓度的放射性标记的测试配体接触，以在所述放射性标记的测试配体与每个等分试样中的所述病理蛋白之间形成放射性标记的复合物；使所述等分试样与饱和固定浓度的冷测试配体接触；从所述等分试样中去除未结合的放射性标记的测试配体；检测来自每个等分试样中的所述放射性标记的复合物中的放射性标记的测试配体的信号；以及由每个等分试样中的检测到的信号计算所述K
d
。3.一种确定测试配体对富集的生物样品中的病理蛋白的结合亲和力(K
d
)的方法，所述方法包括：使微阵列上的所述富集的生物样品的多个等分试样与多种浓度的放射性标记的测试配体和饱和固定浓度的冷测试配体接触，以在所述放射性标记的测试配体与每个等分试样中的所述病理蛋白之间形成放射性标记的复合物；从所述等分试样中去除未结合的放射性标记的测试配体；检测来自每个等分试样中的所述放射性标记的复合物中的放射性标记的测试配体的信号；以及由每个等分试样中的检测到的信号计算所述K
d
。4.一种确定测试配体对富集的生物样品中的病理蛋白的抑制常数(Ki)的方法，所述方法包括：使微阵列上的所述富集的生物样品的多个等分试样与接近放射性标记的测试配体的K
d
的固定浓度的所述放射性标记的测试配体接触，以在所述放射性标记的测试配体与每个等分试样中的所述病理蛋白之间形成放射性标记的复合物；使所述等分试样与多种浓度的冷测试配体接触；从所述等分试样中去除未结合的放射性标记的测试配体；检测来自每个等分试样中的所述放射性标记的复合物中的放射性标记的测试配体的信号；以及由每个等分试样中的检测到的信号计算所述Ki。
5.一种确定测试配体对富集的生物样品中的病理蛋白的抑制常数(Ki)的方法，所述方法包括：使微阵列上的所述富集的生物样品的多个等分试样与多种浓度的冷测试配体接触；使所述等分试样与接近放射性标记的测试配体的K
d
的固定浓度的所述放射性标记的测试配体接触，以在所述放射性标记的测试配体与每个等分试样中的所述病理蛋白之间形成放射性标记的复合物；从所述等分试样中去除未结合的放射性标记的测试配体；检测来自每个等分试样中的所述放射性标记的复合物中的放射性标记的测试配体的信号；以及由每个等分试样中的检测到的信号计算所述Ki。6.一种确定测试配体对富集的生物样品中的病理蛋白的抑制常数(Ki)的方法，所述方法包括：使微阵列上的所述富集的生物样品的多个等分试样与接近放射性标记的测试配体的K
d
的固定浓度的所述放射性标记的测试配体和多种浓度的冷测试配体接触，以在所述放射性标记的测试配体与每个等分试样中的所述病理蛋白之间形成放射性标记的复合物；从所述等分试样中去除未结合的放射性标记的测试配体；检测来自每个等分试样中的所述放射性标记的复合物中的放射性标记的测试配体的信号；以及由每个等分试样中的检测到的信号计算所述Ki。7.一种评价测试化合物置换与富集的生物样品中的病理蛋白的放射性标记的复合物中的放射性标记的工具配体的能力的方法，所述方法包括：使微阵列上的所述富集的生物样品的多个等分试样与接近放射性标记的工具配体的K
d
的固定浓度的所述放射性标记的工具配体接触，以在所述放射性标记的工具配体与每个等分试样中的所述病理蛋白之间形成放射性标记的复合物；使所述等分试样与单一浓度或多种浓度的冷测试化合物接触；从所述等分试样中去除未结合的放射性标记的工具配体；检测来自每个等分试样中的所述放射性标记的复合物中的放射性标记的工具配体的信号；以及(a)由每个等分试样中的检测到的信号计算所述冷测试化合物的竞争百分比，其中所述冷测试化合物以单一浓度接触；或(b)由每个等分试样中的检测到的信号计算所述冷测试化合物的Ki，其中所述冷测试化合物以多种浓度接触。8...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：AC免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：