一种植物内生菌及其发酵产物制造技术

一种植物内生菌，其特征在于，所述植物内生菌为枯草芽孢杆菌株JBB

【技术实现步骤摘要】
一种植物内生菌及其发酵产物


[0001]本专利技术涉及微生物分离及培养领域。
[0002]
技术介绍

[0003]植物内生菌是指在其生活史的一定阶段或全部阶段，生活于健康植物各种组织内的微生物。在植物体内广泛存在，并在长期的进化过程中与植物形成了互利共生、相互依存的关系。具有促进植物体的生长，赋予植物抗逆性、抗菌、抗病毒、抗病虫害的作用，还能够产生同植物相同或者相似的活性物质。近年来的研究表明, 内生菌能够 参与植物次生代谢及其成分的转化合成, 还能独立 产生丰富的次生代谢产物, 是天然产物的重要来源, 也是宝贵的菌种资源库。
[0004]蓝玉簪龙胆(Gentiana veitchiorum)是常用藏药龙胆花的植物来源之一，具有利胆、抗炎、健胃、降压等作用；龙胆对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和变形杆菌均有不同程度的抑制作用；不仅是中国特有植物，也是西藏地区独特的具有观赏和药用价值的植物龙胆属含有多种化学活性成分，尤其富含环烯醚萜苷类成分
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龙胆苦苷。
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技术实现思路

[0006]本专利技术首次在蓝玉簪龙胆花中分离到一株具有良好的生物活性枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述植物内生菌为JBB
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MBB
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GV79，保藏编号为CCTCC NO:M20191121。
[0007]2. 一种如权力要求1所述植物内生菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、采集选取健康无植物病虫害的蓝玉簪龙胆花，迅速将样品装入灭菌容器中；B、在无菌环境中，去除植物表面附着的微生物如菌丝、孢子，及其上附着的土壤颗粒，并用乙醇及次氯酸钠消毒；C、切片法分离法以及匀浆法处理植物并将其植入LB分离培养基，选取平板上的植物内生菌，进行分离纯化。
[0008]3. 如权利要求2所述一种植物内生菌的制备方法，其特征在于，所述LB培养基配方为，酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，NaCl 10g，蒸馏水 1000mL，121℃灭菌20min。
[0009]4、一种如权利要求1所述的植物内生菌的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括在培养所述植物内生菌后，离心取上清液。
[0010]5、如权利要求2
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4任一项所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、挑取平板上单一菌落接种于5mL液体培养基中，28℃，190r培养24h后，制备得到种子液；B、以1%的接种量接种到50mL培养基中，28℃，190r培养4d；C、菌株发酵液4000rpm离心取上清液。
[0011]6、一种通过如权利要求2
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4任一项所述制备方法制备的植物内生菌发酵物。
[0012]7、一种如权利要求6所述的植物内生菌发酵物在制备抗衰老、抑菌和/或美白的产品中的应用；优选地，所述产品为护肤品、化妆品或清洁剂。
[0013]在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。
[0014]本专利技术所用试剂和原料均市售可得。
[0015]本专利技术的积极进步效果在于：本专利技术首次在蓝玉簪龙胆花中分离到一株具有良好的生物活性枯草芽孢杆菌，其发酵液具有抑制痤疮丙酸杆菌及清除DPPH自由基的能力。在化妆品原料研究中具有很好的应用潜力及开发研究前景。
[0016]生物材料保藏信息本专利技术的枯草芽孢杆菌株命名为JBB
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MBB
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GV79。菌落形态小，呈圆形表面褶皱。菌落为乳白色，不透明。同时该菌的ITS序列比对结果鉴定确定其为一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。该菌株已保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M20191121。保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号，邮编：430072。 保藏日期为2019年12月27日。
[0017]附图说明
[0018]图1为分离得到的枯草芽孢杆菌株的菌落形态。
具体实施方式
[0019]下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术，但并不因此将本专利技术限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0020]实施例1 菌株的分离、筛选及鉴定1、菌株的分离、筛选及鉴定使用灭菌工具采集选取健康无植物病虫害的蓝玉簪龙胆花，迅速将样品装入灭菌容器中。样品运回实验室后，立即在无菌操作台上进行处理。去除植物表面附着的微生物如菌丝、孢子，及其上附着的土壤颗粒。选取适合浓度的乙醇及次氯酸钠植物材料的表面消毒。植株消毒后，选取切片法分离法以及匀浆法处理龙胆花并将其植入LB分离培养基，与对照相对应，进行培养。选取平板上的植物内生菌，进行分离纯化。
[0021]LB培养基配方为：酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，NaCl 10g，蒸馏水 1000mL，121℃灭菌20min。
[0022]经分离得到一株枯草芽孢杆菌株命名为JBB
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MBB
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GV79。菌落形态小，呈圆形表面褶皱。菌落为乳白色，不透明。同时该菌的ITS序列比对结果鉴定确定其为一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。该菌株已保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M20191121。
[0023]2、菌株发酵液制备挑取平板上单一菌落接种于5mL液体培养基中，28℃，190r培养24h后，制备得到种子液。以1%的接种量接种到50mL培养基中，28℃，190r培养4d。菌株发酵液4000rpm离心取上
清液，冻干称重并保存。
[0024]对菌株JBB
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MBB
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GV79（简称T
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79）进行发酵液制备及其成分分析，其结果如表1。
[0025]表1发酵液基本成分分析3、菌株发酵液成分测定1）多酚含量的测定标准品没食子酸和待测样品用水溶解。取0.1 mL没食子酸标准液和待测样品溶液，加入0.5 mL 10% Folin
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Ciocalteu试剂, 混合，室温放置5min后加入0.4 mL 7.5%NaCO3溶液，混合后室温放置60 min，测定765nm 的OD值。由标准液各管OD
520
对没食子含量作标准曲线，根据标准曲线计算样品中多酚含量。
[0026]2）总糖含量的测定标准品葡萄糖和待测样品用水溶解。取葡萄糖标准液或者待测样品溶液0.2 mL，加5 %苯酚0.4 mL，振荡后加浓硫酸2.0 mL，振荡，在室温放置30 min，以空白管为对照测定490nm处的OD值。由标准液各浓度OD
490
对葡萄糖含量作标准曲线，根据标准曲线计算样品中总糖含量。
[0027]4、清除自由基1，1
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二苯基
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三硝基苯肼（DPPH）是一种稳定的氮中心有机自由基。DPPH法于1958年被提出，广泛用于地量测定生物试样、分类物质和食品的抗衰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物内生菌，其特征在于，所述植物内生菌为枯草芽孢杆菌株JBB
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MBB
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GW79，保藏编号为CCTCC NO:M20191121。2.一种如权力要求1所述植物内生菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A、采集选取健康无植物病虫害的蓝玉簪龙胆花，迅速将样品装入灭菌容器中；B、在无菌环境中，去除植物表面附着的微生物如菌丝、孢子，及其上附着的土壤颗粒，并用乙醇及次氯酸钠消毒；C、切片法分离法以及匀浆法处理植物并将其植入LB分离培养基，选取平板上的植物内生菌，进行分离纯化。3.如权利要求2所述一种植物内生菌的制备方法，其特征在于，所述LB培养基配方为，酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，NaCl 10g，蒸馏水 1000m...

【专利技术属性】
技术研发人员：周婧，李俊，章漳，
申请(专利权)人：伽蓝集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：