锡金报春愈伤组织的培养方法技术

本发明专利技术涉及植物组织培养，公开了一种锡金报春愈伤组织的培养方法。步骤包括：(1)诱导愈伤组织：将锡金报春无菌苗的叶片、根或茎接种到诱导培养基中，得到锡金报春的愈伤组织；(2)增殖培养：将锡金报春的愈伤组织接种到增殖培养基中，培养25

【技术实现步骤摘要】
锡金报春愈伤组织的培养方法


[0001]本专利技术属于植物组织培养方法
，具体涉及一种锡金报春愈伤组织的培养方法。

技术介绍

[0002]报春花是世界著名观赏花卉，其花色多样，观赏价值高，和杜鹃，龙胆、绿绒蒿称为四大典型高山花卉。全世界约有500多种，中国拥有的报春花种类繁多，分布广泛，主要分布在云南和西藏南部，但大多资源还处于野生状态，采集研究困难，很多种类待开发利用。
[0003]锡金报春(Primula sikkimensis)，又称钟花报春，是报春花科报春花属植物，花黄色，钟状，聚生于花葶顶端，生长于海拔3200
‑
4400米的林缘湿地、沼泽草甸和水沟边，分布在我国四川西部、云南西北部和西藏等地，是横断山区和东喜马拉雅地区的特有种。另外，锡金报春也是一种常见的藏药，主要含有槲皮素、山奈酚和杨梅素等黄酮类成分，是藏药“相哲色保”其中的一种原植物，主要用于清热，消肿，止泻，活血。
[0004]目前，国内外对锡金报春的化学成分、药理作用及遗传变异等研究较多，对其植物组织培养和无菌繁殖应用研究较少。
[0005]贾茵等(CN111492979A)诱导出了小报春(Primula forbesii)的愈伤组织，但不同种属的报春所需要的诱导培养基配方及增殖培养基配方均不一样。张启翔等(CN101965796)专利技术了一种岩生报春(Primula saxatilis)的快速繁殖的方法，即从丛生芽的叶片和叶炳中诱导出愈伤组织，然后再使愈伤组织分化出不定芽，主要是为了获得快速获得无菌苗，但是其愈伤组织的诱导率不超过30％，且未对愈伤组织的增殖率进行研究。
[0006]邓平平(六种报春花属植物的组织培养与多倍体诱导研究，2006)对锡金报春的叶片进行了愈伤组织诱导，但其诱导率非常低，最高仅为16.5％，而且诱导出的愈伤组织状态为紧密或透明松散、呈褐色，难以继续进行继代或增殖培养。再者，锡金报春目前仍属于野生种，国内未见有大规模商业化的引种栽培。
[0007]因此，需要开发一种培养方法，能快速获得大量锡金报春愈伤组织，满足药用、食用或日化用品的原料使用需求。

技术实现思路

[0008]本专利技术旨在提供一种锡金报春愈伤组织的培养方法。
[0009]锡金报春愈伤组织的培养方法，步骤包括：
[0010](1)诱导愈伤组织：将锡金报春无菌苗的叶片、根或茎接种到诱导培养基中，得到锡金报春的愈伤组织；优选的，培养时间为10
‑
25天；
[0011](2)增殖培养：将锡金报春的愈伤组织接种到增殖培养基中，培养25
‑
60天。
[0012]步骤(1)中，所述诱导培养基为含有1
‑
5mg/mL 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和1
‑
3mg/mLα
‑
萘乙酸的1/2MS培养基，或者含有1
‑
5mg/mL 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和1
‑
3mg/mL激动素的1/2MS培养基，或者含有0.5
‑
2mg/mL 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和0.5
‑
2mg/mLα
‑
萘乙酸的B5培养基。且还含
有25
‑
35g/L蔗糖。优选的，还含有结冷胶3
‑
3.5g/L。
[0013]所述诱导培养基的pH为5.6
‑
6，优选为5.7
‑
5.8。
[0014]更优选的，优选的，所述诱导培养基为含有1
‑
5mg/mL 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和1
‑
2mg/mLα
‑
萘乙酸的1/2MS培养基，或者含有3
‑
5mg/mL 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和1.5
‑
2.5mg/mL激动素的1/2MS培养基，或者含有0.5
‑
1.5mg/mL 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和0.5
‑
1.5mg/mLα
‑
萘乙酸的B5培养基。
[0015]在本专利技术的优选方式中，诱导培养基为含有1
‑
4mg/mL 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和1
‑
2mg/mLα
‑
萘乙酸的1/2MS培养基，或者含有4mg/mL 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和2mg/mL激动素的1/2MS培养基，或者含有1mg/mL 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和1mg/mLα
‑
萘乙酸的B5培养基。并且诱导培养基含有30g/L蔗糖；还含有结冷胶3
‑
3.5g/L。
[0016]优选的，步骤(1)中，将锡金报春无菌苗的根接种到诱导培养基中，得到锡金报春的愈伤组织。
[0017]步骤(2)中，所述的增殖培养基为：
[0018](a)含有1
‑
7mg/L 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和0.3
‑
4mg/L激动素的1/2MS培养基；或者，
[0019](b)；含有2
‑
6mg/L 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和1
‑
4mg/L激动素的SH培养基或者B5培养基；或者，
[0020](c)含有0.5
‑
2mg/mL 6
‑
苄氨基腺嘌呤(6BA)和0.3
‑
1.5mg/mLα
‑
萘乙酸的SH培养基或B5培养基；或者，
[0021](d)含有0.3
‑
1.5mg/mL噻苯隆(TDZ)和0.1
‑
0.5mg/Lα
‑
萘乙酸(NAA)SH培养基或B5培养基。
[0022]所述的增殖培养基中还含有25
‑
35g/L蔗糖。优选的，还含有结冷胶3
‑
3.5g/L。所述增殖培养基的pH为5.6
‑
6，优选为5.7
‑
5.8。
[0023]优选的，组合(a)中，使用1/MS培养基时，2,4
‑
二氯苯氧乙酸含量为2
‑
6mg/mL，激动素含量为0.5
‑
3mg/mL；使用SH培养基或者B5培养基时，2,4
‑
二氯苯氧乙酸含量为3.5
‑
4.5mg/mL，激动素含量为2
‑
3mg/mL；更优选的，使用1/MS培养基时，2,4
‑
二氯苯氧乙酸含量为2
‑
5mg/mL，激动素含量为0.5
‑
3mg/mL。
[0024]优选的，组合(b)中，2,4
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.锡金报春愈伤组织的培养方法，其特征在于，步骤包括：(1)诱导愈伤组织：将锡金报春无菌苗的叶片、根或茎接种到诱导培养基中，得到锡金报春的愈伤组织；(2)增殖培养：将锡金报春的愈伤组织接种到增殖培养基中，培养25
‑
60天；步骤(1)中，所述诱导培养基为：含有1
‑
5mg/mL 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和1
‑
3mg/mLα
‑
萘乙酸的1/2MS培养基，或者含有1
‑
5mg/mL 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和1
‑
3mg/mL激动素的1/2MS培养基，或者含有0.5
‑
2mg/mL 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和0.5
‑
2mg/mLα
‑
萘乙酸的B5培养基；步骤(2)中，所述的增殖培养基为：(a)含有1
‑
7mg/L 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和0.3
‑
4mg/L激动素的1/2MS培养基；或者，(b)；含有2
‑
6mg/L 2,4
‑
二氯苯氧乙酸和1
‑
4mg/L激动素的SH培养基或者B5培养基；或者，(c)含有0.5
‑
2mg/mL 6
‑
苄氨基腺嘌呤(6BA)和0.3
‑
1.5mg/mLα
‑
萘乙酸的SH培养基或B5培养基；或者，(d)含有0.3
‑
1.5mg/mL噻苯隆(TDZ)和0.1
‑
0.5mg/Lα
‑
萘乙酸SH培养基或B5培养基。2.根据权利要求1所述的锡金报春愈伤组织的培养方法，其特征在于，步骤(1)中，将锡金报春无菌苗的根接种到诱导培养基中，得到锡金报春的愈伤组织。3.根据权利要求1所述的锡金报春愈伤组织的培养方法，其特征在于，所述的诱导培养基中还含有25
‑
35g/L蔗糖。4.根据权利要求1所述的锡金报春愈伤组织的培养方法，其特征在于，步骤(2)所述的增殖培养基，组合(a)中，使用1/MS培养基时，2,4
‑
二氯苯氧乙酸含量为2
‑
6mg/mL，激动素含量为0.5
‑
3mg/mL；使用SH培养基或者B5培养基时，2,4
‑
二氯苯氧乙酸含量为3.5
‑
4.5mg/mL，激动素含量为2
‑
3mg/mL；组合(b)中，2,4
‑
二氯苯氧乙酸含量为3.5
‑
4.5mg/mL，激动素含量为2
‑
3mg/mL；组合(c)中，6
‑
苄氨基腺嘌呤含量为0.8
‑
1.2mg/mL，α
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李惠玲，杨天宸，邹岳，
申请(专利权)人：伽蓝集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：