一种海水芽孢杆菌及其筛选方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种海水芽孢杆菌及其筛选方法和应用，该海水芽孢杆菌保藏号为CCTCC NO:M 20211701。本申请的海水芽孢杆菌的筛选方法，包括以下步骤：采集红树林植物根部污泥；将红树林植物根部污泥加入中磷酸缓冲液中，振荡，取上清液，涂布至含盐LB固体培养基中培养后，纯化分离即得海水芽孢杆菌。本发明专利技术的海水芽孢杆菌筛选自红树林根际菌，在盐胁迫下能促进植物的生长。进植物的生长。进植物的生长。

【技术实现步骤摘要】
一种海水芽孢杆菌及其筛选方法和应用


[0001]本专利技术涉及属于微生物菌株
，尤其涉及一种海水芽孢杆菌及其筛选方法和应用。

技术介绍

[0002]土壤盐渍化是制约生态防护林工程、沿海滩涂绿化和海水灌溉农林业发展的瓶颈，已经成为了影响全世界作物产量的主要限制因素。土壤微生物在调节植物根际环境、调控生长发育和提高系统生产力等方面具有重要作用。近年来，由微生物驱动的植物胁迫耐受性受到了广泛关注。通过识别和利用能与植物相互作用的土壤微生物来减轻盐胁迫，为盐渍区改良提供了一种新策略。
[0003]从耐盐植物根际挖掘耐盐微生物来提高非耐盐植物的耐盐性的研究主要集中在陆生作物，缺乏从水生环境筛选菌株来提高作物抗盐性的研究。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提出了一种海水芽孢杆菌及其筛选方法和应用，以解决现有技术中存在的技术问题。
[0005]第一方面，本专利技术提供了一种海水芽孢杆菌，所述海水芽孢杆菌保藏号为 CCTCC NO:M 20211701。
[0006]第二方面，本专利技术还提供了一种所述的海水芽孢杆菌的筛选方法，包括以下步骤：
[0007]采集红树林植物根部附着的污泥；
[0008]将红树林植物根部附着的污泥加入中磷酸缓冲液中，振荡，取上清液，涂布至LB固体培养基中培养后，纯化分离即得海水芽孢杆菌。
[0009]优选的是，所述的海水芽孢杆菌的筛选方法，所述LB固体培养基含有0.5～2 mol.L
‑1的NaCl。
[0010]优选的是，所述的海水芽孢杆菌的筛选方法，振荡速率为150～200rpm、时间为25～35min。
[0011]第三方面，本专利技术还提供了一种所述的海水芽孢杆菌在盐胁迫下促进植物生长的应用。
[0012]本专利技术的一种海水芽孢杆菌及其筛选方法和应用，相对于现有技术具有以下有益效果：本专利技术的海水芽孢杆菌保藏号为CCTCC NO:M 20211701，该海水芽孢杆菌筛选自红树林根际菌，该海水芽孢杆菌在盐胁迫下能促进植物的生长。
附图说明
[0013]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以
20211701。
[0035]上述的海水芽孢杆菌的筛选方法，包括以下步骤：
[0036]S1、从北海山口红树林国家自然保护区采集红树林植物根际附着污泥；
[0037]S2、称取10g红树林植物根际附着污泥，然后加入到100mL灭菌的磷酸缓冲液，置于恒温摇床中于180rpm下振荡30min，取上清液进行稀释，得到稀释液，取100μL稀释液涂布到含1mol.L
‑1NaCl的LB固体培养基中，于28℃下恒温培养2天，挑选形态大小不一的菌斑，纯化后获得纯菌株，然后于
‑
80℃下保存在质量浓度为25％甘油中。
[0038]菌株分子鉴定
[0039]实施例1中的菌株在含1M NaCl的LB培养基上的生长状态如图1所示，该菌株菌落为白色略显微黄色，半透明，表面光滑，边缘不规则圆形。
[0040]利用Qiagen试剂盒提取细菌的DNA，引物27F(其基因序列为 5
′‑
GTTTGATCCTGGCTCAG
‑3′
(SEQ ID NO:1))和1492R(其基因序列为5
′‑ꢀ
GGTTACCTTGTTACGACTT
‑3′
(SEQ ID NO:2))扩增16S rRNA片段，PCR条件：94℃，5min；94℃，30s，55℃，30s，72℃，1min，共30个循环； 72℃，8min。PCR跑胶确认有1500pb条带出现，即可送至生物公司测序，测序结果在NCBI进行BLAST分析，运用MEGA 7.0对序列进行Clustal比对，采用邻接法对系统发育进化树进行构建，以此确定菌株的分类学地位。根据 16S rDNA测序结果与NCBI数据库BLAST比对结果，对菌株JHW7(即本申请的海水芽孢杆菌)与参比菌株进行系统发育进化分析，利用MEGA 5.0构建系统发育进化树，结果如图2所示。从图2可以看出菌株JHW7与Rossellomoreaaquimaris(原来拉丁名：Bacillus aquimaris)亲缘关系最近。结合形态学分析，菌株鉴定为海水芽孢杆菌。
[0041]接种菌株对作物耐盐影响的试验
[0042]将实施例1中的菌株置于含有1mol.L
‑1NaCl的液体LB培养基中，然后于摇床中在28℃、180rpm条件下培养24h后，于10000rpm下离心5min，倒掉上层清液，用无菌水轻轻清洗菌体，再用无菌水重悬菌体，调整OD600为107CFUmL
‑1。
[0043]供试作物种子：水稻(Oryza Sativa spp.japonica,var nippobare)，玉米(Zea mayscv.Zhengdan958),绿豆(Vigna radiata)；将供试种子用质量浓度为1％次氯酸钠消毒10min，再用无菌水清洗5次。将供试种子浸泡在上述菌液(即上述OD600 为107CFU mL
‑1的菌液)中2h，取出放在培养皿中，在超净工作台吹风1h。取浸泡菌液后的饱满的种子均匀的平铺在0.8％琼脂培养基上(含100mM NaCl) 上，其中对照为浸泡无菌水(即不含有本申请的菌株的水)的种子，水稻20粒 /培养皿，玉米和绿豆15粒/培养皿，设置3个重复。置于人工气候箱28℃，12h 光/12h暗，玉米和绿豆培养5d，水稻培养7d，再测定种子的根长、苗高和鲜重， *表示对照与接种处理t检验差异显著(P<0.05)，结果如图3
‑
8所示。图3
‑
8中接种即表示供试作物种子经过实施例1中海水芽孢杆菌液浸泡处理后的种子。
[0044]图3显示了对照与接种处理后水稻的根长、苗高和鲜重，结果显示，水稻种子经过海水芽孢杆菌液浸泡处理后根长、苗高和鲜重显著大于对照组。
[0045]图4显示了对照与接种处理后水稻的生长状态图，图4中上方一排代表接种处理后的水稻，下方一排代表对照组的水稻。
[0046]图5显示了对照与接种处理后玉米的根长、苗高和鲜重，结果显示，水稻种子经过海水芽孢杆菌液浸泡处理后根长、苗高显著大于对照组。
[0047]图6显示了对照与接种处理后玉米的生长状态图，图4中上方一排代表对照组的玉米，下方一排代表接种处理后的玉米。
[0048]图7显示了对照与接种处理后绿豆的根长、苗高和鲜重，结果显示，水稻种子经过海水芽孢杆菌液浸泡处理后根长、苗高和鲜重显著大于对照组。
[0049]图8显示了对照与接种处理后绿豆的生长状态图，图4中上方一排代表对照组的绿豆，下方一排代表接种处理本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种海水芽孢杆菌，其特征在于，所述海水芽孢杆菌保藏号为CCTCC NO:M 20211701。2.一种如权利要求1所述的海水芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：采集红树林植物根部附着的污泥；将红树林植物根部附着的污泥加入中磷酸缓冲液中，振荡，取上清液，涂布至LB固体培养基中培养后，纯化分离即得海水芽孢杆菌。3...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡林，黄雪，粱金英，何丽萍，李其玲，
申请(专利权)人：南宁师范大学，
类型：发明
国别省市：