一种产细菌漆酶的基因工程菌及其构建方法与应用技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，提供了一种产细菌漆酶的基因工程菌。本发明专利技术还提供了一种上述产细菌漆酶的基因工程菌的构建方法，方法如下：优化细菌漆酶基因密码子、全基因合成、大肠杆菌细胞转化。同时，本发明专利技术还提供了一种上述产细菌漆酶的基因工程菌在靛蓝类和偶氮染料脱色中的应用。本发明专利技术的优点在于：本发明专利技术构建的产细菌漆酶的基因工程菌能够在光照条件下高效表达细菌漆酶蛋白Lac1。在无介体添加时，Lac1可在1小时内对靛蓝类染料靛蓝胭脂红脱色率达到99.7％，可在24小时内对偶氮类染料刚果红的脱色效率达到99.5％，Lac1的无介体脱色应用避免了介体的二次污染，有较大的工业化应用潜力及经济价值。应用潜力及经济价值。应用潜力及经济价值。

【技术实现步骤摘要】
一种产细菌漆酶的基因工程菌及其构建方法与应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及一种产细菌漆酶的基因工程菌及其构建方法与在染料脱色中的应用。

技术介绍

[0002]漆酶(laccase，EC 1.10.3.2)是一大类含铜的氧化酶，可以催化多种酚类物质和非酚类化合物的氧化，同时可以将氧分子还原为水。漆酶广泛分布在自然界中，在细菌、真菌、古菌和动植物中均存在，其作用底物广泛，催化效率高，在生物制药、造纸纸浆漂白、食品品质改善、纺织染料处理、生物传感器研发等方面具有极其重要的潜在开发价值，近年来成为了酶工程和环境修复工程等领域的研究热点。
[0003]目前纺织印染行业中大量使用人工合成的活性染料对纺织品如棉、麻等织物进行染色，但是当前的染色工艺会产生大量污水，其中含有较多的活性染料和大量氯离子等，增大了污水处理的难度。随着我国经济不断发展，印染纺织品的需求不断增大，随之而来的污水直接排放或者不完全处理则会对生态环境造成极大的破坏。对这些印染废水的传统处理方案如物理吸附或化学处理等方法在成本较高，能耗较大，并且容易产生各种副本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产细菌漆酶的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的产细菌漆酶的基因工程菌，其特征在于，还包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。3.一种产细菌漆酶的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)细菌漆酶基因密码子的优化选择基因序列如SEQ ID NO.1所示的海单胞菌来源的细菌漆酶基因进行密码子优化，以得到适合在大肠杆菌中高效表达的基因序列；(2)全基因合成将密码子优化后的细菌漆酶序列命名为Lac1并进行全基因合成，基因序列如SEQ ID NO.2所示；同时，将光诱导基因序列命名为light并进行全基因合成，基因序列如SEQ ID NO.3所示；(3)工程菌的获得
①
以密码子优化后的细菌漆酶基因Lac1序列为模板，以引物Lac1
‑
F和引物Lac1
‑
R进行PCR扩增；以光诱导基因序列light为模板，以引物light
‑
F和引物light
‑
R进行PCR扩增；同时，以表达载体pET22b基因序列为模板，以引物22b
‑
F和引物22b
‑
R进行PCR扩增；其中，所述Lac1
‑
F和引物Lac1
‑
R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4、5所示，light
‑
F和引物light
‑
R的核苷酸序列如SEQ ID NO.6、7所示，22b
‑
F和引物22b
‑
R的核苷酸序列如SEQ ID NO.8、9所示；
②
将上述各PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，并将回收获得的序列进行重组连接，获得光诱导表达载体pET22b
‑
light
‑
Lac1；将该光诱导表达载体经过热激转化法转化入BL21(DE3)菌株，并涂布于含氨苄青霉素的LB培养基平板；挑取不同的重组转化子单克隆进行PCR鉴定，鉴定为阳性的菌株即为目标所需的产细菌漆酶的基因工程菌BL21(DE3)
‑
pET22b
‑
light
‑
Lac1。4.根据权利要求3所述的产细菌漆酶的基因工程菌的构建方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：常飞，陈华，葛春梅，吴丽雅，
申请(专利权)人：合肥学院，
类型：发明
国别省市：