一种提高衣藻半萜含量的转基因系统及其应用技术方案

本发明专利技术提供了一种提高衣藻半萜含量的转基因系统及其应用，所述提高衣藻半萜含量的转基因系统包括：含有胆碱激酶基因的重组载体和/或含有异戊烯基磷酸激酶基因的重组载体；所述胆碱激酶基因包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；所述异戊烯基磷酸激酶基因包括SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。本发明专利技术还提供了一种提高衣藻半萜含量的转基因衣藻及其构建方法，得到的转基因衣藻的半萜含量得到大幅提高，并且可以进一步构建产柠檬烯的莱茵衣藻工程藻株，为在莱茵衣藻中合成其他高价值的萜类物质提供了参考。供了参考。供了参考。

【技术实现步骤摘要】
一种提高衣藻半萜含量的转基因系统及其应用


[0001]本专利技术属于生物基因工程
，尤其涉及一种提高衣藻半萜含量的转基因系统及其应用。

技术介绍

[0002]萜类化合物是自然界中最大的一类化学物质，目前已知的萜类化合物超过8万种。由于其在医药、农业、香精、香料、化妆品、癌症治疗以及药物制备等领域中具有重要的应用价值，因此备受关注。
[0003]所有天然产生的萜类化合物都是由两种C5萜类前体，即异戊烯基二磷酸(IPP)及其异构体二甲基丙烯基二磷酸(DMAPP)衍生而来。异戊二烯前体DMAPP和IPP通过以下两种途径之一自然合成：甲羟戊酸(MVA)途径包括从乙酰辅酶A生成IPP的6个反应，IPP再由异戊二烯焦磷酸异构酶(IDI)异构化产生DMAPP；非甲羟戊酸途径(MEP或DXP途径)由等摩尔量的丙酮酸和甘油醛3
‑
磷酸(G3P)为前体，通过7个反应，最终生成的DMAPP和IPP比例约为5:1。而异戊烯醇利用IUP途径(合成路径示意图如图1所示)，通过两步法即可合成C5类异戊二烯前体(IPP或DMAPP)，显著减少了本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高衣藻半萜含量的转基因系统，其特征在于，所述提高衣藻半萜含量的转基因系统包括：含有胆碱激酶基因的重组载体和/或含有异戊烯基磷酸激酶基因的重组载体；所述胆碱激酶基因包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；所述异戊烯基磷酸激酶基因包括SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的提高衣藻半萜含量的转基因系统，其特征在于，所述重组载体还包括叶绿体定位信号肽基因；优选地，所述重组载体还包括筛选标记基因。3.一种提高衣藻半萜含量的转基因衣藻的构建方法，其特征在于，所述提高衣藻半萜含量的转基因衣藻的构建方法包括：将权利要求1或2所述的提高衣藻半萜含量的转基因系统转化至衣藻细胞中，筛选，并进行验证。4.根据权利要求3所述的提高衣藻半萜含量的转基因衣藻的构建方法，其特征在于，所述提高衣藻半萜含量的转基因系统的构建方法包括：将叶绿体定位信号肽基因连接到表达载体中，再扩增胆碱激酶基因或异戊烯基磷酸激酶基因，分别连接到所述叶绿体定位信号肽基因的3
’
端；连接产物转化后进行筛选，验证后，得到所述的提高衣藻半萜含量的转基因系统；优选地，所述表达载体包括pOpt2；优选地，所述连接的方法包括无缝克隆。5.根据权利要求3或4所述的提高衣藻半萜含量的转基因衣藻的构建方法，其特征在于，所述转化的方法包括珠磨法或电转法；优选地，所述转化前还包括对提高衣藻半萜含量的转基因系统进行线性化的步骤；优选地，所述衣藻细胞包括CC4533藻株；优选地，所述筛选的方法包括PCR测序、RT
‑
PCR分析或半萜含量测定中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述半萜含量测定的方法包括液相色谱
‑
质谱联用；优选地，进行所述半萜含量测定时，使用3
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甲基
‑3‑
丁烯
‑1‑
醇和/或3
‑
甲基
‑2‑
丁烯
‑1‑
醇饲喂筛选后的衣藻细胞；优选地，所述3
‑
甲基
‑3‑
丁烯
‑1‑
醇的使用浓度为1～30mM，优选为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡章立，赵美丽，贾彬，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：