磷酸激酶辅助的DNA中5-羟甲基尿嘧啶修饰定位分析方法和试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种磷酸激酶辅助的DNA中5

【技术实现步骤摘要】
磷酸激酶辅助的DNA中5
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羟甲基尿嘧啶修饰定位分析方法和试剂盒


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种磷酸激酶辅助的DNA中5
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羟甲基尿嘧啶修饰定位分析方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]5‑
羟甲基尿嘧啶(5hmU)是一种胸腺嘧啶碱基修饰，存在于从噬菌体到哺乳动物的多种生物基因组中。长期以来，5hmU被认为是胸腺嘧啶被活性氧自由基氧化而产生的DNA损伤。酶介导的5hmU核苷酸掺入到噬菌体基因组中表明了5hmU是具有重要的生物学功能的。DNA复制后5hmU修饰的形成是通过胸腺嘧啶羟甲基化产生的，在哺乳动物中TET和JBP都可以介导T羟甲基化生成5hmU。还有一种可以产生5hmU的机制，通过AID或者mRNA编辑载脂蛋白B(apolipoprotein B mRNA
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editing catalytic polypeptidelike，APOBEC)家族蛋白使5hmC脱氨基生成5hmU。胸腺嘧啶羟甲基化生成5hmU可以形成5hmU:A碱基配对，而5hmC脱氨基生成5hm本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磷酸激酶辅助的DNA中5
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羟甲基尿嘧啶修饰定位分析方法，其特征在于，所述方法包括：采用5
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羟甲基尿嘧啶磷酸激酶5hmUDK蛋白对DNA进行磷酸化反应，获得磷酸化DNA样品；将所述磷酸化DNA样品进行点击化学反应以进行生物素标记，获得标记后样品；将所述标记后样品通过链霉亲和素磁珠的富集后进行测序，获得5
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羟甲基尿嘧啶的位点信息。2.根据权利要求1所述的一种磷酸激酶辅助的DNA中5
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羟甲基尿嘧啶修饰定位分析方法，其特征在于，所述磷酸化反应的温度为36～38℃，所述磷酸化反应的时间为0.5～2h。3.根据权利要求1所述的一种磷酸激酶辅助的DNA中5
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羟甲基尿嘧啶修饰定位分析方法，其特征在于，所述磷酸化反应中，反应体系成分包括5
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羟甲基尿嘧啶磷酸激酶5hmUDK蛋白、DNA和反应缓冲液。4.根据权利要求3所述的一种磷酸激酶辅助的DNA中5
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羟甲基尿嘧啶修饰定位分析方法，其特征在于，所述反应缓冲液包括终浓度为45～55mM的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris
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HCl)，8～12mM DTT，8～12mM MgCl2和0.5～2mM叠氮
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ATP。5.根据权利要求1所述的一种磷酸激酶辅助的DNA中5
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羟甲基尿嘧啶修饰定位分析方法，其特征在于，所述点击化学反...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁必锋，马铖杰，冯钰锜，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：