一种基于多聚赖氨酸大分子（DGL）结构的酶标二抗制备及其方法技术

本发明专利技术涉及生物工程技术领域，且公开了一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法，包括以下步骤：S1、目标分子骨架的选择：选取多聚赖氨酸大分子DGL(D1

【技术实现步骤摘要】
一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体为一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法。

技术介绍

[0002]目前国内科研机构以及临床诊断机构所使用的免疫组化即用型二抗检测系统主要有两种，一种是通过卵白素－生物素或者链霉素－生物素之间的高亲和力而对检测信号进行放大的二抗检测系统(生物素检测系统)；另一种是通过在聚合物上耦联多个抗体和酶的方式而对信号进行放大的二抗检测系统(“酶－聚合物—抗体”检测系统)。生物素检测系统有时会受到待测组织的内源性生物素的干扰而产生假阳性结果，从而会影响结果的准确性，因此此种二抗检测系统在国内的应用逐渐在减少，特别是在临床辅助诊断的应用日益减少；“酶－聚合物—抗体”检测系统，不会受到待测组织内源性生物素的干扰，染色背景低，操作步骤及时间较少，集准确、方便、快捷的优点于一身，因此其在临床辅助诊断中的应用也越来越广泛。目前国内使用的“酶－聚合物—抗体”检测系统(二抗)大多依赖进口，价格昂贵、使用成本高，市场上迫切需要国产高质量的“酶－本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、目标分子骨架的选择：选取多聚赖氨酸大分子DGL(D1
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D3)；S2、目标结合酶的选择：选择辣根过氧化氢酶(HRP)；S3、目标结合IgG抗体的选择：选择山羊抗兔免疫球蛋白IgG作为目标抗体；S4、检测系统(SD
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PolyHRP)：多聚赖氨酸大分子(DGL)上的
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NH2官能团与辣根过氧化物酶(HRP)、IgG上
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COOH官能团进行酰胺化反映，使蛋白分子紧密结合在多聚赖氨酸大分子(DGL)骨架结构上，增加单位体积蛋白的浓度；S5、试验过程：S51、选用辣根过氧化物酶HRP 3.5g溶解到8ml、0.1M、PH＝7.4的磷酸氢钠溶液中，添加二苯基亚砜溶液0.4ml于10℃低温低速搅拌1.5h，将上述的反应液在交联葡聚糖凝胶柱(G50)进行过滤，洗脱液为0.1M、PH＝7.4的磷酸氢钠溶液，收集深棕色物质并进行低温离心浓缩至5ml试管中，2
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8℃冷藏备用；S52、取0.4g的多聚赖氨酸大分子(DGL)溶于6ml、0.1M、PH＝7.4的磷酸氢钠溶液中，将该溶液和步骤S51液体进行混合，于10℃低温下孵育反应20h，将上述的反应液在交联葡聚糖凝胶柱(G50)进行过滤，洗脱液为0.1M、PH＝7.4的磷酸氢钠溶液，收集深棕色物质并进行低温离心浓缩，取其浓缩液装于5ml试管中，2
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8℃冷藏备用；S53、把0.4g特异性含有Fab段肽链的羊抗兔IgG分子溶解到1L、PH＝7.4的PBS溶液中，充分搅拌均匀后加入5ml BMPS溶液，低速磁力搅拌均匀下，加入步骤S52的5ml浓缩液，搅拌5min后孵育16h，再加入抗原封闭剂牛血清白蛋白1g，充分搅拌均匀，合成的“HRP－DGL—IgG”聚合物存储于2
‑
8℃备用。2.根据权利要求1所述的一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法，其特征在于：所述步骤S1中选取的多聚赖氨酸大分子为D3代大分子，其分子式为：C
103
H
193
N
31
O
15
·
16HCL，分子量为：2688，其表面拥有高密度的活性氨基高分子团。3.根据权利要求1所述的一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法，其特征在于：所述步骤S2中的辣根过氧化氢酶，其RZ值＞3.0，活性＞300u/mg，CAS编号9003
‑
99
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0，其中同工酶C含量大于99.99％。4.根据权利要求1所述的一种基于多聚赖氨酸大分子(DGL)结构的酶标二抗制备及其方法，其特征在于：所述步骤S3中的山羊抗兔免疫球蛋白IgG的产品编号为AP132，山羊抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭瑞政，龚小勇，
申请(专利权)人：百盛广州生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：