一种可提高无细胞蛋白质表达水平的真核生物细胞及方法技术

本发明专利技术的可提高无细胞蛋白质表达水平的真核生物细胞和方法，通过对真核生物细胞的基因组DNA中，在编码eIF4E蛋白质的基因编码序列末端，融合表达His标签的编码序列，从而对在真核生物细胞的生命过程中，合成体内蛋白质、所必须的eIF4E蛋白上，插入His标签。而完成改造后的真核生物细胞，在细胞培养和增殖到设定数量后，被裂解并提取上清液，用于体外蛋白合成。实验证实，这可以促进体外合成目的蛋白质的表达水平。所述目的蛋白质包括任一可经由核糖体合成的多肽及蛋白质分子。本发明专利技术的可提高无细胞蛋白质表达水平的真核生物细胞，能够应用于合成任何不依赖于5

【技术实现步骤摘要】
一种可提高无细胞蛋白质表达水平的真核生物细胞及方法


[0001]本专利技术属于蛋白质合成
，具体涉及一种可提高无细胞蛋白质表达水平的真核生物细胞及方法。

技术介绍

[0002]无细胞蛋白质合成(cell
‑
free protein synthesis,CFPS)是一种以外源mRNA或DNA为模板，在体外条件下使用酶及氨基酸等小分子底物和能量来合成生物大分子蛋白质的技术。与传统的体内重组表达方式相比，体外无细胞蛋白质表达方式具有多种优点，如能够直接以PCR产物作为核酸模板，平行合成多种蛋白质；可表达对细胞有毒害作用或含有非天然氨基酸的特殊蛋白质。同时，还具有蛋白质表达产量和生产强度高、易纯化、易放大等优点，可方便地开展高通量药物筛选和蛋白质组学的研究。
[0003]目前广泛应用的无细胞蛋白质合成体系，主要分为两大类，一类是以某一物种来源的活体细胞，包括原核生物细胞和真核生物细胞，作为载体细胞，裂解后收集提取物，作为蛋白质的体外合成体系。例如目前已商业化的大肠杆菌系统(E.coli extract，ECE)、兔网织红本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可提高无细胞蛋白质表达水平的真核生物细胞，其特征在于，所述真核生物细胞的基因组DNA中，在编码eIF4E蛋白质的基因编码序列末端，融合有表达His标签的编码序列。2.根据权利要求1所述的真核生物细胞，其特征在于，所述真核生物细胞为酵母细胞。3.根据权利要求2所述的真核生物细胞，其特征在于，所述酵母细胞是乳酸克鲁维酵母细胞或马克斯克鲁维酵母细胞。4.根据权利要求1或2或3所述的真核生物细胞，其特征在于，所述表达His标签的编码序列编码表达至少连续6个组氨酸。5.根据权利要求1或2或3所述的真核生物细胞，其特征在于，在所述基因编码序列末端与所述表达His标签的编码序列之间，还融合有相应的连接序列。6.一种可提高无细胞蛋白质表达水平的方法，其特征在于，包括：a.修改真核生物细胞的基因组DNA，编辑编码eIF4E的基因，在所述基因的编码序列末...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭敏，熊亮，周子鉴，徐秀珍，江丹，于雪，
申请(专利权)人：康码上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：