用于肉鸡AFB1中毒诊断的血浆生物标志物及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物检测与诊断领域，涉及肉鸡AFB1中毒诊断，特别是指用于肉鸡AFB1中毒诊断的血浆生物标志物及其应用。所述血浆生物标志物为刺桐碱。其结构式为：。上述的血浆生物标志物在制备检测肉鸡AFB1中毒诊断的试剂、试剂盒或检测仪器中的应用，利用所述试剂、试剂盒或检测仪器检测待测肉鸡的血浆中刺桐碱的含量，与其在正常肉鸡的血浆中的含量相比较，进而判断肉鸡是否AFB1中毒。本发明专利技术筛选出1种血浆代谢物刺桐碱，其对AFB1中毒肉鸡和正常肉鸡具有极高的特异性，优于血清肝功能标志物，其对AFB1中毒诊断敏感性高，有利于在快速有效的对AFB1中毒肉鸡进行检测和筛查，对动物AFB1暴露程度进行初步评估和分析。析。析。

【技术实现步骤摘要】
用于肉鸡AFB1中毒诊断的血浆生物标志物及其应用


[0001]本专利技术属于生物检测与诊断领域，涉及肉鸡AFB1中毒诊断，特别是指用于肉鸡AFB1中毒诊断的血浆生物标志物及其应用。

技术介绍

[0002]黄曲霉毒素是属于曲霉属真菌的次生代谢产物，包括四种主要毒素：黄曲霉毒素B1（AFB1），黄曲霉毒素B2（AFB2），黄曲霉毒素G1（AFG1）和黄曲霉毒素G2（AFG2），其中AFB1是含量最多和毒性最强的毒素，被国际癌症研究机构列为Ⅰ级致癌剂。常见的霉菌毒素中，以黄曲霉毒素的衍生物AFB1分布最广泛，毒性和致癌性最强。黄曲霉毒素中毒对家禽造成严重的健康问题，例如体重下降，死亡率升高，免疫抑制等等。畜禽摄入AFB1后通过细胞膜吸收，到达血液循环，并通过血液分布到不同的组织，会引起动物的急性或慢性毒性。与此同时，AFB1已被证明具有显著的肝毒性，能够导致肉鸡肝脏形态损伤，显着增加ROS的生产，降低肝脏抗氧化酶活性和诱导炎症和凋亡。AFB1在许多食品和农产品中广泛存在，且能够在食品加工过程中稳定存在，并且最终残留在在动物源性食品中，对人类健康构成潜在风险，受到世界各地政府的重视。
[0003]AFB1中毒的早期诊断对治疗是至关重要的。在实际的家禽管理中，AFB1中毒多表现出胃肠道损伤，如厌食、呕吐等非典型症状，难以进行确切的诊断，从而准确评估AFB1中毒的患病率，进行干预和治疗，且容易误诊。目前，肉鸡AFB1中毒主要是根据临床表现和病理学变化（如观察肝脏组织形态）进行诊断，此外，测定饲料在实际的诊断中，农户往往需要采用多种检测手段以及专业经验才能较对AFB1中毒进行初步诊断，耗时长，对检测设备资源占用较多。截至到目前，依然尚未有一种较为准确高效的方法，能够实现快速识别诊断AFB1中毒。
[0004]近年来，随着免疫学和分子生物学技术的发展，生物标志物被广泛应用于临床检测，它不仅能从分子水平探讨发病机制，而且具有准确、敏感的优势。目前应用代谢组学技术挖掘生物标志物，成为开发新临床检测方法的研究热点，有利于检测实现标准化，是识别潜在疾病相关代谢物的成熟策略。AFB1中毒给人和动物的健康带来了极大的安全隐患。目前国内外对AFB1中毒的检测多数集中在食品或饲料中AFB1含量的测定，然而食品和饲料中的AFB1污染存在不均匀性，样品易存在误差，导致检测结果不能准确反映污染的真实水平。AFB1中毒后，靶器官为肝脏，通过检测肝脏功能能够一定程度上反映机体肝损伤程度，当前谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）是检测肝脏损伤的最主要指标，然而肝脏既是机体消化系统中最大的消化腺，又是新陈代谢的重要器官，很多原因都能导致肝功能受损，因此AST和ALT的变化不能专一的反映AFB1中毒。与肝脏功能指标相比，血浆标本容易获得，且能够更有针对性的检测机体AFB1摄入情况。因此，筛选诊断肉鸡AFB1中毒诊断血浆生物标记物，利用这些生物标志物，更有利于为AFB1中毒提供诊断依据，对动物AFB1暴露程度进行初步评估和分析，辅助农户对肉鸡AFB1中毒进行风险预警和危害控制，对AFB1中毒进行临床诊断和治疗。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提出一种用于肉鸡AFB1中毒诊断的血浆生物标志物及其应用。
[0006]本专利技术的技术方案是这样实现的：用于肉鸡AFB1中毒诊断的血浆生物标志物，所述血浆生物标志物为刺桐碱。
[0007]所述刺桐碱的结构式为：。
[0008]上述的血浆生物标志物在制备检测肉鸡AFB1中毒诊断的试剂、试剂盒或检测仪器中的应用。
[0009]优选的，利用所述试剂、试剂盒或检测仪器检测待测肉鸡的血浆中刺桐碱的含量，与其在正常肉鸡的血浆中的含量相比较，进而判断肉鸡是否AFB1中毒。
[0010]进一步，所述判断肉鸡是否AFB1中毒的标准为：将待测肉鸡血浆中的刺桐碱含量记为a、正常肉鸡血浆中的刺桐碱含量记为n，当a≤n时为正常肉鸡，当n＜a＜3.458n时随着a的增大为AFB1中毒肉鸡的概率增大，当a≥3.458n时为AFB1中毒肉鸡。
[0011]本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术基于代谢组学方法筛选获得诊断肉鸡AFB1中毒诊断血浆生物标记物，利用这些生物标志物，更有利于为AFB1中毒提供诊断依据，对动物AFB1暴露程度进行初步评估和分析，辅助农户对肉鸡AFB1中毒进行风险预警和危害控制，对AFB1中毒进行临床诊断和治疗。为了克服上述现有技术的不足，本专利技术创新性的选取肉鸡血浆样本进行代谢组学分析，筛选得到可用于指示肉鸡AFB1中毒诊断血浆生物标志物，即刺桐碱。
[0012]2、本申请通过高效液相色谱
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质谱技术对家禽血浆进行代谢组学分析，共筛选出3种血浆代谢物，其中刺桐碱对AFB1中毒和正常肉鸡具有极高的特异性，优于血清肝功标志物，可更加快速、精准有效的检测临床中AFB1中毒的发生，提醒养殖企业及时进行干预和治疗，降低经济损失。
[0013]3、本专利技术筛选出1种血浆代谢物刺桐碱，其对AFB1中毒肉鸡和正常肉鸡具有极高的特异性，优于血清肝功能标志物，其对AFB1中毒诊断敏感性高，有利于在快速有效的对AFB1中毒肉鸡进行检测和筛查，对动物AFB1暴露程度进行初步评估和分析。
附图说明
[0014]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0015]图1为PCA分析和OPLS
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DA分析。
[0016]图2为AFB1肉鸡血浆中差异代谢产物的研究；(A)血浆代谢物火山图分析；用火山
图中FC≧2或FC≦0.5和VIP≧1的标准筛选出差异显著的代谢物。(B)基于CON组和AFB1组鸡血浆中显著差异代谢物的潜在代谢途径分析。气泡的大小表示该途径富集的显著差异代谢物的数量，颜色梯度不同的点表示p值的范围。每个圆的大小越大，富集程度越高，p值越低，富集程度越显著。
[0017]图3为肉鸡血浆中差异代谢物的筛选图；(A)独立样本T检验分析代谢物含量差异。(B)显示CON组与AFB1组血浆中差异代谢物的log2转化读计数(|log2(FC)|≥2.5,p < 0.05, FC代表fold
‑
change)。(C)采用维恩分析，通过log2FC和显著差异代谢物筛选潜在生物标志物。
[0018]图4为AFB1中毒肉鸡血浆代谢物生物标志物的诊断。(A)AFB1中毒肉鸡血浆中差异代谢物与生长性能及肝脏损伤相关参数的Pearson相关性分析。以p< 0.05为差异显著，p值高于0.05(> 0.05)表示无统计学意义。(B) 血清ALT和AST诊断AFB1中毒的ROC曲线。(C)独立测试集中鉴别代谢物生物标志物诊断AFB1中毒的受试者本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于肉鸡AFB1中毒诊断的血浆生物标志物，其特征在于：所述血浆生物标志物为刺桐碱。2.根据权利要求1所述的血浆生物标志物，其特征在于，所述刺桐碱的结构式为：。3.权利要求1或2所述的血浆生物标志物在制备检测肉鸡AFB1中毒诊断的试剂、试剂盒或检测仪器中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：利用所述试剂、试剂盒或检测仪器检测待测肉鸡血浆中刺桐碱的...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄淑成，曹芹芹，代宏宇，林露茜，岳珂，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：