一种吡虫啉种子包衣的效应评估方法技术

本发明专利技术公开了一种吡虫啉种子包衣的效应评估方法，包括如下步骤：评估吡虫啉种子包衣对害虫的影响；评估吡虫啉种子包衣对土壤环境的影响。本发明专利技术吡虫啉种子包衣对害虫、油菜植株、土壤环境具有影响，角果期土壤中营养元素钾含量随着包衣浓度的增加显著上升，包衣导致角果期土壤中磷含量的降低，硝态氮含量随包衣浓度增加显著上升，中高浓度包衣促进硝态氮的累计，铵态氮含量在中高浓度下明显高于低浓度包衣下的含量，并且中高浓度包衣也会促进土壤中铵态氮含量的累计，碱性磷酸酶的活性则是在中浓度种衣剂处理下明显低于对照，低浓度包衣激活多酚氧化酶活性，吡虫啉种子包衣对于花期和角果期土壤微生物是安全的。和角果期土壤微生物是安全的。和角果期土壤微生物是安全的。

【技术实现步骤摘要】
一种吡虫啉种子包衣的效应评估方法


[0001]本专利技术涉及农业
，尤其涉及一种吡虫啉种子包衣的效应评估方法。

技术介绍

[0002]吡虫啉，英文通用名：imidacloprid，化学名称：1
‑
(6
‑
氯吡啶
‑3‑
吡啶基甲基)
‑
N
‑
硝基亚咪唑烷
‑2‑
基胺，纯品为无色晶体，有微弱气味。吡虫啉属于硝基亚甲基类内吸性杀虫剂，具有胃毒和触杀作用，通过抑制昆虫神经系统中烟酸乙酰胆碱酯酶受体，与其极高的竞争性结合从而破坏昆虫的中枢神经的正常传导，使之神经麻痹后死亡。吡虫啉具有极好的内吸活性，对刺吸式口器害虫有特效，如蚜虫、飞虱、粉虱、叶蝉、蓟马等，对鞘翅目、双翅目和鳞翅目害虫也有效，如稻象甲、稻负泥虫、稻螟虫、潜叶蛾等，但对线虫和红蜘蛛无效，可用于水稻、小麦、玉米、棉花、马铃薯、蔬菜、甜菜、果树等作物。吡虫啉单剂均属广谱性杀虫剂，可用于水稻田防除害虫。然而，现有的吡虫啉种子包衣不清楚对害虫、油菜植株、土壤环境的具体影响。

技术实现思路

[0003]基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种吡虫啉种子包衣的效应评估方法。
[0004]本专利技术提出的一种吡虫啉种子包衣的效应评估方法，包括如下步骤：
[0005]S1评估吡虫啉种子包衣对害虫的影响；
[0006]S11选用吡虫啉药剂，吡虫啉药剂为拜耳公司生产的高巧种衣剂；
[0007]S12高巧种衣剂用蒸馏水稀释为3种浓度，分别为150、600以及1200mg AI(活性成分)/L；选用四个油菜品种：中双11，浙平4，德油8以及新油10，每个油菜品种1000粒种子在10ml的Eppendorf管中与500μl的稀释种衣剂混合，室温下，Eppendorf管每10分钟快速摇匀几次，持续2h，均匀包衣后的种子转移到90mm直径的玻璃培养皿中，室温下风干24h，对照种子使用双蒸水代替种衣剂相同的程序进行包衣；
[0008]S13包衣后的种子播种到花盆中，盆土为砂砾/花土/泥炭/珍珠岩(2:1:3:3)混合而成，待植株发育到2叶期，4叶期以及6叶期时备用；
[0009]S14黄曲条跳甲的防效实验：每盆种10粒油菜种子，长至二叶一心时，单株油菜接入单头黄曲条跳甲成虫，分别在接虫后3、6、9天记录油菜株数，黄曲条跳甲头数以及叶片黄曲条跳甲危害孔洞数，一盆为1个处理，每个处理3个重复；
[0010]S2评估吡虫啉种子包衣对土壤环境的影响；
[0011]S21吡虫啉包衣对花期和角果期土壤中营养元素的影响；
[0012]田间播种前，采集试验田的土壤样本，测定土壤的基本理化性质,不同包衣及对照处理的种子播种后，分别在盛花期和角果期，使用30cm的土钻在植株根部周围10cm的范围内采集不同处理的土壤样本，每个处理取5个样点，每个样点10棵植株周围的土壤样本带回实验室；
[0013]土壤中钾含量的测定，采用比浊法，准确称取土壤重量，按重量体积比加入10倍的提取液，震荡提取1h，10000g，25℃离心10分钟，取上清待测，标准管中加入0.25ml的0.4mmol/L的钾标准液和1ml的工作液，样本管中以0.25ml上清液代替钾标准液，空白管中以蒸馏水代替钾标准液，混匀，放置5分钟，蒸馏水调零，1cm光径4mm内径，440nm，测各管吸光度；
[0014]土壤中磷含量的测定：取通过100目筛风干土样，550℃灼烧1h，冷却后称取0.1g，转移到10ml离心管，加入10ml试剂一，震荡混匀，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃，离心10min，取上清液待测，标准管中加入50μl 20μmol/L磷标准液，用去离子水定溶到500μl，测定管中以上清液代替磷标准液，空白管中则以去离子水代替，混匀，40℃水浴10分钟，室温冷却10分钟，于波长660nm，光径1cm，去离子水调零，测定各管吸光度；
[0015]土壤中铵态氮含量的测定：准确称取土样重量，按重量体积比加入10倍的提取液，置于振荡器中震荡提取1h，10000g，25℃，离心10min，取上清待测，空白管中100μl的提取液分别加入400μl的试剂一和试剂二，充分混匀，25℃静置1h，再加入100μl的试剂三，充分混匀，于1ml比色皿(光径1cm)，在波长625nm，双蒸水调零，测吸光度值，测定管中则以样本替代提取液，其它程序相同测定吸光度；
[0016]土壤中硝态氮含量的测定：准确称取土样重量，按重量体积比加入10倍的蒸馏水，置于振荡器中震荡提取1h，10000g，25℃，离心10min，取上清待测，空白管中30μl双蒸水加入60μl的试剂一，充分混匀，25℃静置30min，再加入1425μl的试剂二，涡旋震荡，使出现的沉淀充分溶解，取1ml于比色皿(1cm光径)测定410nm处吸光度值，测定管中用样本替代双蒸水进行测定；
[0017]S22评估吡虫啉包衣对花期和角果期土壤中酶活的影响；
[0018]花期和角果期土壤样本采集同上；
[0019]脲酶活性测定的方法：测定管中加入0.2g的风干土样，再加入100μl的甲苯，震荡混匀，使土样全部湿润，室温静置15min，依次加入500μl的底物液和1000μl的缓冲液，混匀，37℃孵育24h后，混匀，10000转/min常温离心10min，取上清液备用，对照管与测定管相似，其中用500μl的蒸馏水代替底物液，将上清液用蒸馏水10倍稀释后待测，稀释后的上清液400μl加入80μl的基质应用液和60μl的显色液，混匀，室温静置20min，最后加入460μl的蒸馏水，混匀，波长578nm，1cm光径，蒸馏水调零，测定各管吸光度值，标准管中用400μl的不同浓度的氮标准液代替稀释后的上清液进行测定；
[0020]脱氢酶活性的测定：新鲜土样风干或37℃烘干，过30
‑
50目筛，称取土壤样品0.1g，测定管中0.1g的样本中加入200μl的试剂一，充分混匀，37℃，暗培养24h，之后加入1800μl的试剂三，反复震荡1小时，25℃，8000g，离心5min，取上清1mL于1mL玻璃比色皿，测定A485，空白管作为对照，以200μl的试剂二代替试剂一，其他步骤相同；
[0021]β
‑
葡萄糖苷酶活性测定：新鲜土样风干或37℃烘干，过30
‑
50目筛，称取土壤样品0.05g，对照管中加入0.05g的风干土样，再加入25μl的试剂一，90℃震荡混匀15min，之后加入400μl的蒸馏水和500μl的试剂三，混匀，37℃震荡反应1h，立即90℃水浴5min，流水冷却，10000g，25℃离心10min，取上清液500μl，加入1000μl的试剂四，充分混匀，室温静置2min，400nm，蒸馏水调零，测定吸光度值A，测试管与对照管相似，在风干土样和试剂一混合时，在室温下震荡，并且之后用400μl的试剂二代替蒸馏水进行测定；
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种吡虫啉种子包衣的效应评估方法，其特征在于，包括如下步骤：S1评估吡虫啉种子包衣对害虫的影响；S11选用吡虫啉药剂，吡虫啉药剂为拜耳公司生产的高巧种衣剂；S12高巧种衣剂用蒸馏水稀释为3种浓度，分别为150、600以及1200mg AI(活性成分)/L；选用四个油菜品种：中双11，浙平4，德油8以及新油10，每个油菜品种1000粒种子在10ml的Eppendorf管中与500μl的稀释种衣剂混合，室温下，Eppendorf管每10分钟快速摇匀几次，持续2h，均匀包衣后的种子转移到90mm直径的玻璃培养皿中，室温下风干24h，对照种子使用双蒸水代替种衣剂相同的程序进行包衣；S13包衣后的种子播种到花盆中，盆土为砂砾/花土/泥炭/珍珠岩(2:1:3:3)混合而成，待植株发育到2叶期，4叶期以及6叶期时备用；S14黄曲条跳甲的防效实验：每盆种10粒油菜种子，长至二叶一心时，单株油菜接入单头黄曲条跳甲成虫，分别在接虫后3、6、9天记录油菜株数，黄曲条跳甲头数以及叶片黄曲条跳甲危害孔洞数，一盆为1个处理，每个处理3个重复；S2评估吡虫啉种子包衣对土壤环境的影响；S21吡虫啉包衣对花期和角果期土壤中营养元素的影响；田间播种前，采集试验田的土壤样本，测定土壤的基本理化性质,不同包衣及对照处理的种子播种后，分别在盛花期和角果期，使用30cm的土钻在植株根部周围10cm的范围内采集不同处理的土壤样本，每个处理取5个样点，每个样点10棵植株周围的土壤样本带回实验室；土壤中钾含量的测定，采用比浊法，准确称取土壤重量，按重量体积比加入10倍的提取液，震荡提取1h，10000g，25℃离心10分钟，取上清待测，标准管中加入0.25ml的0.4mmol/L的钾标准液和1ml的工作液，样本管中以0.25ml上清液代替钾标准液，空白管中以蒸馏水代替钾标准液，混匀，放置5分钟，蒸馏水调零，1cm光径4mm内径，440nm，测各管吸光度；土壤中磷含量的测定：取通过100目筛风干土样，550℃灼烧1h，冷却后称取0.1g，转移到10ml离心管，加入10ml试剂一，震荡混匀，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃，离心10min，取上清液待测，标准管中加入50μl 20μmol/L磷标准液，用去离子水定溶到500μl，测定管中以上清液代替磷标准液，空白管中则以去离子水代替，混匀，40℃水浴10分钟，室温冷却10分钟，于波长660nm，光径1cm，去离子水调零，测定各管吸光度；土壤中铵态氮含量的测定：准确称取土样重量，按重量体积比加入10倍的提取液，置于振荡器中震荡提取1h，10000g，25℃，离心10min，取上清待测，空白管中100μl的提取液分别加入400μl的试剂一和试剂二，充分混匀，25℃静置1h，再加入100μl的试剂三，充分混匀，于1ml比色皿(光径1cm)，在波长625nm，双蒸水调零，测吸光度值，测定管中则以样本替代提取液，其它程序相同测定吸光度；土壤中硝态氮含量的测定：准确称取土样重量，按重量体积比加入10倍的蒸馏水，置于振荡器中震荡提取1h，10000g，25℃，离心10min，取上清待测，空白管中30μl双蒸水加入60μl的试剂一，充分混匀，25℃静置30min，再加入1425μl的试剂二，涡旋震荡，使出现的沉淀充分溶解，取1ml于比色皿(1cm光径)测定410nm处吸光度值，测定管中用样本替代双蒸水进行测定；S22评估吡虫啉包衣对花期和角果期土壤中酶活的影响；
花期和角果期土壤样本采集同上；脲酶活性测定的方法：测定管中加入0.2g的风干土样，再加入100μl的甲苯，震荡混匀，使土样全部湿润，室温静置15min，依次加入500μl的底物液和1000μl的缓冲液，混匀，37℃孵育24h后，混匀，10000转/min常温离心10min，取上清液备用，对照管与测定管相似，其中用500μl的蒸馏水代替底物液，将上清液用蒸馏水10倍稀释后待测，稀释后的上清液400μl加入80μl的基质应用液和60μl的显色液，混匀，室温静置20min，最后加入460μl的蒸馏水，混匀，波长578nm，1cm光径，蒸馏水调零，测定各管吸光度值，标准管中用400μl的不同浓度的氮标准液代替稀释后的上清液进行测定；脱氢酶活性的测定：新鲜土样风干或37℃烘干，过30
‑
50目筛，称取土壤样品0.1g，测定管中0.1g的样本中加入200μl的试剂一，充分混匀，37℃，暗培养24h，之后加入1800μl的试剂三，反复震荡1小时，25℃，8000g，离心5min，取上清1mL于1mL玻璃比色皿，测定A485，空白管作为对照，以200μl的试剂二代替试剂一，其他步骤相同；β
‑
葡萄糖苷酶活性测定：新鲜土样风干或37℃烘干，过30
‑
50目筛，称取土壤样品0.05g，对照管中加入0.05g的风干土样，再加入25μl的试剂一，90℃震荡混匀15min，之后加入400μl的蒸馏水和500μl的试剂三，混匀，37℃震荡反应1h，立即90℃水浴5min，流水冷却，10000g，25℃离心10min，取上清液500μl，加入1000μl的...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝仲萍，黄芳，侯树敏，冯增贝，盛蕾，
申请(专利权)人：安徽省农业科学院作物研究所，
类型：发明
国别省市：