一种α-银环蛇毒素检测探针、一种非诊断目的检测α-银环蛇毒素的方法技术

本发明专利技术提供了一种α

【技术实现步骤摘要】
一种
α
‑
银环蛇毒素检测探针、一种非诊断目的检测
α
‑
银环蛇毒素的方法


[0001]本专利技术涉及生物传感
，特别涉及一种α
‑
银环蛇毒素检测探针、一种非诊断目的检测α
‑
银环蛇毒素的方法。

技术介绍

[0002]银环蛇是陆地上第四大毒蛇，也是我国境内毒性最强的蛇，一条成年银环蛇的1毫克毒素可以致十几人死亡。银环蛇毒液中所含毒素，主要成分为蛋白质和多肽，以神经毒素为主，包括α
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银环蛇毒素(α
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BGT)、β
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银环蛇毒素(β
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BGT)、κ
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银环蛇毒素(κ
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BGT)、γ
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银环蛇毒素(γ
‑
BGT)和磷脂酶A等酶类等。被银环蛇咬时不会感到疼痛反而嗜睡，轻微中毒时身体局部产生麻痹现象，若是毒素作用于神经肌肉交接位置，则会阻绝神经传导路线，致使横纹肌无法正常收缩，导致呼吸麻痹，作用时间约40分钟至2小时，或长达24小时。在抗蛇毒血清应用以前，银环蛇咬伤死亡率极高。
[0003]在过去的几十年里，蛇毒的检测得到很大的发展，建立了很多检测蛇毒的方法。如放射免疫测定法、免疫电泳法、荧光免疫测定法和酶联免疫吸附法等。其中，酶联免疫吸附法(ELISA)具有高专一性、快速简便的优势，已被广泛使用。酶联免疫吸附法需要使用毒素二抗
‑
天然酶作为探针结合物识别毒素，并使显色剂显色，但现有的天然酶如辣根过氧化物酶、漆酶、磷酸碱脂酶用于ELISA检测时存在稳定性差、催化活性弱的缺陷。
[0004]现有的纳米酶如四氧化三铁、单原子铁氮碳等具有稳定性好、成本低、催化活性强、对底物亲和力强等突出优点。基于纳米酶的优异性能，将其作为传统酶联免疫吸附法中天然酶的有力替代品。然而现有的纳米酶在水中易团聚，限制了其在生物传感器中的应用。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术目的在于提供一种α
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银环蛇毒素检测探针、一种非诊断目的检测α
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银环蛇毒素的方法。本专利技术提供的α
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银环蛇毒素检测探针具有良好的分散性。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种α
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银环蛇毒素检测探针，包括α
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银环蛇毒素核酸适配体和与所述α
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银环蛇毒素核酸适配体化学结合的氢键有机骨架材料；
[0008]所述α
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银环蛇毒素核酸适配体修饰有氨基；
[0009]所述氢键有机骨架材料的有机配体为1,3,6,8
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四(4
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羧基苯)芘。
[0010]优选的，所述α
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银环蛇毒素核酸适配体与氢键有机骨架材料的质量比为1:50～1000。
[0011]本专利技术提供了上述α
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银环蛇毒素检测探针的制备方法，包括以下步骤：
[0012]提供有机配体为1,3,6,8
‑
四(4
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羧基苯)芘的氢键有机骨架材料；
[0013]将所述氢键有机骨架材料与羧基活化剂混合，进行羧基活化，得到活化羧基的氢键有机骨架材料；
[0014]将所述活化羧基的氢键有机骨架材料、修饰有氨基的α
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银环蛇毒素的核酸适配体混合，进行化学结合，得到α
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银环蛇毒素检测探针。
[0015]优选的，所述活化羧基的氢键有机骨架材料与修饰有氨基的α
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银环蛇毒素的核酸适配体的质量比为300～500:1。
[0016]本专利技术提供了一种检测α
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银环蛇毒素用试剂盒，包括上述的α
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银环蛇毒素检测探针，α
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银环蛇毒素第一抗体，非特异性蛋白，以及显色底物。
[0017]优选的，所述显色底物为3,3',5,5'
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四甲基联苯胺。
[0018]本专利技术提供了一种非诊断目的检测α
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银环蛇毒素的方法，包括以下步骤：
[0019]将α
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银环蛇毒素第一抗体进行第一孵育，得到第一孵育产物；
[0020]向所述第一孵育产物中加入非特异性蛋白，进行第二孵育，去除未结合物，得到第二孵育产物；
[0021]向所述第二孵育产物中加入待测样品，进行第三孵育，去除未结合物，得到第三孵育产物；
[0022]向所述第三孵育产物中加入上述α
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银环蛇毒素检测探针，进行第四孵育，去除未结合物，得到第四孵育产物；
[0023]向所述第四孵育产物中加入显色底物，进行显色反应，测试显色液在500～800nm处的吸光度峰值；
[0024]根据预定的标准曲线和所述吸光度峰值，获得待测样品中α
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银环蛇毒素的浓度；所述标准曲线为α
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银环蛇毒素浓度的对数与吸光度峰值的线性关系曲线。
[0025]优选的，所述显色反应在醋酸缓冲液中进行。
[0026]优选的，所述显色反应在正常光条件或365nm激光照射下进行。
[0027]优选的，所述显色反应的时间为10～60min。
[0028]本专利技术提供了一种α
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银环蛇毒素检测探针，包括α
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银环蛇毒素核酸适配体和与所述α
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银环蛇毒素核酸适配体化学结合的氢键有机骨架材料；所述α
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银环蛇毒素核酸适配体修饰有氨基；所述氢键有机骨架材料的有机配体为1,3,6,8
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四(4
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羧基苯)芘。本专利技术以1,3,6,8
‑
四(4
‑
羧基苯)芘构成的氢键有机骨架材料，其表面具有丰富的羧基，能够与修饰有氨基的α
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银环蛇毒素的核酸适配体通过CO
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NH键化学结合，提高了探针的稳定性。同时，氢键有机骨架材料在水中易分散，且分散稳定性好，避免了现有金属基纳米酶在水中一团聚的缺陷，且氢键有机骨架材料具有高生物相容性、低毒性的优点；修饰有氨基的α
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银环蛇毒素的核酸适配体相比于α
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银环蛇毒二抗，具有稳定性高，生产成本低的优势。
[0029]本专利技术提供了一种检测α
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银环蛇毒素用试剂盒，包括α
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银环蛇毒素检测探针，α
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银环蛇毒素第一抗体，非特异性蛋白，以及显色底物。在本专利技术中，α
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银环蛇毒素第一抗体、待测α
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银环蛇毒素和α
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银环蛇毒素检测探针能够构成抗体
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抗原
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抗体三明本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种α
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银环蛇毒素检测探针，包括α
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银环蛇毒素核酸适配体和与所述α
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银环蛇毒素核酸适配体化学结合的氢键有机骨架材料；所述α
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银环蛇毒素核酸适配体修饰有氨基；所述氢键有机骨架材料的有机配体为1,3,6,8
‑
四(4
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羧基苯)芘。2.根据权利要求1所述的α
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银环蛇毒素检测探针，其特征在于，所述α
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银环蛇毒素核酸适配体与氢键有机骨架材料的质量比为1:50～1000。3.权利要求1或2所述α
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银环蛇毒素检测探针的制备方法，包括以下步骤：提供有机配体为1,3,6,8
‑
四(4
‑
羧基苯)芘的氢键有机骨架材料；将所述氢键有机骨架材料与羧基活化剂混合，进行羧基活化，得到活化羧基的氢键有机骨架材料；将所述活化羧基的氢键有机骨架材料、修饰有氨基的α
‑
银环蛇毒素的核酸适配体混合，进行化学结合，得到α
‑
银环蛇毒素检测探针。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述活化羧基的氢键有机骨架材料与修饰有氨基的α
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银环蛇毒素的核酸适配体的质量比为300～500:1。5.一种检测α
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银环蛇毒素用试剂盒，包括权利要求1或2所述α
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银环蛇毒素检测探针或权利要求3或4所述制备方法制备得到的α<...

【专利技术属性】
技术研发人员：李灿鹏，曾靖，赵卉，李文辉，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：