一种用于检测北柴胡NCED基因的引物和实时荧光定量PCR方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测北柴胡NCED基因的引物和实时荧光定量PCR方法，属于荧光定量PCR方法领域，旨在解决针对现有技术不足，缺少一种用于检测北柴胡NCED基因的引物及实时荧光定量PCR方法，无法对北柴胡NCED基因进行快速、高效、高灵敏度的检测的问题。通过提取北柴胡不同组织(根、茎、叶、花)的总RNA，以北柴胡actin基因为内参基因进行对照，开展实时荧光定量PCR检测，并采用2

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测北柴胡NCED基因的引物和实时荧光定量PCR方法


[0001]本专利技术涉及荧光定量PCR方法领域，具体为一种用于检测北柴胡NCED基因的引物和实时荧光定量PCR方法。

技术介绍

[0002]北柴胡(Bupleurum chinense DC.)是伞形科柴胡属植物，以北柴胡为基原之一的柴胡是我国大宗中药材，其处方率高，有小柴胡汤等多个处方使用。目前，北柴胡主要分布于我国干旱、半干旱地区，其地理跨度大、分布范围广，其生长发育受到外部环境的影响。植物在生长发育各个阶段，会通过不同的植物激素调节自身代谢，从而适应外界环境的改变。植物激素如脱落酸等参与调控植物整个的生命周期，在调控植物生长发育和代谢活动中起着非常重要的作用。其中NCED(9
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cis
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epoxycarotenoid dioxygenase)是植物体中一种9
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顺式
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环氧类胡萝卜素二双加氧酶，是催化植物体内脱落酸生物合成的关键酶，由NCED参与催化合成的脱落酸参与到北柴胡对干旱、半干旱逆境的适应过程中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测北柴胡NCED基因的引物和实时荧光定量PCR方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，北柴胡目的基因NCED的实时荧光定量引物设计：利用如SEQ ID NO.1所示北柴胡NCED基因的序列，设计引物；步骤2，北柴胡内参基因actin的实时荧光定量引物设计：利用如SEQ ID NO.2所示北柴胡actin基因的序列，设计引物；步骤3，北柴胡不同植物组织cDNA逆转录：提取北柴胡不同组织(根、茎、叶、花)的总RNA，并将提取的不同组织的总RNA分别逆转录成cDNA，
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20℃保存备用；步骤4，北柴胡NCED基因的实时荧光定量PCR检测：以逆转录的cDNA为模板，以actin为内参基因，在QuantStudio 5 Applied Biosystems上对北柴胡NCED基因的表达水平进行检测，分析NCED基因在北柴胡不同组织(根、茎、叶、花)中的分布与表达差异。2.根据权利要求1所述的一种用于检测北柴胡NCED基因的引物和实时荧光定量PCR方法，其特征在于：所述步骤1中，利用SEQ ID NO.1所示北柴胡NCED基因序列，通过Primer Premier5软件，设计出产物片段大小在80～200bp，退火温度55℃的引物序列。3.根据权利要求1所述的一种用于检测北柴胡NCED基因的引物和实时荧光定量PCR方法，其特征在于：所述步骤2中，利用SEQ ID NO.2所示北柴胡actin基因序列，通过Primer Premier5软件，设计出产物片段大小在80～200bp，退火温度55℃的引物序列。4.根据权利要求1所述的一种用于检测北柴胡NCED基因的引物和实时荧光定量PCR方法，其特征在于：所述步骤3中，采集北柴胡不同组织(根、茎、叶、花)样本，蒸馏水清洗干净后用吸水纸吸去水分，迅速投入到液氮中进行保存；利用多糖多酚植物总RNA提取试剂盒对北柴胡不同组织...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨林林，初雷霞，乔璐，苏秀红，董诚明，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：