本发明专利技术涉及骨碎补细胞外囊泡在制备治疗骨科疾病的药物中的应用。本发明专利技术创造性地从中药骨碎补中提取细胞外囊泡，并对其功能进行研究，发现其能够促进骨髓间充质干细胞增殖分化，并具有骨靶向性，而且含有多种与骨碎补相同的功效成分，证明了其具有治疗骨科疾病的潜力，可应用于制备治疗骨科疾病的药物。可应用于制备治疗骨科疾病的药物。可应用于制备治疗骨科疾病的药物。
【技术实现步骤摘要】
骨碎补细胞外囊泡在制备治疗骨科疾病的药物中的应用
[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及骨碎补细胞外囊泡在制备治疗骨科疾病的药物中的应用。
技术介绍
[0002]骨碎补，属于槲蕨植物的根茎部分，全年均可采挖，具有止痛、强骨的功效，是临床上治疗骨质疏松(OP)的常用中药。骨碎补内主要含有黄酮类化合物，现代药理研究表明其具有抗OP、抗炎和修复骨损伤等作用。多个研究发现骨碎补可通过调节骨代谢相关细胞来促进骨形成或抑制骨吸收，从而达到抗OP的作用。例如，骨碎补具有促进BMSCs(骨髓间充质干细胞)增殖及成骨分化的作用，并且骨碎补具有中药类雌激素的作用，可通过ER(雌激素受体)途径影响骨代谢相关细胞的功能来抗OP。目前骨碎补主要以整体入药或者单体进行治疗，存在口服生物利用度低、体内无选择性分布等缺点，在临床上限制了它的发挥，所以寻找一种更有效发挥中药骨碎补作用的方式有利于中药现代化系统的建立。
[0003]外泌体是由许多不同类型细胞分泌的具有双分子磷脂结构的细胞外囊泡，广泛存在于各种体液中，内含多种生物成分包括mRNA、miRNA、蛋白质和脂质等，可参与细胞间的物质交换从而影响细胞的功能。近年来，随着分离技术及外泌体的快速发展，已有不少人能从植物中分离出粒径在30
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500nm左右的EVs，这些植物源性EVs具有靶向性及生物活性，可以进行不同物种间的信息传递，从而调节机体的生物功能。例如，人参源性纳米样颗粒可靶向肝脏和脾脏，通过促进肿瘤相关巨噬细胞表型M2向M1极化，从而促进黑素瘤细胞的凋亡。然而目前还未见文献报道骨碎补源的细胞外囊泡，因此，从中药骨碎补中提取细胞外囊泡是否可行，提取出的骨碎补细胞外囊泡(DREVs)是否具有生物活性或中药骨碎补的相关功能还未可知。
[0004]因此，如何提供一种从中药骨碎补中提取细胞外囊泡的方法，并深入研究提取到的骨碎补细胞外囊泡的功能，以发掘其在治疗骨科疾病方面的应用潜力，成为了本领域亟待解决的问题。
技术实现思路
[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供骨碎补细胞外囊泡在制备治疗骨科疾病的药物中的应用。
[0006]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供骨碎补细胞外囊泡在制备治疗骨科疾病的药物中的应用。
[0008]本专利技术创造性地从中药骨碎补中提取细胞外囊泡，并对其功能进行研究，发现其能够促进骨髓间充质干细胞增殖分化，具有体内骨靶向性，且含有多种与骨碎补相同的功效成分，证明了其具有治疗骨科疾病的潜力，可应用于制备治疗骨科疾病的药物。
[0009]优选地，所述所述骨碎补细胞外囊泡中含有柚皮苷、圣草酚、肉桂酸、柚皮素、樱桃甙、咖啡酸、芥子酸、阿福豆苷、开环异落叶松树脂酚、芸香柚皮苷和山柰酚。
[0010]优选地，所述骨碎补细胞外囊泡是由包括如下步骤的提取方法提取得到的：
[0011](1)将骨碎补榨汁，过滤，收集滤液，离心除去杂质，收集上清液；
[0012](2)将上清液以100000
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200000g的速度离心60
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120min，收集沉淀，即得所述骨碎补细胞外囊泡。
[0013]上述100000
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200000g中的具体数值例如100000g、110000g、120000g、130000g、140000g、150000g、160000g、170000g、180000g、190000g、200000g等。
[0014]上述60
‑
120min中的具体数值例如60min、65min、70min、75min、80min、85min、90min、95min、100min、105min、110min、115min、120min等。
[0015]优选地，步骤(1)所述离心包括至少三次离心。
[0016]优选地，步骤(1)所述离心包括三次离心，第一次离心的速度为100
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500g，第二次离心的速度为1000
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3000g，第三次离心的速度为8000
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20000g。
[0017]上述100
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500g中的具体数值例如100g、150g、200g、250g、300g、350g、400g、450g、500g等。
[0018]上述1000
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3000g中的具体数值例如1000g、1200g、1500g、1700g、2000g、2200g、2500g、2700g、3000g等。
[0019]上述8000
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12000g中的具体数值例如8000g、8500g、9000g、9500g、10000g、10500g、11000g、11500g、12000g等。
[0020]优选地，步骤(1)所述离心的时间各自独立地为5
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30min，例如5min、10min、15min、20min、25min、30min等。
[0021]优选地，所述骨科疾病的类型包括骨质疏松、骨折或骨性关节炎中的任意一种。
[0022]优选地，所述药物的剂型包括片剂、冲剂、胶囊剂、溶液剂、气雾剂、喷雾剂、软膏剂或膜剂中的任意一种。
[0023]优选地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
[0024]优选地，所述辅料包括稀释剂、调味剂、粘合剂或填充剂中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合例如稀释剂和调味剂的组合、粘合剂和填充剂的组合、调味剂和粘合剂的组合等，其他任意的组合方式均可。
[0025]第二方面，本专利技术提供骨碎补细胞外囊泡在制备骨靶向制剂中的应用。
[0026]本专利技术创造性地发现骨碎补细胞外囊泡在动物体内具有骨靶向性，这一发现可进一步应用于骨靶向制剂的制备中，以进行骨科疾病发病机制的研究和相关病症的治疗。
[0027]优选地，所述骨靶向制剂还包括其他治疗骨科疾病的药物，所述其他治疗骨科疾病的药物负载于骨碎补细胞外囊泡中。
[0028]所述其他治疗骨科疾病的药物例如钙制剂、雌激素类药物、降钙素、二磷酸盐类药物、特立帕肽等。
[0029]第三方面，本专利技术提供骨碎补细胞外囊泡在制备骨髓间充质干细胞增殖促进剂中的应用。
[0030]第四方面，本专利技术提供骨碎补细胞外囊泡在制备骨髓间充质干细胞成骨分化促进剂中的应用。
[0031]本专利技术创造性地从中药骨碎补中提取细胞外囊泡，并对其功能进行研究，发现其能够促进骨髓间充质干细胞增殖以及成骨分化。骨髓原始间充质干细胞是骨髓基质干细
胞，是人们在哺乳动物的骨髓基质中发现的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。它们对骨髓中的造血干细胞(HSC)不仅有机械支持作用，还能分泌多种生长因子(如IL
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6，IL
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11，LIF，M
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CSF及SCF等本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.骨碎补细胞外囊泡在制备治疗骨科疾病的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述骨碎补细胞外囊泡中含有柚皮苷、圣草酚、肉桂酸、柚皮素、樱桃甙、咖啡酸、芥子酸、阿福豆苷、开环异落叶松树脂酚、芸香柚皮苷和山柰酚。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述骨碎补细胞外囊泡是由包括如下步骤的提取方法提取得到的：(1)将骨碎补榨汁，过滤，收集滤液，离心除去杂质，收集上清液；(2)将上清液以100000
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200000g的速度离心60
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120min，收集沉淀，即得所述骨碎补细胞外囊泡。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(1)所述离心包括至少三次离心；优选地，步骤(1)所述离心包括三次离心，第一次离心的速度为100
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500g，第二次离心的速度为1000
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3000g，第三次离心的速度为8000
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【专利技术属性】
技术研发人员：赵可伟，赵清，
申请(专利权)人：广州中医药大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：
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