提高基因表达的RNA复制子及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种提高基因表达的RNA复制子及其应用，所述RNA复制子包括：5

【技术实现步骤摘要】
提高基因表达的RNA复制子及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种提高基因表达的RNA复制子及其应用。

技术介绍

[0002]基因物质通常以编码目的基因的DNA或RNA的形式向细胞内递送。但DNA向细胞核内的递送效率低以及用药安全性等问题影响了以DNA为载体的基因治疗在临床中的应用。信使RNA分子(mRNA)提高了基因治疗的安全性。但mRNA表达时间较短，通常需要多次重复给药才能有效调控基因表达和基因治疗的疗效，限制了其在临床上的推广和患者顺应性，且提高了治疗成本。可复制型RNA(repRNA)，又称为RNA复制子或自我扩增RNA，来源于正链或负链RNA病毒。甲病毒复制子包括甲病毒的非翻译区、非结构蛋白基因编码区、亚基因组启动子和目的基因编码区等功能元件(图1)，repRNA导入细胞后，RNA依赖的RNA聚合酶可以将释放到细胞质中的可复制型RNA作为模板复制合成多份转录本，增加了转录模板，进而翻译表达出多份目标蛋白(图2)。由于缺乏结构蛋白，甲病毒复制子对载体本身具有较低的内在免疫原性，同一可复制型RNA可以被多次重复本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种RNA复制子，按5
’‑3’
方向，所述RNA复制子包括：5
’
和3
’
非翻译区；非结构蛋白基因编码区、亚基因组启动子、目的基因编码区；其非结构蛋白基因编码区发生(I)～(III)任意一种突变：(I)选自非结构蛋白1的G357、G1569、A1572、C1575和非结构蛋白2的T3922位点中的至少一个位点的突变；优选为同时突变；(II)选自非结构蛋白1的G357、G1569、A1572、C1575和非结构蛋白2的A3821、T3922位点中的至少一个位点的突变；优选为同时突变；(III)包括但不限于非结构蛋白2的G3892和非结构蛋白3的A4714位点中的至少一个位点的突变；优选为同时突变。2.根据权利要求1所述的RNA复制子，其特征在于，所述5
’
和3
’
非翻译区、非结构蛋白基因编码区和亚基因组启动子来源于甲病毒、黄病毒、小RNA病毒、副粘病毒或杯状病毒；优选地，所述甲病毒为委内瑞拉马脑炎病毒、辛德比斯病毒或塞姆利基森林病毒；所述黄病毒为登革热病毒或昆津病毒；所述小RNA病毒为脊髓灰质炎病毒或人鼻病毒；所述副粘病毒为犬痘热病毒；所述杯状病毒为猫杯状病毒；更优选地，所述甲病毒为委内瑞拉马脑炎病毒。3.根据权利要求1所述的RNA复制子，其特征在于，所述目的基因包括肿瘤特异性或相关抗原、病原体特异性或相关抗原、细胞因子或其受体、趋化因子或其受体、生长因子或其受体、抗体蛋白、双特异性抗体蛋白、细胞因子抗体融合蛋白和免疫检查点相关蛋白中的至少一种；优选地，所述细胞因子为GM
‑
CSF、IFN
‑
γ、IL
‑
2、IL
‑
12或IL
‑
15。4.根据权利要求1所述的RNA复制子，其特征在于，所述突变的方法为PCR定点突变；优选地，所述PCR定点突变的引物包括：G357C F：5
’‑
GAAAATGAAGGAGCTCGCCGCCGTCATGAGCGACCC
‑3’
；G357C R：5
’‑
GCTCATGACGGCGGCGAGCTCCTTCATTTTCTTGTCC
‑3’
；G1569A/A1572C/C1575T F：5
’‑
GGAGCCCACTCTGGAAGCCGATGTCGACTTGATGTTACAAGAGG
‑3’
；G1569A/A1572C/C1575T R：5
’‑
TAACATCAAGTCGACATCGGCTTCCAGAGTGGGCTCCTCAACATC
‑3’
；A3821T F:5
’‑
CATTGGTGCTATAGCGCGGCTGTTCAAGTTTTCCCGGGTATGCAAAC
‑3’
；T7VEESmaI R:5
’‑
GCTTAAGTTAGTTGCGGCCGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：张元，林贵斌，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：