一种采用单标签进行相对定量的mNGS病原检测方法技术

本发明专利技术公开了一种采用单标签进行相对定量的mNGS病原检测方法，向不同样本中添加同一种特定的等量的单标签，该单标签为来自于某种微生物的一段与人类基因组无匹配的核酸序列，通过该单标签在不同样本中测序后的检出数与添加量的对应关系，对不同样本中人源序列的检出条数进行校正，即均一化。均一化后的数据可在同一水平线比较不同样本间病原菌检出情况，对同批次或同一待研究范围内临床样本的病原菌检出数目相对定量。菌检出数目相对定量。

【技术实现步骤摘要】
一种采用单标签进行相对定量的mNGS病原检测方法


[0001]本专利技术涉及生物基因检测技术，具体说，是一种采用单标签进行相对定量的mNGS病原检测方法。

技术介绍

[0002]自2005年开发二代测序（NGS）技术以来，宏基因组方法在二代测序中的使用频率大大增加。宏基因组测序（mNGS）是一种不需进行病原微生物培养即可快速深入鉴定感染病原体的新技术，相比传统培养方法拥有更高敏感性的同时又与“精准诊疗”的理念相契合，mNGS是临床病毒学中有效的重要工具（Mokili JL, Rohwer F, Dutilh BE. Metagenomics and future perspectives invirus discovery. Curr Opin Virol. 2012, 2:63
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77）。
[0003]mNGS可以立即获得完整的病毒遗传信息，从而进行病毒流行病学监测或鉴定病毒耐药性特定突变（Prachayangprecha S, Schapendonk CME, Koopmans MP, Osterhaus ADME本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种采用单标签进行相对定量的mNGS病原检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：制备单标签：单标签采用人工合成或购买已选择的菌株，菌株浓度为100 μg/mL，按预估使用量分装至不同的1.5 mL EP管中，保存在
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80℃冰箱；步骤2：mNGS样本中单标签的添加：临床样本收录后，样本按照单次提取用量分装至2.0 mL EP管中，取出分装好的单标签，室温化冻，彻底融化后置于涡旋震荡仪上震荡混匀，8000 rpm/min转速下离心30 sec，每个样本中添加10μl离心好的单标签，混匀后进行核酸提取和mNGS文库构建；步骤3：测序数据均一化标准化：设定1μg单标签在无人源宿主影响条件下理论检出reads数为n；均一化指数=n/临床样本中单标签实际检出reads数；均一化后某病原菌检出数=均一化指数
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下机数据中某病原...

【专利技术属性】
技术研发人员：康亮亮，曹德盼，姚佳玥，杨俊，李东东，纪丹丹，蒋智，
申请(专利权)人：天津金匙医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：