一种用于检测新冠病毒的试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，具体讲，涉及一种用于检测新冠病毒的试剂盒及检测方法。试剂盒中含有核酸扩增试剂，核酸扩增试剂中含有如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:4所示核苷酸序列的等温扩增引物；或含有如SEQ ID NO:9～SEQ ID NO:12所示核苷酸序列的等温扩增引物。本发明专利技术开发出一种能够快速实时现场检测的新冠病毒检测试剂，可提高检测效率，为新冠病毒的防控提供有效的技术手段。提供有效的技术手段。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测新冠病毒的试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，具体讲，涉及一种用于检测新冠病毒的试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2，SARS
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CoV
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2)造成了全球范围内的疫情大传播，其强传染性和高致死率给全球疫情防控工作提出了巨大挑战，为有效控制疫情发展，开发准确高效的检测方法尤为重要。目前的检测方法包括病原学检测、分子生物学检测和免疫学检测。
[0003]病原学检测是指利用病毒分离培养方法或电镜观察等技术，直接对病原体本身进行的检测，能够在疾病爆发早期为确定病原体提供直接证据，是诊断病毒感染的传统方法之一。但与其他检测方法相比，病原学检测技术需要的实验环境苛刻、操作繁琐、耗时较长，无法满足疫情大规模暴发下的病毒检测需求。
[0004]免疫学检测法是针对血液中的病毒特异性抗原或抗体进行的检测，《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第八版)》将新冠病毒特异性抗体检测与核酸检测、病毒基因测序共同作为确诊证据。相较于核酸检测，免疫学检测不仅样本采集容易、检测操作简单、容易实现高通量，还能检测患者体内特异性抗体的变化情况，发现产生免疫力的人群，对疾病防治以及疫苗研发具有重要意义。目前免疫学检测方法主要包括侧流免疫层析技术、酶联免疫检测法(ELISA)、化学发光免疫分析法等。侧流免疫层析技术结合了色谱分析和免疫反应原理，以胶体金、碳纳米颗粒等作为免疫标记的探针，对样本中的新冠病毒抗原蛋白进行快速检测。ELISA是抗原抗体反应与酶科学相互结合的一种常见的免疫分析方法，利用抗原与抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测。化学发光免疫分析是一种新型的免疫分析技术，兼具免疫反应的特异性及化学发光分析的灵敏性。免疫学检测方法检测耗时短、准确性高、操作简便，但由于人体的免疫反应只有在肌体感染1周后才产生可被检测的抗体，因此免疫学检测存在检测窗口期，主要作为辅助诊断的手段。
[0005]分子生物学检测是针对新冠病毒感染机体后所复制产生的病毒RNA进行检测，不同于免疫系统产生的IgM、IgG抗体，复制产生的病毒RNA能更早被检测出来，因此当前新冠病毒最主要的诊断方法是病毒核酸检测，主要包括全基因组测序、实时荧光定量PCR(RT
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PCR)、CRISPR、逆转录环介导等温扩增技术(RT
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LAMP)等，其中实时荧光定量PCR方法(RT
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PCR)仍是检测新型冠状病毒的金标准。全基因组测序技术能够全面反映病原体的遗传信息，具有高度的准确性和敏感性，但该技术仪器设备昂贵、测序数据解读门槛高，难以应用于大规模临床检测。RT
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PCR诊断耗时短、检测样本多、结果判定简便、检测成本低，是目前新冠病毒检测最常用的手段，但是该方法需要专业的实验室和操作人员，实验室条件不足或操作不当都可能会因气溶胶污染而造成假阳性。RT
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LAMP能够在等温条件下特异、高效、快速的扩增核酸模板，虽然该方法的引物设计较为复杂，但其检测结果灵敏度高，可视化能够实现检测结果的直观判断，具有十分广阔的发展潜力。
[0006]此外，新冠病毒是一种单股正链RNA病毒，其基因组再复制过程中通过多种机制而发生变异，从而导致致病性高、更易传播的变异株产生，世界卫生组织(Worldhealthorganization,WHO)根据这些变异株的传播力、致病力等不同将其分为VOC和“关注变异株(Variantofinterest,VOI)”。与早期参考株相比，VOI满足病毒表型发生变化，或氨基酸变异引起或潜在引起病毒表型发生变化。目前已有5种VOI变异株被报道，其中Delta新冠病毒变异株以已传播至全球96个国家/地区，具有传播力强、感染潜伏期段、致病性强、发病进程快等特点，逐渐取代其他VOC成为危害最强的全球流行株。
[0007]针对新冠病毒变异性强的特点，开发能够检测多种变异型的新冠病毒检测方法是十分必要的。目前核酸检测方法主要是靶向新冠病毒的开放读码框OFR1区域和核壳蛋白区域设计引物和探针，不断突变的病毒可能会导致核酸检测失效。最近的一项研究通过对比31421株新冠病毒的基因组样本发现，新冠病毒的ORF7b区具有最低的突变率，因此更适合作为靶点进行新冠病毒检测试剂的研发。
[0008]微流控芯片(Microfluidics Chip)技术是一项把生物、化学、医学分析过程的样品制备、反应、分离、检测等基本操作单元集成到一块微米尺度的芯片上，自动完成分析全过程的新型技术。针对复杂食品基质中病毒检测智能化程度低、检测分析目标物单一或较少的问题，采用微流控芯片方法，优化芯片制作和加工工艺，研制开发核酸提取
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等温扩增
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杂交集成系统，研究芯片与外围在线检测器和读数装置识别匹配技术，实现对病毒基因的快速高精度高灵敏度即时诊断(point
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of
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care testing,POCT)，达到病毒检测流程的自动化和检测结果的信息化。微流控芯片检测具有集成化、自动化等特点，可同时对多个样本、多个靶标进行检测，实现高效、灵敏、准确、自动化的特点。检测系统小巧轻便，易于携带。并且芯片盘上各个通道之间完全隔离，可以有效避免交叉污染。
[0009]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0010]本专利技术的首要专利技术目的在于提供一种用于检测新冠病毒的试剂盒。
[0011]本专利技术的第二专利技术目的在于提供用于检测新冠病毒的方法。
[0012]为了完成本专利技术的专利技术目的，采用的技术方案为：
[0013]本专利技术提出一种用于检测新冠病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有核酸扩增试剂，所述核酸扩增试剂中含有如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:4所示核苷酸序列的等温扩增引物；或，所述核酸扩增试剂中含有如SEQ ID NO:9～SEQ ID NO:12所示核苷酸序列的等温扩增引物。
[0014]可选的，SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2的浓度为0.1μM～0.4μM，优选为0.1μM；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的浓度为1.0μM～1.6μM，优选为1.2μM；
[0015]SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10的浓度为0.1μM～0.4μM，优选为0.1μM；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12的浓度为1.0μM～1.6μM，优选为1.2μM。
[0016]可选的，所述试剂盒中还含有阴性对照品和阳性对照品，所述阳性对照品为新冠病毒ORF7假病毒质粒，所述阴性对照品为去离子水。
[0017]可选的，所述试剂盒中还含有微流控芯片。
[0018]可选的，用于所述试剂盒的样品为待检测鼻拭子或咽拭子的提取物经过RNA提取
试剂盒获得的核酸样本。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测新冠病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有核酸扩增试剂，所述核酸扩增试剂中含有如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:4所示核苷酸序列的等温扩增引物；或，所述核酸扩增试剂中含有如SEQ ID NO:9～SEQ ID NO:12所示核苷酸序列的等温扩增引物。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2的浓度为0.1μM～0.4μM，优选为0.1μM；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的浓度为1.0μM～1.6μM，优选为1.2μM；SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10的浓度为0.1μM～0.4μM，优选为0.1μM；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12的浓度为1.0μM～1.6μM，优选为1.2μM。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有阴性对照品和阳性对照品，所述阳性对照品为新冠病毒ORF7假病毒质粒，所述阴性对照品为去离子水。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有微流控芯片。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，用于所述试剂盒的样品为待检测鼻拭子或咽拭子的提取物经过RNA提取试剂盒获得的核酸样本。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：师丹阳，王东帅，金敏，李君文，杨栋，尹静，李海北，杨忠委，陈天姣，周书青，王华然，
申请(专利权)人：军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所，
类型：发明
国别省市：