一种高胆固醇血症的基因检测全外显子建库工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种高胆固醇血症的基因检测全外显子建库工艺，包括如下步骤：S1、DNA提取及破碎：提取基因组DNA，并采用超声法打断为DNA片段；S2、纯化打断后的DNA样品：磷酸缓冲液、无水乙醇纯化DNA样品；S3、末端修复；粘性末端修复成平末端并加碱基“A”；S4、PCR扩增；扩增两端带有接头的DNA片段；S5、杂交捕获；文库与杂交试剂、封闭试剂和捕获探针文库进行混合反应；S6、定量外显子文库浓度及稀释；S7、文库检测及上机、数据分析。所述建库工艺能应用于家族性高胆固醇血症的检测，简化检测工艺，提高诊断准确率，降低成本和劳动强度。降低成本和劳动强度。

【技术实现步骤摘要】
一种高胆固醇血症的基因检测全外显子建库工艺


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，更具体地，涉及一种高胆固醇血症的基因检测全外显子建库工艺。

技术介绍

[0002]高胆固醇血症是家族性高胆固醇血症(FH)，又称家族性高β脂蛋白血症。临床特点是高胆固醇血症、特征性黄色瘤、早发心血管疾病家族史。FH是儿童期最常见的遗传性高脂血症，也是脂质代谢疾病中最严重的一种，可导致各种危及生命的心血管疾病并发症出现，是冠状动脉疾病的一种重要危险因素。家族性高胆固醇血症是由于基因突变导致血液中胆固醇含量很高的一种疾病。高胆固醇血症患者有很高的风险患上一种叫做冠状动脉疾病的心脏病，以及与其他组织(如肌腱和皮肤)中堆积过量胆固醇有关的健康问题。本病最特征的临床表现为血LDL-C水平增高、黄色瘤、角膜弓和早发性冠心病。FH患者的临床表现取决于其基因型，非遗传因素也对其有影响。FH基因型与表现型的关系比较复杂，即使带有相同突变，甚至属于同一家族的个体其临床表现差异也较大。另外，非遗传因素如高龄、男性、吸烟、饮食等也可显著影响LDL水平，增加冠心病的发生。家族性高胆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高胆固醇血症的基因检测全外显子建库工艺，其特征在于，包括如下步骤：S1、DNA提取及破碎：试剂盒及标准DNA提取方法提取基因组DNA，再采用超声法将DNA打断为150-250的DNA片段；S2、纯化打断后的DNA样品：磷酸缓冲液、无水乙醇纯化打断后的DNA样品；S3、末端修复：将打断的粘性末端修复成平末端，并通过连接3
’
端加碱基“A”；S4、PCR扩增：PCR扩增两端带有接头的DNA片段；S5、杂交捕获：文库与杂交试剂、封闭试剂和捕获探针文库进行混合反应；S6、定量外显子文库浓度及稀释：用Qubit准确定量外显子文库浓度，再根据文库Qubit浓度取文库原液进行稀释，获得终浓度为2ng/uL；S7、文库检测及上机、数据分析：上机组完成文库检测，再通过分析软件进行数据分析。2.根据权利要求1所述的高胆固醇血症的基因检测全外显子建库工艺，其特征在于，步骤S1DNA提取及破碎步骤中采用的试剂盒为QIAamp基因组DNA提取试剂盒，超声法采用的是Covaris S220超声波DNA破碎仪。3.根据权利要求1所述的高胆固醇血症的基因检测全外显子建库工艺，其特征在于，步骤S2纯化打断后的DNA样品的具体过程为：S21、向装有200ul打断好的DNA片段的血液样本的离心管中加入5倍体积的磷酸缓冲液，混合均匀，简单离心，得到混合液；S22、将混合液转移到离心柱中，12000rpm离心20s，弃废液，重复两次；S23、加入200uL无水乙醇，12000rpm离心20s，弃废液，然后转移到2mL离心柱上；S24、在吸附柱中加入80u...

【专利技术属性】
技术研发人员：段志峰，
申请(专利权)人：广州源古纪科技有限公司，
类型：发明
国别省市：