一种高效提取杜仲胶的方法技术

本发明专利技术涉及杜仲胶提取技术领域，且公开了一种高效提取杜仲胶的方法，包括以下步骤：S1：土壤采样，采集杜仲林下的腐殖质土，然后备用；S2：富集培养，将取自杜仲林下的土壤加入培养基中富集细菌、嗜热菌及真菌；S3：涂布分离，富集结束后取100μL菌液利用平板涂布法将菌进行分离；S4：活化培养，将分离纯化后的菌种放入活化培养基中进行活化培养，活化培养基包括基础培养基和活化组分；S5：测定降解率。本发明专利技术能够进行实时检测，而且能够提高检测样本，控制检测时间和温度，提高测定效率，通过优化酶活条件，能够检测到菌种提取的杜仲胶的最佳效率，从而提高杜仲胶的提取效果。从而提高杜仲胶的提取效果。从而提高杜仲胶的提取效果。

【技术实现步骤摘要】
一种高效提取杜仲胶的方法


[0001]本专利技术涉及杜仲胶提取
，具体为一种高效提取杜仲胶的方法。

技术介绍

[0002]杜仲胶是杜仲中存在的一类高分子化合物，杜仲的树皮、叶及种皮中均含有丰富的杜仲胶，其叶含杜仲胶2％～4％、树皮含6％～10％、种子含10％～18％。杜仲胶作为一种天然高分子材料，是国际上公认的能够替代传统三叶橡胶的胶源，仲胶绝缘性良好，耐酸碱、耐腐蚀、耐磨擦，可以硫化制得高弹性体，也可以控制交联度产生新材料，在工业、国防、交通、航天、医疗等领域具有巨大的市场应用前景和价值，因此，杜仲胶作为及具发展潜力的优质天然橡胶资源。
[0003]现有的生物酶如纤维素酶、果胶酶等，经验证不能有效的降解杜仲叶使维管结构暴露从而分离杜仲胶，不能充分的测定有效的杜仲胶分解提取的菌株，而且没有掌握杜仲胶提取时更加高效的菌株优化培养条件，从而不能发挥菌种的最佳性能，因此提出一种高效提取杜仲胶的方法。

技术实现思路

[0004](一)解决的技术问题
[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种高效提取杜仲胶的方法，解决了不能充分的测定有效的杜仲胶分解提取的菌株，而且没有掌握杜仲胶提取时更加高效的菌株优化培养条件，从而不能发挥菌种的最佳性能的问题。
[0006](二)技术方案
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]一种高效提取杜仲胶的方法，包括以下步骤：
[0009]S1：土壤采样，采集杜仲林下的腐殖质土，然后备用；<br/>[0010]S2：富集培养，将取自杜仲林下的土壤加入培养基中富集细菌、嗜热菌及真菌；
[0011]S3：涂布分离，富集结束后取100μL菌液利用平板涂布法将菌进行分离，挑取生长速度快、菌落数量占优势、颜色及形态不同的菌株，进行菌株分离纯化保藏；
[0012]S4：活化培养，将分离纯化后的菌种放入活化培养基中进行活化培养，活化培养基包括基础培养基和活化组分，基础培养基组分包括：L
‑
精氨酸12
‑
23份，NaHPO42
‑
9份，L
‑
胱氨酸二盐酸盐1
‑
7份，甘氨酸2.5
‑
6份，L
‑
组氨酸6
‑
16份，酵母浸出粉3
‑
12份，L
‑
异亮氨酸5
‑
11份，葡萄糖40
‑
60份，L
‑
赖氨酸盐酸盐2
‑
8份；
[0013]S5：测定降解率，将活化培养后的菌株接种于装有杜仲叶的三角瓶中，置于30℃、150r/min条件下培养，测定不同培养时间的降解率；
[0014]S6：酶活测定，对S4中活化培养得到的菌株发酵制备粗酶液，测定不同菌株发酵液中的果胶酶、纤维素酶、半乳糖醛酸活性，确定酶活较高的、可有效降解杜仲叶获得杜仲胶的优良菌株；
[0015]S7：优化酶活条件：采用单因素试验对发酵时间、发酵温度、基质含水率、基质初始pH对杜仲胶发酵效果的影响进行测定，以确定最佳的发酵条件；
[0016]S8：提取杜仲胶，根据实验得到的最佳酶活条件和优良菌株，大量富集培养菌株，把菌株投入杜仲叶片中对杜仲胶进行提取。
[0017]作为本专利技术再进一步的方案，所述S2中在进行富集时分别富集37℃细菌和55℃嗜热菌每1
‑
4天一次，循环富集培养2
‑
4次，S2中在富集真菌时每10d一次，共富集3次。
[0018]进一步的，所述S3中菌株用终浓度为20％甘油保存在
‑
80℃冰箱。
[0019]在前述方案的基础上，所述S4中活化组分包括：左旋肉碱富马酸盐1
‑
5份、白细胞介素3
‑
12份、酸水解酪蛋白2.5
‑
6份，羧甲基纤维素钠3
‑
9份。
[0020]进一步的，所述S5中测定时间为1
‑
30天。
[0021]在前述方案的基础上，所述S6中测定方法如下：取菌液2mL于5000rpm离心5min，取1mL上清液，然后取1mL上清与1mL底物混合，底物为10g/L羧甲基纤维素钠配置时候先加水然后涡旋状态下加入羧甲基纤维素钠的混合物，充分震荡摇匀，50℃条件下恒温水浴30min，加入2.5mL DNS试剂并充分摇匀，立即放入沸水中煮5min，取出，迅速用流水冷却至室温，分光光度计540nm下测定吸光度，进行筛选分离。
[0022]本专利技术再进一步的方案，所述S7中发酵时间为2
‑
20天，基质含水率为1％
‑
50％、基质初始pH为6
‑
8、发酵温度为20
‑
50℃。
[0023](三)有益效果
[0024]与现有技术相比，本专利技术提供了一种高效提取杜仲胶的方法，具备以下有益效果：
[0025]1、本专利技术的活化培养基配伍合理，在活化培养后，菌种总数、增殖速度、扩增倍数都有显著提高，而且活化培养时也能够对菌种进行初步筛选，提高功能性。
[0026]2、本专利技术中，通过把菌株接种在装有杜仲叶的三角瓶中，能够进行实时检测，而且能够提高检测样本，控制检测时间和温度，提高测定效率。
[0027]3、本专利技术中，优良菌株的筛选是构建生物法提取杜仲胶的关键，而优化培养条件则是发挥菌种最佳性能、获得较高酶活力的保证，通过优化酶活条件，能够检测到菌种提取的杜仲胶的最佳效率，从而提高杜仲胶的提取效果。
[0028]4、本专利技术中，通过平板涂布法将菌进行分离，然后挑取生长速度快、菌落数量占优势的菌种接种能够快速对菌落进行分离，方便后面的筛选确认。
附图说明
[0029]图1为本专利技术提出的一种高效提取杜仲胶的方法的流程结构示意图。
具体实施方式
[0030]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0031]实施例1
[0032]参照图1，一种高效提取杜仲胶的方法，包括以下步骤：
[0033]S1：土壤采样，采集杜仲林下的腐殖质土，然后备用；
[0034]S2：富集培养，将取自杜仲林下的土壤加入培养基中富集细菌、嗜热菌及真菌，通过对土壤进行富集培养，能够得到更多的菌落，从而方便后期的培养试验；
[0035]S3：涂布分离，富集结束后取100μL菌液利用平板涂布法将菌进行分离，挑取生长速度快、菌落数量占优势、颜色及形态不同的菌株，进行菌株分离纯化保藏，通过平板涂布法将菌进行分离，然后挑取生长速度快、菌落数量占优势的菌种接种能够本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效提取杜仲胶的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：土壤采样，采集杜仲林下的腐殖质土，然后备用；S2：富集培养，将取自杜仲林下的土壤加入培养基中富集细菌、嗜热菌及真菌；S3：涂布分离，富集结束后取100μL菌液利用平板涂布法将菌进行分离，挑取生长速度快、菌落数量占优势、颜色及形态不同的菌株，进行菌株分离纯化保藏；S4：活化培养，将分离纯化后的菌种放入活化培养基中进行活化培养，活化培养基包括基础培养基和活化组分，基础培养基组分包括：L
‑
精氨酸12
‑
23份，NaHPO42
‑
9份，L
‑
胱氨酸二盐酸盐1
‑
7份，甘氨酸2.5
‑
6份，L
‑
组氨酸6
‑
16份，酵母浸出粉3
‑
12份，L
‑
异亮氨酸5
‑
11份，葡萄糖40
‑
60份，L
‑
赖氨酸盐酸盐2
‑
8份；S5：测定降解率，将活化培养后的菌株接种于装有杜仲叶的三角瓶中，置于30℃、150r/min条件下培养，测定不同培养时间的降解率；S6：酶活测定，对S4中活化培养得到的菌株发酵制备粗酶液，测定不同菌株发酵液中的果胶酶、纤维素酶、半乳糖醛酸活性，确定酶活较高的、可有效降解杜仲叶获得杜仲胶的优良菌株；S7：优化酶活条件，采用单因素试验对发酵时间、发酵温度、基质含水率、基质初始pH对杜仲胶发酵效果的影响进行测定，以确定最佳的发酵条件；S8：提取杜仲胶，根据实验得到的最佳酶活条件和优良菌株，大量富集培养菌株，把菌株投入杜仲叶片中对...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱海华，王晓瑞，王鋆坦，平洋，张梦雪，郭碧珊，谭静，王法云，
申请(专利权)人：河南省科学院，
类型：发明
国别省市：