高效降解蒽酮的施氏假单胞菌WZY-3-1及应用制造技术

本发明专利技术公开了一株高效降解蒽酮的施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)WZY

【技术实现步骤摘要】
高效降解蒽酮的施氏假单胞菌WZY
‑3‑
1及应用


[0001]本专利技术涉及微生物领域，尤其涉及一株高效降解蒽酮的施氏假单胞菌WZY
‑3‑
1及应用。

技术介绍

[0002]蒽酮又称9,10
‑
二氢蒽
‑9‑
酮，是一种有机化合物，化学式为C
14
H
10
O。外观为淡黄色针状晶体。不溶于水，溶于乙醇和热苯。不溶于冷氢氧化钠溶液，加热时溶解成蒽酚的碱金属盐。它的乙醇溶液呈蓝色荧光，用于制取苯绕蒽酮和染料，也用于色层分析试剂及体液中糖分的比色测定或肝脏组织中动物淀粉的测定等。其可以通过不同的接触途径进入生物体，由于其潜在的持久性，毒性和生物富集作用，造成严重的环境污染。
[0003]现有通过光催化降解、芬顿氧化和微生物降解等方法去除蒽酮。其中光催化降解是让有机化合物中的C
‑
C、C
‑
N键吸收紫外光的能量而断裂，使有机物逐渐降解，最后以CO2的形式离开体系。具有可使大多数污染物完全破坏而不形成中间产物，价廉、安全、有很好的稳定性的优点。但是催化效率相对低，并且悬浮相催化剂易凝聚且难以分离回收，活性成分损失大。芬顿氧化对环境友善、占地空间小、操作弹性大、初设成本低、氧化能力强。但是反应过程中有Fe(OH)3的产生，并且COD达一定的去除率后，无法再继续去除有机物，易造成H2O2用药的消耗。
[0004]在这些方法中，生物修复由于其潜在的成本效益和生态友好特性，将成为有效消除污染环境中蒽酮的有吸引力的替代方法。利用生物法处理含蒽酮废水具有能耗低、反应条件温和且效率较高，更加符合国家节能减排及可持续发展的战略，但是国内外对于蒽酮降解功能菌株的研究还鲜有报道，因此本研究为蒽酮降解筛选可用菌株，进行蒽酮生物降解，具有重要意义。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一株高效降解蒽酮的施氏假单胞菌WZY
‑3‑
1及应用。
[0006]本专利技术的具体技术方案为：
[0007]第一方面，本专利技术提供了一株高效降解蒽酮的施氏假单胞菌，微生物分类命名为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)WZY
‑3‑
1，已在2021年8月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：中国武汉武汉大学，邮政编码为430072；保藏编号为CCTCC NO:M 20211035；所述WZY
‑3‑
1的16S rRNA序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术的施氏假单胞菌WZY
‑3‑
1来源于浙江卫星能源有限公司废水处理池污泥中，该施氏假单胞菌经过分离及纯化获得，可利用蒽酮作为其生长的唯一碳源。
[0009]所述施氏假单胞菌WZY
‑3‑
1的特征为：菌落颜色为暗黄色，椭圆形不透明表面粗糙、干燥，无鞭毛，无芽孢，扫描电镜下观察该菌体的形态为椭圆状和短杆状。
[0010]第二方面，本专利技术提供了一株以高效降解蒽酮的施氏假单胞菌WZY
‑3‑
1为活性成
分的含菌悬液及含菌悬液的制备方法。
[0011]所述含菌悬液以高效降解蒽酮的施氏假单胞菌WZY
‑3‑
1经斜面培养、种子培养、发酵后制成。
[0012]所述含菌悬液的制备方法包括以下具体步骤：
[0013](1)斜面培养：将高效降解蒽酮的施氏假单胞菌WZY
‑3‑
1接种至斜面培养基上，在30
‑
35℃下培养1
‑
3d，获得斜面菌体；所述斜面培养基终浓度组成为：NH4Cl 1.16g
·
L
‑1，NaNO
3 0.72g
·
L
‑1，K2HPO
4 1g
·
L
‑1，KCl 0.2g
·
L
‑1，MgSO4·
7H2O 0.2g
·
L
‑1，CaCl
2 0.01g
·
L
‑1，蒽酮0.1g
·
L
‑1，FeSO4·
7H2O 0.001g
·
L
‑1，微量元素，琼脂18
‑
20g
·
L
‑1，pH值7.0
‑
8.0；
[0014](2)种子培养：从斜面菌体挑取菌落接种至LB培养基，在30
‑
35℃下培养12
‑
18h，获得种子液；所述LB培养基终浓度组成为NaCl 10g
·
L
‑1，酵母浸粉5g
·
L
‑1，蛋白胨10g
·
L
‑1，pH值7.0
‑
8.0；
[0015](3)发酵：将种子液以体积浓度2％的接种量接种至发酵培养基，在30
‑
35℃下培养12
‑
18h，获得发酵培养液即为含菌悬液；所述发酵培养基终浓度组成为：NH4Cl 1.16g
·
L
‑1，NaNO
3 0.72g
·
L
‑1，K2HPO
4 1g
·
L
‑1，KCl 0.2g
·
L
‑1，MgSO4·
7H2O 0.2g
·
L
‑1，CaCl
2 0.01g
·
L
‑1，蒽酮0.1g
·
L
‑1，FeSO4·
7H2O 0.001g
·
L
‑1，微量元素，pH值7.0
‑
8.0；
[0016]所述微量元素的终浓度组成为：EDTA 5000mg
·
L
‑1，CaCl2 5500mg
·
L
‑1，CuSO4
·
5H2O，250mg
·
L
‑1，FeSO4·
7H2O 500mg
·
L
‑1，ZnSO
4 430mg
·
L
‑1，CoCl2·
6H2O 240mg
·
L
‑1，MnCl2·
4H2O 990mg
·
L
‑1，H3BO
4 14mg
·
L
‑1。
[0017]第三方面，本专利技术提供了一种以高效降解蒽酮的施氏假单胞菌WZY
‑3‑
1为活性成分的含菌悬液在降解蒽酮中的应用及其具体方法。
[0018]具体方法为：将所述含菌悬液接种至含有终浓度为100mg
·
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株高效降解蒽酮的施氏假单胞菌，其特征在于，微生物分类命名为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)WZY
‑3‑
1，已在2021年08月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M 20211035；所述WZY
‑3‑
1的16S rRNA序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种以权利要求1所述施氏假单胞菌为活性成分的含菌悬液，其特征在于，所述含菌悬液以高效降解蒽酮的施氏假单胞菌WZY
‑3‑
1经斜面培养、种子培养、发酵后制成。3.一种权利要求2所述含菌悬液的制备方法，其特征在于，包括以下具体步骤：(1)斜面培养：将高效降解蒽酮的施氏假单胞菌WZY
‑3‑
1接种至斜面培养基上，在30
‑
35℃下培养1
‑
3d，获得斜面菌体；所述斜面培养基终浓度组成为：NH4Cl 1.16g
·
L
‑1，NaNO30.72g
·
L
‑1，K2HPO
4 1g
·
L
‑1，KCl 0.2g
·
L
‑1，MgSO4·
7H2O 0.2g
·
L
‑1，CaCl
2 0.01g
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L
‑1，蒽酮0.1g
·
L
‑1，FeSO4·
7H2O 0.001g
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L
‑1，微量元素，琼脂18
‑
20g
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L
‑1，pH值7.0
‑
8.0；(2)种子培养：从斜面菌体挑取菌落接种至LB培养基，在30
‑
35℃下培养12
‑
18h，获得种子液；所述LB培养基终浓度组成为NaCl 10g
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L
‑1，酵母浸粉5g
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L
‑1，蛋白胨10g
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L
‑1，pH值7.0
‑
8.0；(3)发酵：将种子液以体积浓度2％的接种量接种至发酵培养基，在30
‑
35℃下培养12
‑
18h，获得发酵培养液即为含菌悬液；所述发酵培养基终浓度组成为：NH4Cl 1.16g
·
L
‑1，NaNO
3 0.72g
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L
‑1，K2HPO
4 1g
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L
‑1，KCl 0.2g
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L
‑1，MgSO4·
7H2O 0.2g
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L
‑1，CaCl
2 0.01g
·
L
‑1，蒽酮0.1g
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨卫东，范昌海，钱立堂，周轶，马跃，陈波，
申请(专利权)人：平湖石化有限责任公司，
类型：发明
国别省市：