一种超大孔琼脂糖亲和层析凝胶及其制备方法技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，具体涉及一种超大孔琼脂糖亲和层析凝胶及其制备方法。通过双乳液法制备超大孔琼脂糖亲和层析凝胶及其系列复合凝胶，制备得到的大孔琼脂糖微球可以应对复杂生物体系样品的分离，避免因样品杂质而堵塞；同时结合刷状功能化聚合物提高琼脂糖空隙内部与样品的接触面积，实现对目标物的高效率富集。该方法基本将大孔琼脂糖高通透性和基质耐受性及小颗粒高柱效和亲和效果结合起来，实现了基质耐受性及样品富集效果的有效结合。结合。结合。

【技术实现步骤摘要】
一种超大孔琼脂糖亲和层析凝胶及其制备方法

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[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种超大孔琼脂糖亲和层析凝胶及其制备方法。

技术介绍
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[0002]随着生物技术的迅猛发展，琼脂糖凝胶色谱介质已成为下游生物产品纯化的关键技术之一，其在亲和、疏水、排阻色谱等领域均占据广阔的市场。琼脂糖微球具有开放性的网络结构，作为色谱介质在生化领域中具有异质性影响低、生物相容性高、易于操作等优势。目前市售及已报道的琼脂糖凝胶颗粒微球，其粒径范围主要集中于45μm～165μm(平均～90μm)，内部只存在单一类型的扩散孔，孔径在数纳米到几十纳米之间，对于以蛋白、细胞等为主要产物的现代生物技术下游工业而言，其局限性日益突出。对于蛋白等大分子生物物质，其较小的空隙导致孔内被停滞的流动相传质阻力很大，严重制约了其分离效率，尤其在大规模生产需要较高流速的情况下，大分子溶质来不及扩散进入琼脂糖微球内部，绝大多数仅与介质表面基团产生识别作用，进而导致琼脂糖介质的分辨率大大降低，无法满足快速分离的需求。因此开发新型色谱介质及方案，仍旧是目前解决生物技术下游产品瓶颈本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种超大孔琼脂糖亲和层析凝胶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)100mL2～8％的琼脂糖溶液加热至溶液透明；(2)待温度下降至油相的沸点时，将步骤(1)的琼脂糖溶液与50mL油相溶液混合，然后在1000rpm转速下搅拌1h得到乳液；其中，油相中含3
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6mLTween 80或曲拉通X100；(3)将步骤(2)的乳液倒入300mL相同油相试剂中，在机械搅拌状态下600rpm搅拌40min，随后在持续搅拌状态下冷却至室温；其中，油相中含20mL Span 80或85；(4)将步骤(3)的混合物通过3000rpm离心3min分离得到微球，然后将获得的微球依次用石油醚、异丙醇、乙醇及去离子水冲洗干净，抽滤备用；(5)称取40g步骤(4)制备的琼脂糖微球分散在120mL 0.9M NaOH溶液中并持续机械搅拌30min，随后加入64mL二甲基亚砜，12mL乙醇及20mL季戊四醇缩水甘油醚或20mL环氧氯丙烷或20mL 2,3
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二溴
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丙醇，随后将体系于40℃条件下搅拌反应6h；获得的交联琼脂糖凝胶分别用乙醇及去离子水冲洗干净，得到超大孔琼脂糖亲和层析凝胶AG。2.如权利要求1所述的超大孔琼脂糖亲和层析凝胶的制备方法，其特征在于：所述油相为液体石蜡，步骤(2)待温度下降至85℃时与油相混合，并在85℃条件下搅拌。3.如权利要求1所述的超大孔琼脂糖亲和层析凝胶的制备方法，其特征在于：所述油相为环己烷，步骤(2)待温度下降至75℃时与油相混合，并在75℃条件下搅拌。4.一种利用权利要求1
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3中任一超大孔琼脂糖亲和层析凝胶AG制备环氧化层析凝胶的方法，其特征在于包括以下步骤：40gAG分散在60mL 0.9M NaOH溶液中，机械搅拌10min后添加60mL环氧氯丙烷及75mg硼氢化钠，随后于40℃条件下振荡反应6h，获得的琼脂糖凝胶用80％乙醇水溶液及去离子水充分冲洗干净后备用，得到环氧化层析凝胶AG@epoxy。5.一种利用权利要求4中环氧化层析凝胶AG@epoxy制备环氧化层析凝胶的方法，其特征在于包括以下步骤：20gAG@epoxy分散在50mL碳酸盐缓冲液，随后加入2mL聚乙烯亚胺；混合物于摇床上充分振荡反应24h后获得的琼脂糖微球用去离子水充分冲洗并抽滤后，得到氨基化层析凝胶AG@NH2。6.一种利用权利要求5中氨基化层析凝胶AG@NH2制备引发剂功能化层析凝胶的方法，其特征在于包括以下步骤：取10gAG@NH2分散在40mL四氢呋喃或N,N
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二甲基甲酰胺中，随后添加1.83mL三乙胺；混合物在
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20℃冷却15min，随后逐滴滴加1.86mL 2
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溴异丁酰溴；随后混合物于室温下机械搅拌反应12h，随后用无水乙醇及去离子水充分...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛长湖，郑洪伟，魏发奕，王长云，
申请(专利权)人：青岛海洋食品营养与健康创新研究院，
类型：发明
国别省市：