本发明专利技术涉及一种适合放大生产的藏药五味甘露水煎煮液的提取工艺，属药物提取分离领域。本发明专利技术不使用发酵和辅助药物配伍，利用传统的绿色水煎煮提取方法；杜鹃、麻黄、水柏枝、青蒿、刺柏等份配伍，浸泡时间8h，料液比1:12，提取时间为60min，提取温度为60℃，水提次数为3次进行水煎煮液的提取，其方法简易、耗能少、成本低、提取率高，具有较好的工业化价值。具有较好的工业化价值。具有较好的工业化价值。
【技术实现步骤摘要】
一种适合放大生产的藏药五味甘露水煎煮液的提取工艺
[0001]本专利技术涉及一种适合放大生产的藏药五味甘露水煎煮液的提取工艺，属药物提取分离领域。
技术介绍
[0002]五味甘露是藏药典籍《四部医典》中所记载的经典方剂，主要功效是治疗类风湿性关节炎等藏医所规定的“隆”病范围内的疾病。五味甘露的主方是由杜鹃、刺柏、水柏枝、麻黄和青蒿组成，其具体的入药植物基源依然存在着一些争议。可以在主方的基础上增加或减少药物的组成。五味甘露具有非常丰富的药理活性，具有非常大的研究价值。根据目前的研究，林扎西卓玛通过发酵、煎熬及辅助药物的配伍这3个步骤:首先将等比例五味药材或刺柏叶、杜鹃、水柏枝、藏麻黄、野蒿以1∶1∶2∶2∶3在10～15℃发酵5～7d，然后加入辅助药物，加水浸泡30min后收集滤液，重复三遍；最后将3次滤液混合放冷至50～55℃，添加白酒和辅助方的药粉或药液，搅匀即成。在艾措千等的专利中，将烈香杜鹃、圆柏、大籽蒿、水柏枝、麻黄等份配伍，用水煎煮，利用酒曲和粮食白酒发酵48h，取出晒干并用水蒸气蒸馏法对挥发油成分进行富集，再用30％～70％的水或乙醇加热回流提取3次，每次提取2h，将3次的提取液合并后浓缩，然后冷却沉淀48h，过滤将滤液经分子筛超滤柱后收集或收集滤液经大孔树脂的30％～90％乙醇洗脱液，浓缩至一定体积后加入之前富集的挥发油和乙醇或者吐温增溶，搅匀即成。具体的标准化的五味甘露的制作工艺还有待进一步地考证和规范，许多报道五味甘露药液提取需要经过发酵。
技术实现思路
[0003]为了提供一种适合放大生产的藏药五味甘露水煎煮液的提取工艺，本专利技术采用如下技术方案：
[0004]本专利技术的第一目的在于提供一种适合放大生产的藏药五味甘露水煎煮液的提取工艺，不包含发酵过程，不使用辅助药物配伍，而采用水煎煮提取方法，具体包括如下步骤：
[0005](1)浸泡：取等份的杜鹃、麻黄、水柏枝、青蒿和刺柏粗粉浸泡于水中，料液比1:12，浸泡时间8h；
[0006](2)水煎煮提取：将步骤(1)所得混合物进行水煎煮提取，提取温度为60℃，水煎煮提取的次数为3次，每次提取时间为60min，合并提取液，过滤浓缩、真空干燥，制得五味甘露水提物干粉。其对巨噬细胞中炎症因子TNF
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α和NLRP3有明显抑制作用。
[0007]在一种实施方式中，所述提取物的有效剂量为0.5mg/mL。
[0008]本专利技术的第二目的在于提供由前述的工艺得到的藏药五味甘露水煎煮液提取物。
[0009]本专利技术的第三目的在于提供一种基于藏药五味甘露的组合物，包括前述的藏药五味甘露水煎煮液提取物和药物载体。
[0010]作为本专利技术的一种实施方式，所述药物载体包括稀释剂、赋形剂或溶剂化物。
[0011]本专利技术的提取方法没有通过发酵，而是使用最传统的水煎煮提取法，结合细胞筛
选其抗炎的药效活性优化提取工艺，相较于现有技术，具有如下有益效果：
[0012](1)相对于发酵工艺，本专利技术工艺周期短、耗能少、成本低，具有较好的工业化价值。
[0013](2)相对于发酵工艺，本专利技术工艺在放大生产过程中不容易染菌，防止了其他微生物的入侵，以保证生产的顺利进行，从而避免造成经济的损失。
[0014](3)相对于发酵工艺，本专利技术工艺避免了在发酵过程中产生新的有危害的活性物质。
[0015](4)本专利技术工艺在研究过程中，发现了其对脂多糖诱导的RAW246.7细胞的NLRP3炎症小体具有明显的抑制作用，这是其他工艺从未报道过的。需要说明的是，由于NLRP3炎性小体作为固有免疫的重要组分在机体免疫反应和疾病(家族性周期性自身炎症反应、2型糖尿病、阿尔兹海默症和动脉粥样硬化症等)发生过程中具有重要作用，能被多种类型的病原体或危险信号所激活。因此，作为炎症反应的核心，NLRP3炎症小体可能为各种炎症性疾病的治疗提供新的靶点。
[0016](5)本专利技术研究发现藏药五味甘露水煎煮液含量和药效(以巨噬细胞释放炎症因子TNF
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α及NLRP3表达及干粉得率为评价指标)影响因素程度为：C(水提次数)＞A(料液比)＞B(提取时间)，说明水提次数对含量药效影响最为显著。综合直观分析和方差分析可以确定藏药五味甘露水煎煮液最佳提取工艺为A3B2C3，即料液比1:12，提取时间为60min，水提次数为3次。
[0017](6)本专利技术试验研究发现，水煎煮提取步骤之前先对五味甘露粗粉进行浸泡，可以显著增加五味甘露水提物干粉得率，并显著提升其对于巨噬细胞中炎症因子TNF
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α和NLRP3的显抑制效果。
附图说明
[0018]图1为实施例2的浸泡时间对五味甘露药材吸水率的影响。
[0019]图2为实施例3的正常组、模型组和9组给药组对Raw246.7细胞中TNF
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α基因mRNA表达的影响。
[0020]图3为实施例3的正常组、模型组和9组给药组对Raw246.7细胞中NLRP3基因mRNA表达的影响。
[0021]图4为实施例5的工艺制得的五味甘露水提物干粉对Raw246.7细胞中TNF
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α基因mRNA表达的影响。
[0022]图5为实施例5的工艺制得的五味甘露水提物干粉对Raw246.7细胞中NLRP3基因mRNA表达的影响。
[0023]图6为对比例的工艺制得的五味甘露水提物干粉对Raw246.7细胞中TNF
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α基因mRNA表达的影响。
[0024]图7为对比例的工艺制得的五味甘露水提物干粉对Raw246.7细胞中NLRP3基因mRNA表达的影响。
具体实施方式
[0025]干粉得率：
[0026]式中：T—干粉得率(％)
[0027]M1—各组分浓缩干燥后的质量(g)
[0028]M0—粗物质粉末的质量(g)。
[0029]实施例1：
[0030]一种适合放大生产的藏药五味甘露水煎煮液的提取工艺，不包含发酵过程，不使用辅助药物配伍，而采用水煎煮提取方法，具体包括如下步骤：
[0031](1)浸泡：取杜鹃、麻黄、水柏枝、青蒿和刺柏粗粉各5g，共25g于锥形瓶中，浸泡于去离子水中，料液比1:(8～12)，浸泡时间8h；
[0032](2)水煎煮提取：将步骤(1)所得混合物转入蒸馏烧瓶进行水煎煮提取，提取温度为60℃，每次提取时间为30～90min，水煎煮提取的次数为1～3次，合并提取液，过滤取滤液，浓缩、真空干燥至恒重，制得五味甘露水提物干粉。
[0033]实施例2：浸泡时间的优化
[0034]准确称取7份五味甘露粗粉，每份5g，每份五味甘露粗粉由杜鹃、麻黄、水柏枝、青蒿、刺柏各1g组成。每1份五味甘露粗粉加10份水进行浸泡处理，将浸泡时间设梯度，7份五味甘露粗粉的浸泡时间分别控制为2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h，待浸泡结束后，滤过，计算不同浸泡时间本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种适合放大生产的藏药五味甘露水煎煮液的提取工艺，其特征在于，不包含发酵过程，不使用辅助药物配伍，而采用水煎煮提取方法，具体包括如下步骤：(1)浸泡：取等份的杜鹃、麻黄、水柏枝、青蒿和刺柏粗粉浸泡于水中，料液比1:12，浸泡时间8h；(2)水煎煮提取：将步骤(1)所得混合物进行水煎煮提取，提取温度为60℃，水煎煮提取的次数为3次，每次提取时间为6...
【专利技术属性】
技术研发人员：米玛，邱丽颖，朱雪锐，戚梦婷，蔡维维，侯豹，张建峰，宗咏花，于晓依，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：
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