一种复合高值参考品的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种复合高值参考品的制备方法，包括以下步骤：S1：向混合血清加入氯化钙溶液和硫酸葡聚糖溶液，4℃静置过夜，次日离心去除上清，向沉淀中加入草酸钾缓冲液，混匀充分，二次离心去除沉淀，收集上清透析，获得复合高值参考品的粗品；S2：加入保护剂，混匀，保护剂成份为柠檬酸三钠，海藻糖，硫代硫酸钠，山梨醇和丙氨酸；S3：利用冻干机内冻干，得复合高值参考品最终产物。复合高值参考品添加了保护剂，使复合物在液体状态下或者冻干后稳定后更加好，冻融不易出现沉淀，且无基质效应；用于配制对应的载脂蛋白A1、载脂蛋白B和脂蛋白a三项的检测校准品或参考品，在试剂检测的应用中具有良好的检测性能，检测精度高，响应效果好。响应效果好。响应效果好。

【技术实现步骤摘要】
一种复合高值参考品的制备方法


[0001]本专利技术属于体外诊断
，具体涉及一种载脂蛋白A1、载脂蛋白B和脂蛋白a三项的复合高值参考品的制备方法，用于配制对应的检测校准品或质控品。

技术介绍

[0002]临床上，脂蛋白三项血清载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)和脂蛋白a(Lpa)测定常被用于心脑血管病的风险度评估、药物治疗的疗效监察以及异常脂蛋白血症的诊断，目前国际和国内通用的血清ApoA1、ApoB和Lpa测定试剂盒，均采用免疫比浊法，因其快速、准确、精密并适用于各种类型的自动生化分析仪，特别适用于临床实验室作大批量标本的测定。但测定时需釆用多点作非线性校准，市场上大多数原料都存在基质效应，目前校准品的大多来源为人的样品混合物，如混合血清，因此需要一个稳定的复合高值参考品用来配制校准品或者质控品。
[0003]传统的方法是将健康人的混合血清直接进行超速离心，将血清通过多次超速离心后进行分离提纯，之后将提纯后的校准物质冷冻干燥，在低温下保存。这种方法不仅离心次数多，耗时长，而且冻干后的校准物复溶时，在高温及反复冻融条件下会引起部分分析物质被破坏，溶液易浑浊，稳定性一般，也会出现一定的基质效应。如果不注意使用会导致校准结果偏高，实际测得病人标本结果会影响临床判断。国外知名诊断试剂公司像罗氏诊断以及朗道公司研发的血脂校准品，稳定时间长，准确度好，产品可溯源性强，但价格较贵。临床中综合考虑到成本、操作等因素，中小医院使用起来不是很方便。
[0004]因此，有必要研发出一种在液体状态稳定，冻干后保存期限更长，使用起来更方便的载脂蛋白A1、载脂蛋白B和脂蛋白a三项的复合高值参考品。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是，提供一种载脂蛋白A1、载脂蛋白B和脂蛋白a三项的复合高值参考品的制备方法，所制得的复合高值参考品，液体状态稳定，冻干后保存期限长。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是，该复合高值参考品的制备方法，包括以下步骤：
[0007]S1：向混合血清中加入质量体积比为0.5％
‑
1.5％的氯化钙溶液和0.5％
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1.5％的硫酸葡聚糖溶液，加入量分别为50μL/L血清；4℃静置过夜，次日离心去除上清，向沉淀中加入质量体积比为3％
‑
6％的草酸钾缓冲液，加入量为100μl/L血清，混匀充分，二次离心去除沉淀，收集上清透析，获得复合高值参考品的粗品。
[0008]上述技术方案制备得到的复合高值参考品，添加保护剂，使复合物在液体状态下或者冻干后稳定后更加好，冻融不易出现沉淀，且无基质效应；用于配制对应的载脂蛋白A1、载脂蛋白B和脂蛋白a三项校准品，在试剂检测的应用中具有良好的检测性能，检测精度高，响应效果好。
[0009]优选的，还包括有以下步骤：
[0010]S2：加入保护剂，混匀，保护剂成份为柠檬酸三钠，海藻糖，硫代硫酸钠，山梨醇和丙氨酸。
[0011]优选的，还包括有以下步骤：
[0012]S3：利用冻干机内冻干，得复合高值参考品最终产物。
[0013]优选的，将所述步骤S3中制备得到的复合高值参考品配制对应的载脂蛋白A1、载脂蛋白B和脂蛋白a的校准品或质控品。
[0014]优选的，在所述步骤S1中，4℃静置过夜的时间为10
‑
16小时。
[0015]优选的，在所述步骤S2中，所述保护剂的成份为0.5％的柠檬酸三钠，1％的海藻糖，1％的硫代硫酸钠，2.5％的山梨醇和8％的丙氨酸，均为质量体积比。
[0016]优选的，在所述步骤S3中，冻干后的复合高值参考品最终产物37℃放置。
[0017]优选的，还包括有以下步骤：
[0018]S3：加入保护剂后，在37℃储存。
[0019]优选的，还包括有以下步骤：
[0020]S3：加保护剂冻干后复溶在4℃储存。
[0021]与现有技术相比：本专利技术的混合血清均通过乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒表面抗体以及人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗体检测，且检测结果须呈阴性，确认无毒无害，在进行测定时不会对被测定者造成损害，提高了生物安全性。且做出来的复合高值参考品基质效应小，不管是在冻干或者液体状态下稳定性都非常好，活性浓度高，可满足临床上需要，稀释成不同梯度的校准品或者质控品，能够提高测定样本中载脂蛋白A1、载脂蛋白B和脂蛋白a含量测定的准确性。
附图说明
[0022]下面结合附图和本专利技术的实施方式进一步详细说明：
[0023]图1是实施方案一中复合高值参考品中载脂蛋白B的性能验证相关性分析图；
[0024]图2是实施方案一中复合高值参考品中载脂蛋白A1的性能验证相关性分析图；
[0025]图3是实施方案一中复合高值参考品中脂蛋白a的性能验证相关性分析图。
具体实施方式
[0026]本专利技术的复合高值参考品的制备方法，包括以下步骤：
[0027]S1：向混合血清中加入质量体积比为0.5％
‑
1.5％的氯化钙溶液和0.5％
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1.5％的硫酸葡聚糖溶液，加入量分别为50μL/L血清；4℃静置过夜，次日离心去除上清，向沉淀中加入质量体积比为3％
‑
6％的草酸钾缓冲液，加入量为100μl/L血清，混匀充分，二次离心去除沉淀，收集上清透析，获得复合高值参考品的粗品；
[0028]S2：加入保护剂，混匀，保护剂成份为柠檬酸三钠，海藻糖，硫代硫酸钠，山梨醇和丙氨酸；
[0029]S3：利用冻干机内冻干，得复合高值参考品最终产物。
[0030]步骤S3中冻干程序参数如下表1所示：
[0031][0032]表1
[0033]将所述步骤S3中制备得到的复合高值参考品配制对应的载脂蛋白A1、载脂蛋白B和脂蛋白a的校准品或质控品；在所述步骤S1中，4℃静置过夜的时间为10
‑
16小时；在所述步骤S2中，所述保护剂的成份为质量体积比为0.5％的柠檬酸三钠，1％的海藻糖，1％的硫代硫酸钠，2.5％的山梨醇和8％的丙氨酸。
[0034]其中，在所述步骤S3中，冻干后的复合高值参考品最终产物37℃放置；
[0035]或S3：加入保护剂后，在37℃储存；或S3：加保护剂冻干后复溶在4℃储存。
[0036]实施方案一：直接采用步骤S1得到的复合高值参考品的粗品，即向混合血清加入质量体积比为1％的氯化钙和1％的硫酸葡聚糖溶液，加入量分别为50μL/L血清；4℃静置过夜，次日离心去除上清，向沉淀中加入质量体积比为5％的草酸钾溶液，加入量为100μl/L血清，混匀充分，二次离心去除沉淀，收集上清透析，获得脂蛋白三项的复合高值参考品的粗品。利用四川迈克生物科技股份有限公司的免疫比浊法检测试剂盒和日立7060的全自动生化分析仪设备检测步骤S1得到的复合高值参考品的粗品活性浓度。
[0037本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合高值参考品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：向混合血清中加入质量体积比为0.5％
‑
1.5％的氯化钙溶液和0.5％
‑
1.5％的硫酸葡聚糖溶液，加入量分别为50μL/L血清；4℃静置过夜，次日离心去除上清，向沉淀中加入质量体积比为3％
‑
6％的草酸钾缓冲液，加入量为100μl/L血清，混匀充分，二次离心去除沉淀，收集上清透析，获得复合高值参考品的粗品。2.根据权利要求1所述的复合高值参考品的制备方法，其特征在于，还包括有以下步骤：S2：加入保护剂，混匀，保护剂成份为柠檬酸三钠，海藻糖，硫代硫酸钠，山梨醇和丙氨酸。3.根据权利要求2所述的复合高值参考品的制备方法，其特征在于，还包括有以下步骤：S3：利用冻干机内冻干，得复合高值参考品最终产物。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的复合高值参考品的制备方法，其特征在于，将所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：许行尚，杰弗瑞，
申请(专利权)人：南京岚轩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：