RNA作用抑制剂及其应用制造技术

本发明专利技术提供基于RNA干扰、ASO的靶RNA作用抑制剂。关于RNA干扰剂，具备针对靶RNA的随从链和引导链，上述随从链和上述引导链配对而成的双链RNA的两端构成平末端，在以下(a)和(b)上，具备选自以下式(1)和(2)表示的单元中的1种或2种以上；(a)上述随从链的5'末端侧和3'末端侧以及(b)上述引导链的3'末端侧。式(1)(其中，X表示氧原子或硫原子。)式(2)(其中，X表示氧原子或硫原子。)))

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】RNA作用抑制剂及其应用


[0001](关联申请的相互参照)本申请基于2019年8月23日提出申请的日本专利申请日本特愿2019
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153235主张优先权，该申请的全部内容通过引用而援引至本申请。本说明书涉及以RNA为靶的更实用的RNA作用抑制剂。

技术介绍

[0002]正在进行将以RNA为靶的siRNA、反义寡核苷酸(ASO)等小分子RNA作为有效成分的RNA药剂的开发。为了提高这类RNA药剂在生物体内的稳定性、递送性等，尝试对RNA进行各种化学修饰(专利文献1)。现有技术文献专利文献
[0003]专利文献1:日本特开2019
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30312号公报

技术实现思路

专利技术所要解决的技术问题
[0004]但是，针对核酸酶抗性、RNA药剂的敲除效果，具有实效性的化学修饰方式尚未进行充分研究。对于siRNA，也需要抑制脱靶效应。本说明书提供作为基于RNA干扰、ASO的靶RNA作用抑制剂等的、具有更具有用性的化学修饰方式的寡核苷酸及其应用等。
[0005]本专利技术人等还发现：作为代替寡核苷酸中的核糖/脱氧核糖的骨架元件，使用在具有碳原子数为3个的链状部分的L
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苏氨醇中介由酰胺键具有碱基类似物的结构单元和/或在丝氨醇中介由酰胺键具有碱基类似物的结构单元，并将该结构单元导入至作为siRNA的双链寡核苷酸的3
’
末端和5
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末端，从而在提高其核酸酶抗性的同时抑制脱靶效应，此外还提高在靶活性。
>[0006]另外，本专利技术人等还发现：在作为反义miRNA寡核苷酸(AMO)的单链RNA中具有上述结构单元的寡核苷酸也发挥高的反义效果。
[0007]此外，本专利技术人等还发现：作为具有上述结构单元的Gapmer也是有用的。
[0008]此外，本专利技术人等还发现：具有上述结构单元等的信标探针(beacon probe)在miRNA的检测中是有用的。
[0009]本说明书基于以上见解而提供以下方案。
[0010][1]一种RNA干扰剂，其具备针对靶RNA的随从链和引导链，上述随从链和上述引导链配对而成的双链RNA的两端构成平末端，在以下(a)和(b)上，具备以下式(1)和(2)表示的单元中的任一者，(a)上述随从链的5
’
末端侧和3
’
末端侧(b)上述引导链的3
’
末端侧。[化学式1](其中，X表示氧原子或硫原子。)[化学式2](其中，X表示氧原子或硫原子。)[2]根据[1]记载的RNA干扰剂，其中，上述(a)上具备式(2)表示的单元，上述(b)上具备式(1)表示的单元。[3]根据[1]或[2]记载的RNA干扰剂，其中，上述单元具备能够提高选自RNase抗性、在靶活性和脱靶抑制活性中的1种或2种以上性质的种类和个数。[4]根据[1]～[3]中任一项记载的RNA干扰剂，其以抑制NeK2基因的表达为目标。[5]一种抑制靶基因表达的方法，其使用RNA双链抑制靶基因的表达，上述RNA双链具备针对靶RNA的随从链和引导链，上述随从链和上述引导链配对而成的双链RNA的两端构成平末端，在以下(a)和(b)上，具备选自以下式(1)和(2)表示的单元中的1个或2个以上，(a)上述随从链的5
’
末端侧和3
’
末端侧(b)上述引导链的3
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末端侧。[化学式3](其中，X表示氧原子或硫原子。)[化学式4](其中，X表示氧原子或硫原子。)[6]一种反义核酸，其具备针对靶RNA的反义链，上述反义链包含选自以下式(1)和式(2)表示的单元的1个或2个以上，且具备能够与上述靶RNA特异性杂交的杂交区域。[化学式5](其中，X表示氧原子或硫原子。)[化学式6](其中，X表示氧原子或硫原子。)[7]根据[6]记载的反义核酸，其中，上述靶RNA为miRNA。[8]一种反义核酸，其具备：针对靶RNA的反义链、以及在上述反义链的两末端上的、分别包含选自以下式(1)和(2)表示的单元中的1个或2个以上的2个侧链。[化学式7](其中，X表示氧原子或硫原子。)[化学式8](其中，X表示氧原子或硫原子。)[9]一种靶RNA检测剂，其具备：包含选自以下式(1)和式(2)表示的单元中的1个或2个以上，且具有能够与靶RNA特异性杂交的杂交区域的探针链；以及具备显示上述探针链与上述靶RNA发生杂交的信号物。[化学式9](其中，X表示氧原子或硫原子。)[化学式10](其中，X表示氧原子或硫原子。)
附图说明
[0011]图1是表示RNA干扰剂的示例的图。图2是表示实施例1制作的RNA干扰剂的RNA干扰(荧光素酶测定)的评价结果的图。图3是表示实施例1制作的RNA干扰剂的脱靶效应的评价结果的图。图4是表示实施例1制作的RNA干扰剂的RNA干扰(NeK2蛋白的免疫印迹)的评价结果的图。图5是表示实施例1制作的RNA干扰剂的利用MTT测定得到的细胞增殖能力的评价结果的图。图6是表示实施例1制作的RNA干扰剂的酶耐受能力的评价结果的图。图7是表示使用实施例2制作的Gapmer型反义核酸的小鼠给药实验的规程的概要
的图。图8是表示实施例2制作的Gapmer型反义核酸带来的SGLT2敲除活性(mRNA量)的评价结果的图。图9是表示实施例2制作的Gapmer型反义核酸带来的SGLT2敲除活性(蛋白量)的评价结果的图。图10是表示实施例2制作的Gapmer型反义核酸带来的脱靶效应的评价结果的图。图11是表示实施例2制作的Gapmer型反义核酸带来的尿糖排泄促进的评价结果的图。图12是表示实施例4制作的分子信标型探针与靶RNA杂交时的荧光光谱的图。图13是表示实施例4制作的分子信标型探针带来的靶RNA的检测量的图。图14是表示使用实施例5制作的Gapmer型反义核酸的小鼠给药实验的规程的概要的图。图15是表示实施例5制作的Gapmer型反义核酸带来的SGLT2的敲除活性(mRNA量)的评价结果的图。图16是表示实施例5制作的Gapmer型反义核酸带来的SGLT2敲除活性(蛋白量)的评价结果的图。图17是表示实施例5制作的Gapmer型反义核酸带来的尿糖排泄促进的评价结果的图。图18是实施例5制作的Gapmer型反义核酸带来的肝脏的副作用的评价结果(AST)的图。图19是表示实施例5制作的Gapmer型反义核酸带来的肝脏的副作用的评价结果(ALT)的图。图20是表示实施例5制作的Gapmer型反义核酸带来的肝脏的副作用的评价结果(ALP)的图。图21是表示使用实施例6制作的Gapmer型反义核酸的小鼠给药实验的规程的概要的图。图22是表示实施例6制作的Gapmer型反义核酸带来的肾脏中的SGLT2的mRNA量(0W)的评价结果的图。图23是表示实施例6制作的Gapmer型反义核酸带来的肾脏中的SGLT2的mRNA量(1W)的评价结果的图。图24是表示实施例6制作的Gapmer型反义核酸带来的肾脏中的SGLT2的mRNA量(2W)的评价结果的图。
具体实施方式...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种RNA干扰剂，其特征在于，具备针对靶RNA的随从链和引导链，所述随从链和所述引导链配对而成的双链RNA的两端构成平末端，在以下(a)和(b)上，具备选自以下式(1)和(2)表示的单元中的1个或2个以上，(a)所述随从链的5
’
末端侧和3
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末端侧，(b)所述引导链的3
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末端侧，式(1)，X表示氧原子或硫原子，式(2)，X表示氧原子或硫原子。2.根据权利要求1所述的RNA干扰剂，其中，所述(a)上具备式(2)表示的单元，所述(b)上具备式(1)表示的单元。3.根据权利要求1或2所述的RNA干扰剂，其中，所述单元具备能够提高选自RNase抗性、在靶活性和脱靶抑制活性中的1种或2种以上的种类和个数。4.根据权利要求1～3中任一项所述的RNA干扰剂，其中，所述RNA干扰剂以抑制NeK2基因的表达为目标。5.一种抑制靶基因表达的方法，其特征在于，使用RNA双链抑制靶基因的表达，所述RNA双链具备针对靶RNA的随从链和引导链，所述随从链和所述引导链配对而成的双链RNA的两端构成平末端，在以下(a)和(b)上，具备选自以下式(1)和(2)表...

【专利技术属性】
技术研发人员：浅沼浩之，神谷由纪子，村山惠司，坪井俊树，道家智仁，石本卓嗣，丸山彰一，国料俊男，向当绫子，石丸勇雄，浅井凌一，中社彩香，杉田朋枝，西圭介，汤口基，松本政宪，
申请(专利权)人：日华化学株式会社北海道系统，
类型：发明
国别省市：