一种改善微循环的生物活性肽及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种改善微循环的海星生物活性肽及其制备方法，本发明专利技术的海星生物活性肽来自于多棘海星，是通过木瓜蛋白酶或复合蛋白酶酶解获得，具有显著的抗氧化性以及调节微循环血流的功效，可与其他活性多肽如牡蛎多肽和/或海参多肽等组合使用，具有广阔的应用前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
一种改善微循环的生物活性肽及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物制药领域，更为具体的，本专利技术涉及一种可改善微循环的生物活性肽及其制备方法。

技术介绍

[0002]海星属棘皮动物门海星纲，亦称星鱼、海盘车，约有 500 种，资源丰富，分布广泛。海星为肉食性动物，专以扇贝、鲍鱼等海珍品为食，严重影响沿海地区的贝类养殖。若能对海星进行有效的开发利用，使其作为营养、无毒的新型海洋食品原料，则可以化害为利。近年来研究发现，海星含有蛋白质（多肽、氨基酸）、多糖、皂苷、甾醇、类胡萝卜素和脑苷脂等多种功能成分，因而具有药用和保健功能。
[0003]然而目前对于多棘海星的利用相关报道较少，特别是海星中的活性多肽对微循环的作用，尚无相关文献报道。

技术实现思路

[0004]为了填补现有技术中的空白，本专利技术提供一种改善微循环的生物活性肽及其制备方法，具体的，本专利技术提供如下的技术方案：本专利技术的第一个方面，提供一种可用于改善微循环的生物活性肽的制备方法，所述方法包括如下步骤：1、新鲜多棘海星通过微波真空干燥技术进行干燥，粉碎至80目左右大小；2、称取多棘海星冻干粉，溶解于去离子水，在蛋白酶的最适温度下水浴预热，用HCl或 NaOH调节pH值至酶最适pH值，加入酶液进行酶解，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶或复合蛋白酶；3、采用SDS
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PAGE对酶解程度进行判定，当冻干粉中可溶性蛋白含量趋于稳定时认定为酶解完成；4、酶解结束后用沸水浴灭酶，冷却至室温后，将酶解液离心，取上清液；冷冻干燥后即得所述海星生物活性肽。
[0005]在一种实施方式中，所述微波真空干燥条件为：微波功率密度为5w/g，脉冲时间为60s，真空度为0.095Mpa。
[0006]在一种实施方式中，所述复合蛋白酶为protamex。
[0007]在一种实施方式中，木瓜蛋白酶的酶解条件为：酶：底物（v/v）为1:10，pH=6.5，水解温度55℃，酶量8000U/g。
[0008]在一种实施方式中，复合蛋白酶的酶解条件为：酶：底物（v/v）为1:10，pH=6.5，水解温度50℃，酶量8000U/g。
[0009]在一种实施方式中，步骤3中SDS
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PAGE电泳条件为：分离胶与浓缩胶浓度分别为 12.5％和 4％，电压为120V，时间为2h，考马斯亮蓝R
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250染色。
[0010]在一种实施方式中，酶解液离心条件为10000r/min，4℃，15min。
[0011]本专利技术的第二个方面，提供上述方法制备获得的生物活性多肽。
[0012]本专利技术的第三个方面，提供一种上述生物活性多肽在制备抗氧化制剂中的应用。
[0013]本专利技术的第四个方面，提供一种上述生物活性多肽在制备改善体内微循环药物中的应用。
[0014]本专利技术的第五个方面，提供一种用于抗氧化或改善体内微循环的组合物，所述组合物包括上述的多棘海星活性多肽。
[0015]在一种实施方式中，上述组合物还包括其他活性多肽，优选的，上述组合物还包括海参活性多肽和/或牡蛎活性多肽。
[0016]在一种实施方式中，上述组合物为食品、保健品和/或药物。
附图说明
[0017]附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1为各组酶解产物抗氧化能力测定：酶解时间2h时，DPPH自由基清除率（%）由高到低为：木瓜蛋白酶
→
酸性蛋白酶
→
复合蛋白酶
→
胰蛋白酶
→
碱性蛋白酶
→
胃蛋白酶。
具体实施方式
[0018]以下结合附图对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0019]实施例1 多棘海星生物活性肽的提取参数筛选1. 新鲜多棘海星通过微波真空干燥技术进行干燥，微波功率密度为5w/g，脉冲时间为60s，真空度为0.095Mpa，烘干至湿基含水率为10%左右，粉碎至80目左右大小。
[0020]2. 称取多份0.5g多棘海星冻干粉，均分别溶解于10ml去离子水，在相应酶的最适温度下水浴预热20分钟后，用1M HCl或1M NaOH调节pH值，分别加入各组酶液进行酶解，酶解条件如表1所示：表1 酶解条件3. 采用SDS
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PAGE对酶解程度进行判定。SDS
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PAGE实验根据Laemm Li体系进行电泳，分离胶与浓缩胶浓度分别为 12.5％和 4％，电压为120V，时间为2h，考马斯亮蓝R
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250
染色。不同时间获得的酶解产物分别以体积比 1∶1与样品处理液混合,于沸水浴煮沸5min后上样。采用考马斯亮蓝R
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250进行染色，当冻干粉中可溶性蛋白含量趋于稳定时认定为酶解完成。
[0021]4. 酶解结束后用沸水浴灭酶 15min，冷却至室温；酶解液离心（10000r/min，4℃，15min），取上清液；冷冻干燥，样品密封冷藏备用。
[0022]5. 肽得率的计算：采用三氯乙酸(TCA)沉淀法与甲醛滴定法相结合进行测定。取 10mL 酶解液加10mL 20%(g/g)TCA，搅匀静置 0.5h 后在 4800r/min 下离心 10min，所得的上清液记作上清液 TCA，分别用凯氏定氮法和甲醛滴定法测定上清液中的总氮含量和氨态氮含量，则肽氮量和肽得率按式(1)和(2)进行计算：上清液总肽氮量＝上清液
TCA
总氮量－上清液
TCA
总氨态氮量
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(式1)肽得率＝上清液总肽氮含量/原料总蛋白氮量
×
100%
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
（式2）各组肽得率结果如表2所示，复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶和酸性蛋白酶的酶解产物中肽得率均较高。说明酸性环境对多棘海星的酶解效果较好。
[0023]表2 各种酶的酶解肽得率实施例2 酶解产物生理功能的测定1. 酶解产物体外抗氧化活性的测定方法：调整各组蛋白酶解产物的浓度，使之都在同一浓度下（35mg/mL）测定抗氧化活性。
[0024]将 2mL DPPH
•
溶液(0.2mmol/L，溶于 95%乙醇)置于试管中，加入 2mL 酶解液，振荡混匀，室温放置 30min 后，在 517nm 处测其吸光值(Ai)，以 2mL 95%乙醇加入 2mL蒸馏水调零，对照为 2mL DPPH
•
溶液加上 2 mL95%乙醇在测定波长下的吸光值(Ac)，2mL 酶解液和 2mL95%乙醇混合后在测定波长的吸光值为 Aj。
[0025]酶解液对 DPPH
•
的清除能力用抑制率 R 表示：R(%)＝[1－(Ai－Aj)/ Ac]×
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可用于改善微循环的海星生物活性肽的制备方法，所述方法包括如下步骤：（1）新鲜多棘海星通过微波真空干燥技术进行干燥，粉碎至80目左右大小；（2）称取多棘海星冻干粉，溶解于去离子水，在蛋白酶的最适温度下水浴预热，用HCl或 NaOH调节pH值至酶最适pH值，加入酶液进行酶解，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶或复合蛋白酶；（3）采用SDS
‑
PAGE对酶解程度进行判定，当冻干粉中可溶性蛋白含量趋于稳定时认定为酶解完成；（4）酶解结束后用沸水浴灭酶，冷却至室温后，将酶解液离心，取上清液；冷冻干燥后即得所述海星生物活性肽，其中，所述复合蛋白酶为protamex，所述木瓜蛋白酶的酶解条件为：酶：底物（v/v）为1:10，pH=6.5，水解温度55℃，酶量8000U/g，所述复合蛋白酶的酶解条件为：酶：底物（v/v）为1:10，pH=6.5，水解温度50℃，酶量8000U/g。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述微波真空干燥条件为：微波功率密度为5w/g，脉冲时间为60...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹凤君，
申请(专利权)人：北京德人健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：