一种具有抑菌活性的蛋白质多肽类物质的制备方法技术

本发明专利技术提出了一种具有抑菌活性的蛋白质多肽类物质的制备方法，通过称取适量脱脂辣木籽粉,加入NaCl溶液，水浴搅拌，静置冷却，获取上清液并调节pH，静置离心后，在沉淀物中加入超纯水溶解后透析，脱盐处理，低温冷冻后经真空冷冻干燥得到辣木籽蛋白粉；将辣木籽多肽蛋白粉与硝酸银溶液螯合，获得辣木籽多肽螯合银粉末，再与抑菌精油复配获得蛋白质多肽类物质。本发明专利技术的蛋白质多肽类物质不仅对革兰氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌具有良好的抑制作用，而且对单增李斯特菌、大肠杆菌也有较好的抑制效果，具有广谱抑菌作用；通过100u的透析袋将辣木籽多肽中大分子多肽和蛋白去除，避免了大分子多肽对抑菌作用的干扰。避免了大分子多肽对抑菌作用的干扰。避免了大分子多肽对抑菌作用的干扰。

【技术实现步骤摘要】
一种具有抑菌活性的蛋白质多肽类物质的制备方法


[0001]本专利技术涉及多肽制备
，具体而言，涉及一种具有抑菌活性的蛋白质多肽类物质的制备方法。

技术介绍

[0002]辣木(Moringaoleifera)为辣木科辣木属多年生热带落叶乔木，在我国的热带和亚热带地区如云南、福建、广东等地被广泛种植[1]。辣木以高蛋白质、高钙、高维生素以及具有特殊的营养保健作用，而著名，辣木叶、籽是辣木中营养成分和经济价值较高的部位，据报道，辣木叶片干粉中含有27.5％的粗蛋白、2.30％钙及0.41％维生素A，辣木籽干粉中更是含有37.80％的粗蛋白。
[0003]然而，由于辣木籽蛋白中多肽含量较低，现有制备手段不能有效提取活性多肽，造成提取含量较小，不能充分利用辣木籽易造成资源浪费；而且，辣木籽多肽的抑菌种类较少，仅对革兰氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等少数菌种有抑制效果，不具备广谱抑菌功效。

技术实现思路

[0004]本专利技术提出了一种具有抑菌活性的蛋白质多肽类物质的制备方法，解决了现有制备手段不能有效提取活性多肽，辣木籽多肽不具备广谱抑菌功效的问题。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种具有抑菌活性的蛋白质多肽类物质的制备方法，包括以下步骤：(1)称取适量脱脂辣木籽粉,加入NaCl溶液，在30
‑
40℃条件下水浴搅拌，静置冷却，获取上清液并调节pH至9
‑
11，静置离心后，在沉淀物中加入超纯水溶解后透析，脱盐处理33r/>‑
40h，低温冷冻后经真空冷冻干燥得到辣木籽蛋白粉；(2)称取适量辣木籽蛋白粉放入烧瓶中，加入蒸馏水，辣木籽蛋白粉与蒸馏水的质量比为30
‑
40:1，再选取蛋白酶，以酶底质量百分比2.0
‑
3.0％为酶添加量，调节pH至6.5
‑
7.5，酶解温度控制在40
‑
50℃，酶解时间3
‑
5h，在80
‑
90℃灭酶10
‑
15min，离心，取上层清液经浓缩后冷冻干燥，获得辣木籽多肽提取物；(3)取辣木籽多肽提取物放入烧瓶中，加入蒸馏水，配制成质量分数为4
‑
6％的多肽溶液，向多肽溶液中加入硝酸银溶液，多肽溶液和硝酸银溶液的质量比为2
‑
3:1，再加入抗坏血酸，混合均匀后于40
‑
45℃水浴中反应55
‑
65min，然后加入无水乙醇沉淀，经离心并干燥后获得辣木籽多肽螯合银粉末，置于
‑
20℃条件下保存；(4)将辣木籽多肽螯合银粉末和精油按质量比(60
‑
70):(40
‑
30)均匀混合，获得蛋白质多肽类物质。
[0006]优选的，在步骤(2)中，所述取上层清液经浓缩后，还包括：将浓缩液装于截留分子质量为100u的透析袋中，以蒸馏水为透析液，置于3
‑
4℃冰箱中透析10
‑
12h，每4h更换一次透析液，获得透析后的辣木籽多肽液。
[0007]优选的，所述硝酸银溶液的制备方法包括如下步骤：1)通过电解法得到质量分数在99.9％以上的银；2)将提纯过的银和硝酸反应，得到硝酸银溶液；3)利用分子筛技术，过滤硝酸银溶液即可。
[0008]优选的，所述蛋白酶包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶及贯筋藤蛋白酶中的一种或多种。
[0009]优选的，所述精油为牛至、肉桂、百里香和茶树精油中的一种或多种。
[0010]与现有技术相比，本专利技术的有益效果包括：通过将辣木籽多肽提取物与硝酸银溶液螯合，获得辣木籽多肽螯合银粉末，再与抑菌精油复配获得蛋白质多肽类物质，该蛋白质多肽类物质不仅对革兰氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌具有良好的抑制作用，而且对单增李斯特菌、大肠杆菌也有较好的抑制效果，具有广谱抑菌作用；通过100u的透析袋将辣木籽多肽中大分子多肽和蛋白去除，避免了大分子多肽对抑菌作用的干扰。
附图说明
[0011]图1为本专利技术实施例中蛋白质多肽类物质对4种致病菌株的最小抑菌浓度图。
[0012]图2为本专利技术实施例中蛋白质多肽类物质对金黄色葡萄球菌影响的生长曲线图。
具体实施方式
[0013]本专利技术提供了一种具有抑菌活性的蛋白质多肽类物质的制备方法，包括：
[0014]步骤1：称取适量脱脂辣木籽粉,加入NaCl溶液，在30
‑
40℃条件下水浴搅拌，静置冷却，获取上清液并调节pH至9
‑
11，静置离心后，在沉淀物中加入超纯水溶解后透析，脱盐处理33
‑
40h，低温冷冻后经真空冷冻干燥得到辣木籽蛋白粉。
[0015]步骤2：称取适量辣木籽蛋白粉放入烧瓶中，加入蒸馏水，辣木籽蛋白粉与蒸馏水的质量比为30
‑
40:1，再选取蛋白酶，以酶底质量百分比2.0
‑
3.0％为酶添加量，调节pH至6.5
‑
7.5，酶解温度控制在40
‑
50℃，酶解时间3
‑
5h，在80
‑
90℃灭酶10
‑
15min，离心，取上层清液经浓缩后冷冻干燥，获得辣木籽多肽提取物。
[0016]本专利技术实施例中，蛋白酶包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶及贯筋藤蛋白酶中的一种或多种。
[0017]取上层清液经浓缩后，还包括：将浓缩液装于截留分子质量为100u的透析袋中，以蒸馏水为透析液，置于3
‑
4℃冰箱中透析10
‑
12h，每4h更换一次透析液，获得透析后的辣木籽多肽液。
[0018]步骤3：取辣木籽多肽提取物放入烧瓶中，加入蒸馏水，配制成质量分数为4
‑
6％的多肽溶液，向多肽溶液中加入硝酸银溶液，多肽溶液和硝酸银溶液的质量比为2
‑
3:1，再加入抗坏血酸，混合均匀后于40
‑
45℃水浴中反应55
‑
65min，然后加入无水乙醇沉淀，经离心并干燥后获得辣木籽多肽螯合银粉末，置于
‑
20℃条件下保存。将硝酸银作为银源，有利于螯合物的形成，提高了螯合效率，同时残余的硝酸银易于去除，有利于获得高纯度产物。
[0019]优选的，硝酸银溶液的制备方法包括如下步骤：
[0020]1)通过电解法得到质量分数在99.9％以上的银。
[0021]2)将提纯过的银和硝酸反应，得到硝酸银溶液。
[0022]3)利用分子筛技术，过滤硝酸银溶液即可。
[0023]步骤4：将辣木籽多肽螯合银粉末和精油按质量比(60
‑
70):(40
‑
30)均匀混合，获得蛋白质多肽类物质。该精油为牛至、肉桂、百里香和茶树精油中的一种或多种。
[0024]下面将结合本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有抑菌活性的蛋白质多肽类物质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)称取适量脱脂辣木籽粉,加入NaCl溶液，在30
‑
40℃条件下水浴搅拌，静置冷却，获取上清液并调节pH至9
‑
11，静置离心后，在沉淀物中加入超纯水溶解后透析，脱盐处理33
‑
40h，低温冷冻后经真空冷冻干燥得到辣木籽蛋白粉；(2)称取适量辣木籽蛋白粉放入烧瓶中，加入蒸馏水，辣木籽蛋白粉与蒸馏水的质量比为30
‑
40:1，再选取蛋白酶，以酶底质量百分比2.0
‑
3.0％为酶添加量，调节pH至6.5
‑
7.5，酶解温度控制在40
‑
50℃，酶解时间3
‑
5h，在80
‑
90℃灭酶10
‑
15min，离心，取上层清液经浓缩后冷冻干燥，获得辣木籽多肽提取物；(3)取辣木籽多肽提取物放入烧瓶中，加入蒸馏水，配制成质量分数为4
‑
6％的多肽溶液，向多肽溶液中加入硝酸银溶液，多肽溶液和硝酸银溶液的质量比为2
‑
3:1，再加入抗坏血酸，混合均匀后于40
‑
45℃水浴中反应55...

【专利技术属性】
技术研发人员：张岭，陈健，
申请(专利权)人：南京南域健康产业科技研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：