一种诱导DC细胞培养的试剂盒及其诱导培养方法技术

本发明专利技术公开了一种诱导DC细胞培养的试剂盒及其诱导培养方法，包括：复合诱导剂和激活剂；其中，复合诱导剂包括：GM

【技术实现步骤摘要】
一种诱导DC细胞培养的试剂盒及其诱导培养方法


[0001]本专利技术涉及细胞生物学
，具体涉及一种诱导DC细胞培养的试剂盒及其诱导培养方法。

技术介绍

[0002]近年来，细胞生物免疫疗法成为治疗肿瘤的一种重要的辅助手段。其中，较为突出的是DC
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CIK细胞治疗。树突状细胞(Dendritic cells，DC)是迄今发现的抗原递呈功效最强的细胞，在机体抗肿瘤免疫应答中，处于核心地位。研究发现，DC细胞的作用主要表现在能明显引诱静止T淋巴细胞增殖和应答，并促进细胞毒性T细胞生成；细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine
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induced killer，CIK)是将外周血淋巴细胞在体外用多种细胞因子刺激诱导产生的一种异质细胞，DC与CIK细胞联合应用，有逆转调节性T细胞免疫抑制效应中的作用，可降低肿瘤患者CIK细胞中CD4+、CD25+细胞的数目及功能，进而加强抗瘤效应。
[0003]临床研究表明，大多数肿瘤患者存在DC细胞数量减少及功能缺陷的特点，DC细胞与肿瘤的发生、发展、转移及浸润密切相关，基于DC细胞的免疫治疗在抗肿瘤及预防肿瘤复发上具有良好的应用前景。对DC细胞诱导培养的研究发现，多种成分可影响DC细胞的增殖与成熟。目前，针对DC细胞诱导培养的试剂和方法种类较多，但诱导出的DC细胞表达水平相对不高，数量不稳定，同时诱导培养周期较长。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种诱导DC细胞培养的试剂盒及其诱导培养方法，以解决现有DC细胞诱导培养的试剂和方法的培养质量不高、数量不稳定以及培养周期较长的问题。
[0005]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种诱导DC细胞培养的试剂盒，包括：复合诱导剂和激活剂；其中，复合诱导剂包括：GM
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CSF溶液、IL
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4溶液、IL
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1β溶液和8种角蛋白的混合溶液；激活剂包括：antiCD44蛋白溶液和肿瘤多肽抗原溶液。
[0006]本专利技术的有益效果为：本专利技术的诱导DC细胞的培养试剂盒能显著提高DC细胞的诱导培养成熟速率及DC细胞表面标志物的表达，培养的DC细胞与T细胞混合培养后，可增强细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)对肿瘤细胞的杀伤效果。
[0007]本专利技术的诱导DC细胞的培养试剂盒，GM
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CSF主要作用于DC细胞，刺激单核细胞向DC细胞分化；IL
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4与GM
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CSF协同作用促进单核细胞的定向分化，上调DC细胞MHC
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I的表达；IL
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1β与GM
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CSF协同作于DC细胞，促进单核细胞向DC细胞分化；8种角蛋白来源于人血浆，8种角蛋白混合起到了维持DC细胞形态，参与DC细胞迁移，稳定DC细胞基本生理功能的作用，另外还协助DC细胞分泌免疫调控因子，从而参与细胞调控及细胞信号传导。antiCD44蛋白溶液是一种抗CD44抗体，CD44是肿瘤干细胞膜表面标志物；antiCD44与肿瘤多肽抗原联合致敏DC细胞，可特异性、高效地增强DC细胞对肿瘤细胞的识别能力。8种角蛋白的联用可以快速生成大量DC细胞，通过antiCD44蛋白联合肿瘤多肽抗原共同致敏DC细胞后，刺激DC细
胞快速成熟，提高抗原提呈效率，从而显著提高DC细胞的诱导培养成熟速率。成熟DC细胞具有高效的T细胞刺激能力，通过特异性高水平表达趋化因子，产生大量的粘附分子，更易与T细胞表面的特征性标志TCR配接，高水平的共刺激分子，降低了活化阈值，更易于激活T细胞形成细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)，进而增强CTL对肿瘤细胞的杀伤效果。
[0008]在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进：
[0009]进一步，8种角蛋白分别为：8种角蛋白分别为：II型细胞骨架1(Keratin,type II cytoskeletal 1)、I型细胞骨架16(Keratin,type I cytoskeletal 16)、I型细胞骨架14(Keratin,type I cytoskeletal 14)、I型细胞骨架19(Keratin,type I cytoskeletal 19)、II型细胞骨架79(Keratin,type II cytoskeletal 79)、II型细胞骨架75(Keratin,type II cytoskeletal 5)、II型细胞骨架5(Keratin,type II cytoskeletal 5)和II型细胞骨架2(Keratin,type II cytoskeletal 2)。
[0010]采用上述进一步技术方案的有益效果为：I型和II型细胞骨架蛋白有利于维持DC细胞增殖过程中的形态结构及内部结构的有序性，促进DC细胞之间信号转导、能量传递。
[0011]进一步，激活剂与复合诱导剂的体积比为1
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3：2。
[0012]进一步，GM
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CSF溶液的浓度为200
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500ng/ml，IL
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4溶液的浓度为1000
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3000IU/ml，IL
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1β溶液的浓度为3000
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8000IU/ml，8种角蛋白的混合溶液的浓度为300
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700ng/ml；其中，复合诱导剂中GM
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CSF溶液、IL
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4溶液、IL
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1β溶液和8种角蛋白的混合溶液的体积比为3
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5：0.8
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1.2：0.8
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1.2：1。
[0013]进一步，GM
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CSF溶液的浓度为400ng/ml，IL
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4溶液的浓度为1800IU/ml，IL
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1β溶液的浓度为5500IU/ml，8种角蛋白的混合溶液的浓度为650ng/ml；其中，复合诱导剂中GM
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CSF溶液、IL
‑
4溶液、IL
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1β溶液和8种角蛋白的混合溶液的体积比为4：1：1：1。
[0014]进一步，antiCD44蛋白溶液的浓度为500
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800ng/ml，肿瘤多肽抗原溶液的浓度为10
‑
30ug/ml；其中，激活剂中antiCD44蛋白溶液和肿瘤多肽抗原溶液的体积比为1：1.8
‑
2.2。
[0015]进一步，antiCD44蛋白溶液的浓度为700ng/ml，肿瘤多肽抗原溶液的浓度为25ug/ml；其中，激活剂中antiCD44蛋白溶液和肿瘤多肽抗原溶液的体积比为1：2。
[0016]本专利技术还提供一种采用上述诱导DC细胞培养的试剂盒诱导培养DC细胞的方法，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导DC细胞培养的试剂盒，其特征在于，包括：复合诱导剂和激活剂；其中，复合诱导剂包括：GM
‑
CSF溶液、IL
‑
4溶液、IL
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1β溶液和8种角蛋白的混合溶液；激活剂包括：antiCD44蛋白溶液和肿瘤多肽抗原溶液。2.根据权利要求1所述的诱导DC细胞培养的试剂盒，其特征在于，8种角蛋白分别为：II型细胞骨架1、I型细胞骨架16、I型细胞骨架14、I型细胞骨架19、II型细胞骨架79、II型细胞骨架75、II型细胞骨架5和II型细胞骨架2。3.根据权利要求1所述的诱导DC细胞培养的试剂盒，其特征在于，激活剂与复合诱导剂的体积比为1
‑
3：2。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的诱导DC细胞培养的试剂盒，其特征在于，GM
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CSF溶液的浓度为200
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500ng/ml，IL
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4溶液的浓度为1000
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3000IU/ml，IL
‑
1β溶液的浓度为3000
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8000IU/ml，8种角蛋白的混合溶液的浓度为300
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700ng/ml；其中，复合诱导剂中GM
‑
CSF溶液、IL
‑
4溶液、IL
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1β溶液和8种角蛋白的混合溶液的体积比为3
‑
5：0.8
‑
1.2：0.8
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1.2：1。5.根据权利要求1或3所述的诱导DC细胞培养的试剂盒，其特征在于，antiCD44蛋白溶液的浓度为500
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800ng/ml，肿瘤多肽抗原溶液的浓度为10
‑
30ug/ml；其中，激活剂中antiCD44蛋白溶液和肿瘤多肽抗原溶液的体积比为1：1.8
‑
2.2。6.采用权利要求1
‑
5任一项所述的诱导DC细胞培养的试剂盒诱导培养DC细...

【专利技术属性】
技术研发人员：周丽薇，杨莉，王刚，黄雅飞，黄娟，
申请(专利权)人：和泓尚医成都生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：