一种犬的急性肾衰竭模型建立的方法技术

本发明专利技术属于急性肾衰竭模型构建技术领域，公开了一种犬的急性肾衰竭模型建立的方法，试验动物的确定及分组；仪器和试剂的确定；样品的采集；指标的测定；统计分析。本发明专利技术提供的犬的急性肾衰竭模型建立的方法，采用腺嘌呤来诱导建立犬急性肾衰竭的模型，通过血液和尿液等指标的检测及肾脏组织病理学变化来判断模型是否成功建立，进而确定腺嘌呤诱导犬急性肾衰竭的最佳剂量。综合结果表明，给犬添加75mg/kg

【技术实现步骤摘要】
一种犬的急性肾衰竭模型建立的方法


[0001]本专利技术属于急性肾衰竭模型构建
，尤其涉及一种犬的急性肾衰竭模型建立的方法。

技术介绍

[0002]目前，在急性肾功能衰竭的基础与临床研究中，为了深入了解急性肾衰竭形成的过程，探究急性肾衰竭的形成机制，建立急性肾衰竭试验动物模型尤为重要。目前国内外研究中所用到的急性肾衰竭试验动物模型，大多是在大鼠或家兔等试验动物上建立的，通过物理或化学药物的方法达到建立急性肾衰竭动物模型的目的。
[0003]物理方法主要有两种，一种是通过物理机械的方法使肾组织缺血，引起肾小管上皮细胞变性坏死从而使动物发生急性肾衰竭；另一种是通过切除部分肾组织，或直接断绝肾脏部分大血管的血液供应。该种方法对术者操作要求较高，且手术过程易造成出血，导致试验动物意外死亡。另外通过化学药物方法，如腺嘌呤、甘油、油酸、氯化汞、氨基糖苷类药物和阿霉素类药物等使流经肾脏的血液大幅减少，建立急性肾衰竭的模型。该种方法成本较低，操作简单，模型较为稳定可以进行动态观察。
[0004]临床上对于犬肾衰竭的诊断和治疗研究较为深入，但是对其发病相关机理研究较少。目前关于犬急性肾衰竭的造模方法大多为采用物理方法或者是化学药物，这对动物自身的伤害较大，可能会导致动物急性死亡，加上犬肾衰是一种多种原因均可引起的一种综合性疾病，所以在造模上研究较少。腺嘌呤在机体黄嘌呤氧化酶的作用下可以生成难以溶于水的物质，这种物质沉积在肾小管无法排出体外，导致肾小管的堵塞，最终引发氮质血症和代谢紊乱，导致急性肾衰竭的发生。但现有技术中关于利用腺嘌呤进行急性肾衰竭模型构建的方案尚未见报道。因此，亟需一种新的基于腺嘌呤的急性肾衰竭模型建立的方法，以弥补现有技术的空白。
[0005]通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术中关于利用腺嘌呤进行急性肾衰竭模型构建的方案尚未见报道，且腺嘌呤造犬急性肾衰竭模型的最佳剂量尚不清楚。
[0006]解决以上问题及缺陷的难度为：前期需要进行多次预实验以确定合适的腺嘌呤剂量范围，从而划定浓度梯度进行后续实验以确定腺嘌呤造急性肾功能衰竭模型犬的最佳剂量。
[0007]解决以上问题及缺陷的意义为：目前国内外报道的造急性肾衰竭模型动物的实验动物大多为大鼠和家兔，很少能查阅到关于造急性肾功能衰竭模型犬的资料，且大多通过物理或化学药物的方法达到建立急性肾衰竭动物模型的目的。利用化学药物腺嘌呤造模，该种方法成本较低，操作简单，模型较为稳定可以进行动态观察；同时通过此试验能确定腺嘌呤造急性肾衰竭模型犬的最佳剂量，为广大科研试验者和临床犬肾衰相关的研究提供理论支撑，为后续临床试验提供参考资料，便于更进一步的掌握急性肾衰功能衰竭机理。

技术实现思路

[0008]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种犬的急性肾衰竭模型建立的方法。
[0009]本专利技术是这样实现的，一种犬的急性肾衰竭模型建立的方法，所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法包括以下步骤：
[0010]步骤一，进行试验动物的确定及分组；
[0011]步骤二，进行仪器和试剂的确定；
[0012]步骤三，进行样品的采集；
[0013]步骤四，进行指标的测定；
[0014]步骤五，进行统计分析。
[0015]在本专利技术中：步骤一：选取健康的动物，按照程序饲养；遵循实验动物随机分组原则；步骤三：为后续指标检测做准备；步骤四：进行指标检测，通过观察结果动态分析造模犬状态，判定造模是否成功，灵活调整试验；步骤五：将结果进行统计学分析，综合步骤四判定造模结果，最后得出结论。
[0016]进一步，步骤一中，所述试验动物的确定及分组，包括：
[0017]从犬场购进2岁，体重为4
±
1kg的贵宾犬15只；购进后进行身体全面检查，确保犬只健康。试验前期进行2周的适应性饲养，将犬随机分为3组：空白对照组，即C组每天饲喂基础犬粮，自由饮用自来水；40mg腺嘌呤模型组在饲喂基础犬粮的同时按体重添加腺嘌呤40mg/kg
·
d；75mg腺嘌呤模型组在饲喂基础犬粮的同时按体重添加腺嘌呤75mg/kg
·
d。
[0018]试验周期为15天，犬只饲养采用自由采食和饮水的饲养方式，定期观察犬的饮食、饮水和精神状况；试验过程中环境条件、基础犬粮、饲养管理均保持一致。根据剂量换算，由大鼠剂量200
‑
250mg/kg
·
d查表换算出犬造模剂量为40
‑
75mg/kg
·
d。整个试验严格按照华中农业大学动物保护与利用委员会中国武汉批准的规程进行。
[0019]进一步，步骤二中，所述仪器和试剂，包括
[0020]所述仪器，包括动物专用掌上尿液分析仪，台式高速冷冻离心机，光学显微镜，标准试剂型纯水仪，移液枪以及酶标仪；
[0021]所述试剂，包括血肌酐，血尿素氮，纯度≥99.5％的腺嘌呤，纯度≥99％的纳米硒以及2mL、5mL的注射器。
[0022]进一步，步骤三中，所述样品的采集，包括：
[0023](1)血样的采集
[0024]在试验的第1、8和15天，用真空采血管和采血针经犬的前肢头静脉采血3mL，分离血清后于冰箱冻存，检测血肌酐和血尿素氮；
[0025](2)尿液的采集
[0026]在试验的第1、8和15天，用注射器经膀胱穿刺采尿2mL，在30min以内送至华中农业大学动物医院检验科进行尿常规检测；
[0027](3)肾组织的采集
[0028]在试验最后一天采集左侧肾脏，分离脂肪囊和纤维膜后，将肾脏组织切成小块固定于4％的多聚甲醛中，用于制作石蜡切片，剩下部分冻存超低温冰箱。
[0029]进一步，步骤四中，所述指标的测定，包括：
[0030](1)进行尿常规的测定；
[0031](2)进行犬血清肌酐指标测定；
[0032](3)进行犬血清尿素氮指标测定；
[0033](4)进行肾脏组织切片观察。
[0034]进一步，步骤(1)中，所述尿常规的测定，包括：
[0035]收集的尿液样本于30min内进行尿液常规检测。将尿液倒入灭菌的离心管中，使尿液检测试纸条全部被尿液浸润，将浸润的试纸条放于尿液分析仪上进行检测并记录结果。
[0036]进一步，步骤(2)中，所述犬血清肌酐指标测定，包括：
[0037]使用肌酐测定试剂盒利用除蛋白法进行检测。分别设立试剂空白管、标准管以及测定管，测定管分别标号1～15号；在测定管中加入0.2mL血清，再加入钨酸蛋白沉淀剂2mL，充分混匀，3500r/min，离心10min，取上清液备用。每管加入苦味酸溶液0.5mL，0.75mol/L氢氧化钠溶液0.5mL。空白管加入双蒸水1.6mL，标准管加入50μmol/L肌酐标准品1.6mL，测定管加入1.6mL上一步制备的上清液。充分混合后置于37℃水浴锅中水浴10min后取本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法包括以下步骤：步骤一，进行试验动物的确定及分组；步骤二，进行仪器和试剂的确定；步骤三，进行样品的采集；步骤四，进行指标的测定；步骤五，进行统计分析。2.如权利要求1所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤一中，所述试验动物的确定及分组，包括：从犬场购进2岁，体重为4
±
1kg的贵宾犬15只；购进后进行身体全面检查，确保犬只健康；试验前期进行2周的适应性饲养，将犬随机分为3组：空白对照组，即C组每天饲喂基础犬粮，自由饮用自来水；40mg腺嘌呤模型组在饲喂基础犬粮的同时按体重添加腺嘌呤40mg/kg
·
d；75mg腺嘌呤模型组在饲喂基础犬粮的同时按体重添加腺嘌呤75mg/kg
·
d；试验周期为15天，犬只饲养采用自由采食和饮水的饲养方式，定期观察犬的饮食、饮水和精神状况；试验过程中环境条件、基础犬粮、饲养管理均保持一致；根据剂量换算，由大鼠剂量200
‑
250mg/kg
·
d查表换算出犬造模剂量为40
‑
75mg/kg
·
d；整个试验严格按照华中农业大学动物保护与利用委员会中国武汉批准的规程进行。3.如权利要求1所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤二中，所述仪器和试剂，包括所述仪器，包括动物专用掌上尿液分析仪，台式高速冷冻离心机，光学显微镜，标准试剂型纯水仪，移液枪以及酶标仪；所述试剂，包括血肌酐，血尿素氮，纯度≥99.5％的腺嘌呤，纯度≥99％的纳米硒以及2mL、5mL的注射器。4.如权利要求1所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤三中，所述样品的采集，包括：(1)血样的采集在试验的第1、8和15天，用真空采血管和采血针经犬的前肢头静脉采血3mL，分离血清后于冰箱冻存，检测血肌酐和血尿素氮；(2)尿液的采集在试验的第1、8和15天，用注射器经膀胱穿刺采尿2mL，在30min以内送至华中农业大学动物医院检验科进行尿常规检测；(3)肾组织的采集在试验最后一天采集左侧肾脏，分离脂肪囊和纤维膜后，将肾脏组织切成小块固定于4％的多聚甲醛中，用于制作石蜡切片，剩下部分冻存超低温冰箱。5.如权利要求1所述犬的急性肾衰竭模型建立的方法，其特征在于，步骤四中，所述指标的测定，包括：(1)进行尿常规的测定；(2)进行犬血清肌酐指标测定；(3)进行犬血清尿素氮指标测定；
(4)进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：周东海，李霞，张嘉宾，刘佳琪，史箐箐，刘鑫，张梦迪，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：