一种多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽及其应用，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
一种多肽及其应用
(一)

[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种多肽及其应用，特别涉及一种靶向骨肉瘤HOS细胞系的多肽及其应用。
(二)
技术介绍

[0002]骨肉瘤是人类最常见骨原发性恶性肿瘤，未发生转移的患者五年生存率低于70％，发生转移的患者五年生存率低于30％。近三十年来，骨肉瘤的治疗方式没有取得明显进展，临床上现有的主要治疗方式只有手术切除以及化疗，因此近三十年来骨肉瘤患者的长期存活率没有明显改变。
[0003]骨肉瘤的靶向治疗仍处于探索阶段，当前研究大多集中在骨肉瘤的种系和体细胞遗传学上，试图通过比较骨肉瘤的基因改变来寻找治疗靶点。但是基于基因组检查的骨肉瘤靶向治疗耗资大，且仍处于探索阶段。此外，骨肉瘤具有高水平的体细胞结构变异和拷贝数改变，导致骨肉瘤具有高度异质性，重复的靶标突变很少。因此，迫切需要开发一种新的骨肉瘤靶向治疗策略。
[0004]噬菌体展示技术可用于寻找靶向细胞的多肽，在识别肿瘤细胞的亲和性多肽方面有很强的应用价值。当前多个研究表明，将来源于噬菌体展示的短寡肽与药物，荧光染料，甚至纳米颗粒结合，可以用于癌症的靶向治疗以及精准诊断。
[0005]鉴于靶向多肽用于靶向治疗的优势，筛选一种能够靶向骨肉瘤细胞的多肽应用于骨肉瘤的靶向治疗具有重要意义。
(三)
技术实现思路

[0006]本专利技术目的是提供一种多肽及其应用，利用噬菌体展示技术，通过体外细胞筛选以及体内肿瘤筛选获得靶向人骨肉瘤HOS细胞系的亲和肽，所述多肽在靶向治疗骨肉瘤中具有广阔的应用前景。
[0007]本专利技术采用的技术方案是：
[0008]本专利技术提供一种多肽，特别是靶向骨肉瘤HOS细胞系的多肽，所述多肽的氨基酸序列自N端至C端为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4中的任意一种或至少两种的组合，优选为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；
[0009]SEQ ID NO.1：TPPRVPLLTFGS；
[0010]SEQ ID NO.2：YPAAYHTLTREP；
[0011]SEQ ID NO.3：DSPTSLVLRARS；
[0012]SEQ ID NO.4：STLLADVRIPGS。
[0013]本专利技术通过噬菌体库的构建，从随机的噬菌体多肽库中筛选可以与人骨肉瘤HOS细胞系特异结合的多肽序列。再将这些序列与HOS细胞进行结合，筛选出与HOS细胞特异性结合的四个氨基酸序列，且SEQ ID NO.1所示氨基酸序列与HOS细胞结合的效果最好。
[0014]本专利技术还提供一种含所述多肽核苷酸序列的DNA片段，包含至少一个拷贝DNA片段
的重组载体，以及包含重组载体的重组细胞，重组细胞转化宿主菌制备的重组基因工程菌；所述重组载体以M13KE噬菌体为基础载体，所述重组基因工程菌宿主菌优选为大肠杆菌ER2738。
[0015]本专利技术还提供一种药物组合物，所述药物组合物包含所述DNA片段、所述的重组载体或所述的重组细胞，以及药学上可接受的载体。
[0016]本专利技术提供一种所述多肽在制备肿瘤定位诊断试剂、抗肿瘤药物或肿瘤细胞靶向制剂中的应用。
[0017]所述多肽与药物连接时通常需要进行修饰，优选所述的修饰是在多肽氨基酸序列C端添加Gly
‑
Gly
‑
Ser
‑
Cys连接物。
[0018]所述肿瘤为人骨肉瘤，或者肺癌、黑色素瘤、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌或肝癌等可能表达与该多肽结合受体的肿瘤。
[0019]与现有技术相比，本专利技术有益效果主要体现在：
[0020](1)本专利技术通过从随机的噬菌体多肽库中筛选可以与人骨肉瘤HOS细胞特异结合的多肽序列，确定了SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列与HOS细胞的结合效果最好；
[0021](2)本专利技术多肽结合药物，荧光染料，载体等发挥肿瘤诊断、抗肿瘤等作用。
[0022](3)本专利技术的多肽在骨肉瘤以及肺癌、黑色素瘤、乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌或肝癌等潜在高表达与该多肽结合受体的肿瘤治疗方面具有广泛的应用前景。
(四)附图说明
[0023]图1、活体成像观察多肽在肿瘤的聚集情况；A为活体成像照片，其中Saline注射生理盐水，CY5.5 Only注射200μM Cy5.5
‑
马来酰亚胺的生理盐水溶液，CY5.5
‑
Peptide C注射序列2的多肽结合物生理盐水溶液，CY5.5
‑
Peptide S注射随机序列的多肽结合物生理盐水溶液，CY5.5
‑
OTP注射序列1的多肽结合物生理盐水溶液；B为各组小鼠的荧光强度柱形图。
[0024]图2、体外荧光显微镜验证SEQ ID NO.1所示多肽对骨肉瘤HOS细胞的亲和性；A为荧光显微图，其中Cy5.5
‑
OTP代表序列1的多肽结合物，Cy5.5
‑
peptide C代表序列2的多肽结合物，Cy5.5
‑
peptide S代表随机序列Peptide S的多肽结合物，Cy5.5Only代表Cy5.5
‑
马来酰亚胺；DAPI代表DAPI染色，FITC
‑
phalloidin代表FITC
‑
phalloidin染色，Cy5.5
‑
peptide dyes代表不同Cy5.5
‑
多肽结合物，MERGE代表上述3个染色通道的合并图像；B为各组荧光强度柱形图。
[0025]图3、体外荧光显微镜验证SEQ ID NO.1所示多肽与骨肉瘤HOS细胞结合的特异性；A为荧光显微图，其中HOS代表HOS细胞，HUVECs代表对照细胞HUVECs，DAPI代表DAPI染色，Cy5.5
‑
OTP代表序列1的Cy5.5
‑
多肽结合物，MERGE代表上述2个染色通道的合并图像；B为各组荧光强度柱形图。
(五)具体实施方式
[0026]下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：
[0027]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0028]本专利技术所用试剂组成：
[0029]LB液体培养基：10gNaCl，10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，溶于1L ddH2O。121℃蒸汽灭菌20min。
[0030]LB琼脂培养基：10gNaCl，10g胰蛋白胨，5g酵母提取物，12g琼脂(Agar)，溶于1L ddH2O。121℃蒸汽灭菌20min。
[0031]细菌培养板：首先将异丙基
‑
β
‑
D
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硫代半乳糖苷(IPTG)以及半乳糖苷(X
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于所述多肽的氨基酸序列自N端至C端为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4中的任意一种或至少两种的组合；SEQ ID NO.1：TPPRVPLLTFGS；SEQ ID NO.2：YPAAYHTLTREP；SEQ ID NO.3：DSPTSLVLRARS；SEQ ID NO.4：STLLADVRIPGS。2.一种DNA片段，其特征在于所述DNA片段包含权利要求1所述多肽的核苷酸序列。3.一种重组载体，其特征在于所述重组载体含有至少一个拷贝的如权利要求2所述的DNA片段。4.一种重组细胞，其特征在于所...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶招明，林鹏，薛钰铖，滕王锶源，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：