一种测定双氢青蒿素片溶出及检测的方法技术

本发明专利技术公开了一种双青蒿素片溶出检测方法，通过对溶出液进行衍生化处理方式，克服现有技术中双青蒿素片紫外吸收较弱，检测不灵敏的问题；本发明专利技术提供的衍生化方法不仅可以精确标准双青蒿片溶出行为，同时可以提高检测灵敏度和系统适应性。度和系统适应性。度和系统适应性。

【技术实现步骤摘要】
一种测定双氢青蒿素片溶出及检测的方法


[0001]本专利技术属于分析化学领域，特别涉及一种通过衍生化方法检测双氢青蒿素片溶出度的检测方法。

技术介绍

[0002]双氢青蒿素是从青蒿(Herba Artemisiae Annuae)中提取分离出的抗疟有效单体-青蒿素的衍生物，其化学名为(3R，5aS，6R，8aS，9R，12S，12aR)-八氢-3，6，9-三甲基-3，12-桥氧-12H-吡喃并[4，3-j]-1，2-苯并二塞平-10(3H)-醇，分子式为C
15
H
24
O5，分子量为284.35，结构式如下：
[0003][0004]双氢青蒿素是除了可有效的治疗各种疟疾，特别对多药耐药性疟疾疗效显著，还发现双氢青蒿素具有抗肿瘤、抗炎及治疗卡氏肺孢子虫、红斑狼疮等方面的作用。双氢青蒿素制成的制剂最主要形式为双氢青蒿素片，并分别收录于2015和2020年版《中国药典》。由于青蒿素类化合物难溶于水、稀酸、稀碱、表面活性剂，但易溶于非极性有机溶剂，双氢青蒿素为低溶解性、高渗透性药物，属于生物药剂学分类系统(BCS)中的II类药物，即具有较高的膜渗透性，但因溶解性太低，以致不能被完全吸收，溶解度是限制双氢青蒿素吸收的重要因素。其片剂处方为：双氢青蒿素、一水乳糖、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、十二烷基硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁。目前片剂在在药典溶出度测定双青蒿素片的方法是以0.15％氢氧化钠-乙醇(4∶1)为溶出介质，用紫外-可见分光光度法在241nm下检测，而双氢青蒿素在此波长并无吸收，且空白辅料在检测波长处会有吸收，影响测定结果的准确性。
[0005]另外据报道双氢青蒿素在碱性和酸性条件下会发生降解，因此，此方法所检测的物质为双氢青蒿素碱降解产物，给表征双氢青蒿素的溶出度带来影响。在《International Journal of Pharmaceutics》，274(2004)，第245-260页公开了，美国药典建议使用0.1N HCl作为溶解介质，但是一小时后二氢青蒿素似乎已在0.1NHCl中降解，紫外光谱将降解确认为可检测到的紫外线化合物，最大波长为250nm。并在其他文献中，已发表了几项研究，证明青蒿素化合物在酸性溶液中转化为可检测紫外线的产物。托马斯1992年提出，当接受5MHCl时，双氢青蒿素在45分钟内降解。赵和曾表明青蒿素与氢氧化钠反应后，转化为最大波长为290nm的Q290化合物，随后加入HCl导致形成最大波长为260nm的Q260化合物。
[0006]中国药房2017年第28卷第15期第207-208页，《改进双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素的溶出度测定方法》，公开了采用HPLC柱前衍生化外标法测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素的溶出度，在测定过程中加入了双氢青蒿素衍生化步骤：分别以水、0.1mol/L盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐缓冲液和pH 6.8磷酸盐缓冲液为溶出介质；取样衍生化方法：用3.6％氢
氧化钠溶液稀释至刻度，置于60℃水浴中反应30min，取出放冷至室温，精密加入磷酸0.7mL，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得色谱柱：YMC-Pack ODS-A(250mm
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4.6mm，5μm)，流动相：0.02mol/L磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节pH为2.4)-乙腈(65∶35，V/V)，流速：1.0mL/min，检测波长：237nm；柱温：30℃，进样量：20μL。
[0007]另外在2019年3月第44卷第6期，中国医药杂志，《新工艺双氢青蒿素片溶出度测定方法研究》公开了类似的一种双氢青蒿素片溶出度测定方法，其溶出介质为：0.25％十二烷基硫酸钠水溶液、20％乙醇溶液、人工胃液、pH＝3.8醋酸盐缓冲溶液、人工肠液、pH＝7.2磷酸盐缓冲液、水；高效液相色谱法测定：Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6mm
×
150mm，5μm)，取溶液5mL，滤过，精密量取续滤液2mL，置10mL量瓶中，用2％氢氧化钠溶液稀释至刻度，流动相乙腈-水(40∶60)、流速：1.0mL/min、柱温：30℃、检测波长：216nm、进样量：100μL。
[0008]现有技术中双氢青蒿素片溶出度检测方法，存在需要同时解决双氢青蒿素溶解性低、紫外吸收弱、HPLC检测需要增加大进样量、产品稳定性、精准检测等一系列问题，为了解决上述问题，本专利技术提供一种能更准确的测定双氢青蒿素片的溶出度，更好地模拟体内的溶出的溶出度检测方法。

技术实现思路

[0009]本专利技术提供一种更高精准、更灵敏测点双青蒿素片溶出度的检测方法。
[0010]本专利技术提供一种双青蒿素片溶出度的检测方法，包括对溶出液进行衍生化处理，所述衍生化处理采用氢氧化钠在加热条件下进行前置处理，再用酸进行中和至PH为中性，得供试品溶液。
[0011]进一步地，所述的检测方法溶出液衍生化前置处理采用氢氧化钠的质量浓度为1.5％-2.5％，优选2.0-2.5％，更优选为2.0％。
[0012]进一步地，所述的检测方法溶出液衍生化前置处理采用氢氧化钠加热条件为水浴加热，加热温度为30-80℃，优选为50-70℃，更优选为60℃，加热时间选自20-60min，优选为20-40min，更优选为30min。
[0013]进一步地，所述的检测方法溶出液衍生化前置处理后采用酸中和调整PH值为中性，所述的酸选自盐酸、醋酸、磷酸、硫酸中的一种或者几种，优选为醋酸；所述酸的用量根据衍生物化处理的碱量调整PH至中性进行调整。
[0014]进一步地，所述的检测方法溶出液经过衍生物处理后，得供试品溶液，采用高效液相检测，所述的检测方条件：色谱柱为Luna-C8(2)(4.6
×
150mm，5μm)，流动相为磷酸盐缓冲液(pH5.8)-甲醇45∶55，检测波长为200-400nm，优选为波长为238nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测器为VWD，进样量为30μL。
[0015]进一步地，所述的检测方法溶出液的溶出条件为：照《中国药典》溶出度与释放度测定法(通则0931第二法)，以0.25％十二烷基硫酸钠水溶液500ml为溶出介质，转速为每分钟50转。
[0016]本专利技术有益效果如下：
[0017](1)因供试品前处理方式由传统的溶出液直接进样变更为衍生化后再进样检测，提高了检测灵敏度，所以溶出介质的量可以增加到500ml，溶出度检测法可以由第三法(小杯法)变为第二法。
[0018](2)双氢青蒿素溶解度较低，现有技术中采用的有机溶剂乙醇为溶出介质，但是药审中心一般不推荐使用，本申请选用0.25％十二烷基硫酸钠水溶液500ml为溶出介质，避免了溶出度实验中使用有机溶剂提高双氢青蒿素的溶解度。
[0019](3)供试品溶液衍生化后最大吸收波长由原来的205nm变成238nm，在HPLC的检测中紫外吸收变强，可以改善加大进样量导致测定结果不准确的带来的问题，将进样量由本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双青蒿素片溶出度的检测方法，其特征在于对溶出液进行衍生化处理，所述衍生化处理包括采用氢氧化钠在加热条件下进行前置处理，再用酸进行中和调至PH为中性，得供试品溶液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的溶出液进行衍生化前置处理后采用酸调至PH为中性，酸选自盐酸、醋酸、磷酸、硫酸中的一种或者几种。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于其中所述的酸为醋酸。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的检测方法溶出液衍生化处理采用氢氧化钠的质量浓度为1.5％-2.5％，优选为2.0-2.5％，更优选为2.0％。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的检测方法溶出液衍生化前置化处理加热温度为30-80℃，优选为50-70℃，更优选为60℃。6.根据权利要求1所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：方芳，曾涛，王洪静，李滢，张敏，葛建华，刘军锋，
申请(专利权)人：昆药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：