非对称环介导恒温条件下合成核酸的方法及试剂盒和应用技术

本发明专利技术公开了非诊断目的非对称环介导恒温条件下合成核酸的方法及试剂盒和应用。所述方法为：提供一种核酸的步骤，该核酸3

【技术实现步骤摘要】
非对称环介导恒温条件下合成核酸的方法及试剂盒和应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体地，本专利技术涉及一种非诊断目的的恒温条件下合成核酸的方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]聚合酶链反应(PCR)方法被认为是扩增靶基因的方法最经典方法(Saiki，Gelfand et al.1988)，亦是体外核酸序列扩增应用最为普遍的技术。然而PCR方法的主要问题是：实际操作中必须要用专门的程序温度控制系统，这使得应用成本极大提高。
[0003]LAMP技术(Notomi，Okayama et al.2000)是可以对靶基因进行恒温条件下的扩增，其核心是利用针对靶基因上的六个区域设计四条特异性引物依靠一种高活性链置换DNA聚合酶，使得链置换DNA合成在不停地自我循环。该技术的其中一个局限是，因该方法高特异性和灵敏度等特点依赖于4条引物的性质，最佳引物的获得通常需要进行序列比对、在线引物设计、引物筛选及特异性试验，这一过程十分繁琐。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种单酶及恒温条件下完成核酸合成的方法本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.非诊断目的的恒温条件下合成核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提供一种核酸的步骤，该核酸3
’
至5
’
方向依次由Rc、Fc、R、Dc、D区组成，所述核酸的5
’
端的D区与相邻的Dc退火，3
’
端的Rc区与同一链上的R区的退火，可组成非对称环结构；2)步骤1)提供的所述核酸的3
’
端的Rc区与R区退火，以该核酸为模板合成其自身的互补链，将合成完后的核酸序列称为核酸A；3)使第一寡核苷酸与步骤1)提供的所述核酸的Fc区退火，然后以所述第一寡核苷酸的F区作为合成起点，进行合成步骤；其中所述第一寡核苷酸包括R区与F区；4)所述核酸A的3
’
端的Dc区与临近的D区退火，以核酸A为模板合成其自身的互补链，并引发自动的核酸链延伸反应。2.根据权利要求1所述的恒温条件下合成核酸的方法，其特征在于：所述合成核酸的方法中通过引入加速引物BP，该引物是位于F区到Rc区的中间区段。3.一种核酸，其特征在于：核酸3
’
至5
’
方向依次由Rc、Fc、R、Dc、D区组成；所述核酸的5
’
端的D区与相邻的Dc退火，3
’
端的Rc区与同一链上的R区的退火，可组成非对称环结构。4.权利要求3所述的核酸的合成方法，包括以下步骤：1
‑
a)退火步骤，使第一寡核苷酸与模板的Fc区退火，其中所述模板3
’
至5
’
方向依次由Fc区和R区组成，所述第一寡核苷酸包括R区与F区，所述R区与F区的5
’
侧相连，其中，F区：具有与Fc区互补的核苷酸序列的区，R区：具有与Rc区互补的核苷酸序列的区；1
‑
b)以所述第一寡核苷酸的F区作为合成起点，合成第一核酸；所述第...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛瑞，吴欣瑶，蔡挺，缪青，
申请(专利权)人：中国科学院大学宁波华美医院，
类型：发明
国别省市：