一种表达R7蛋白和荧光标签的重组球虫载体及其检测方法技术

本发明专利技术提供一种表达R7蛋白和荧光标签的重组球虫载体及其检测方法，属于基因工程技术领域。本发明专利技术提供一种靶向ETH_00009555基因的sgRNA，可以进行精确地基因定点突变；由sgRNA和同源重组片段建立基因编辑系统，可精确地将卡氏住白细胞虫的R7蛋白和荧光标签蛋白等目的片段同源重组于ETH_00009555基因，构建一种表达R7蛋白和荧光标签的重组球虫载体。所述重组球虫载体DNA经过PCR检测和测序，表明R7基因和荧光标签基因已成功重组于ETH_00009555基因；且重组球虫载体在荧光显微镜下具有明显的荧光信号，表明其已成功表达R7蛋白和荧光标签蛋白。蛋白。蛋白。

【技术实现步骤摘要】
一种表达R7蛋白和荧光标签的重组球虫载体及其检测方法


[0001]本专利技术属于基因编辑
，尤其涉及一种表达R7蛋白和荧光标签的重组球虫载体及其检测方法。

技术介绍

[0002]CRISPR
‑
Cas9基因编辑系统是由规律成簇间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR)以及CRISPR相关蛋白9(CRISPR
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associated protein9，Cas9)组成，是继锌指核酸酶(zinc finger nuclease，ZFNs)和转录激活因子样效应物核酸酶(transcription activator
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like effector nucleases，TALENs)技术之后迅速发展起来的基因组编辑技术，在细胞基因敲除中已被广泛应用。CRISPR
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Cas9通过小向导RNA(small guide RNA，sgRNA)识别靶序列并引导Cas9蛋白对靶位点进行本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ETH_00009555基因编辑系统，其特征在于，所述ETH_00009555基因编辑系统包括基因编辑质粒和同源重组片段；所述基因编辑质粒包括靶向ETH_00009555基因的sgRNA和Cas9；所述同源重组片段包括R7基因和筛选标记基因。2.根据权利要求1所述的ETH_00009555基因编辑系统，其特征在于，所述靶向ETH_00009555基因的sgRNA包括SEQ ID No.2所示的序列。3.根据权利要求1或2所述的ETH_00009555基因编辑系统，其特征在于，所述R7基因的核苷酸序列包括SEQ ID No.1所示的序列。4.根据权利要求1～3任一项所述的ETH_00009555基因编辑系统，其特征在于，所述筛选标记基因包括荧光标签基因。5.一种重组球...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭志坚，王瑞珍，周德荣，林瑞庆，翁亚彪，陆肖，蔡晓懿，邝春曼，黄仪娟，
申请(专利权)人：佛山市正典生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：