一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒制造技术

本发明专利技术提出了一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒，包括胶体金试纸条、细胞裂解液和PBS；所述胶体金试纸条包括样品垫、金标垫、NC膜和吸水垫；所述金标垫包含胶体金标记的内参通用抗体A，所述NC膜包被二抗羊抗小鼠IgG和内参特异性单抗B。本发明专利技术的样品通过样品垫吸收，经过金标垫与内含的金标物种通用内参抗体A结合，在经过划有物种特异性内参抗体B的检测线时可以显示T线，经划有二抗的质控线时可以显示C线，通过观察与何种物种特异性内参抗体显色判断样品种属，具有操作简单，检测时间极短、反应灵敏、不需要特殊仪器，不含有害物质的优点，适用于细胞或组织的物种鉴定推广应用，具有巨大的经济效益和广阔的应用前景。具有巨大的经济效益和广阔的应用前景。具有巨大的经济效益和广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒


[0001]本专利技术涉及细胞种属鉴定
，尤其涉及一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒。

技术介绍

[0002]目前进行细胞种属鉴定主要使用PCR方法，利用物种特异性引物进行鉴定，基于PCR方法又主要分为常规PCR与荧光定量PCR，二者均需要设计多对引物进行PCR，设计引物、实验操作较为复杂。常规法需要使用具有致癌性的EB进行产物染色，荧光定量PCR需要用到荧光引物及荧光定量PCR仪，其成本较高。因此需要一种方法简单，成本低的检测试剂盒和检测方法。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本专利技术提出了一种操作简单，检测时间极短、反应灵敏、不需要特殊仪器，不含有害物质的基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒。
[0004]本专利技术的技术方案是这样实现的：本专利技术提供了一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒，包括胶体金试纸条、细胞裂解液和PBS；所述胶体金试纸条包括样品垫、金标垫、NC膜和吸水垫；所述金标垫包含胶体金标记的内参通用抗体A，所述NC膜包被二抗羊抗小鼠IgG和内参特异性单抗B。
[0005]在以上技术方案的基础上，优选的，所述内参通用抗体A制备方法：选择内参蛋白beta
‑
Actin或GAPDH不同物种的通用片段合成相应多肽，并偶联BSA或KLH后免疫小鼠，然后制备小鼠抗体得到内参通用抗体A，用稀释液稀释备用。
[0006]在以上技术方案的基础上，优选的，所述内参特异性单抗B制备方法为：选择内参蛋白beta
‑
Actin或GAPDH不同物种的特异性片段合成相应多肽，并偶联BSA或KLH后免疫小鼠，然后制备小鼠抗体得到内参特异性单抗B，用稀释液稀释备用。
[0007]在以上技术方案的基础上，优选的，所述稀释液由如下质量分数的各组分组成：0.1
‑
1％的OVA，0.8％的氯化钠，0.1
‑
1％的冰乙酸，0.01
‑
0.1％的叠氮化钠，0.02％的氯化钾，0.144％的磷酸氢二钠和0.024％的磷酸二氢钾，溶剂为去离子水。
[0008]在以上技术方案的基础上，优选的，所述硝酸纤维素膜中包被的内参特异性单抗B为检测线。
[0009]在以上技术方案的基础上，优选的，所述硝酸纤维素膜中包被的羊抗小鼠IgG二抗为质控线。
[0010]在以上技术方案的基础上，优选的，样本经细胞裂解液处理，PBS稀释后滴加到样本垫上。
[0011]在以上技术方案的基础上，优选的，所述细胞裂解液由质量分数为0.2
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2％的NP40，终浓度为10
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100mmol/L的Tris
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HCL，质量分数为0.8％的氯化钠，终浓度为0.05
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0.5mmol/L的PMSF，终浓度为0.2
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2mmol/L的胃蛋白酶抑制剂，终浓度为0.2
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2mmol/L的亮抑
制肽和终浓度为0.2
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2mmol/L的抑蛋白酶肽组成，溶剂为去离子水。
[0012]本专利技术还提供了一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒的制备方法，包括步骤如下：
[0013]S1，将胶体金标记的内参通用抗体A用金标抗体储存液稀释5倍，然后加入质量分数为5％海藻糖水溶液，按照10μL/cm的量将金标抗体涂布在金标垫上，制得包含胶体金标记的内参通用抗体A的金标垫；
[0014]S2，在NC膜的检测线和质控线上分别涂布内参特异性单抗B及二抗羊抗小鼠IgG，制得包被后的硝酸纤维素膜；
[0015]S3，以衬板为底板从上至下依次粘贴吸水垫、NC膜、金标垫和样品垫，完成组装。
[0016]在以上技术方案的基础上，优选的，所述金标抗体储存液由如下质量分数的各组分组成：1％的海藻糖，0.5％的Tween
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20和0.02％的NaN3，pH值为8.2，溶剂为去离子水。
[0017]本专利技术的一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒相对于现有技术具有以下有益效果：
[0018](1)本专利技术的样品通过样品垫吸收，经过金标垫与内含的金标物种通用内参抗体A结合，在经过划有物种特异性内参抗体B的检测线时可以显示T线，经划有二抗的质控线时可以显示C线，通过观察与何种物种特异性内参抗体显色判断样品种属，具有操作简单，检测时间极短、反应灵敏、不需要特殊仪器，不含有害物质的优点，适用于细胞或组织的物种鉴定推广应用，具有巨大的经济效益和广阔的应用前景。
[0019](2)本专利技术的样本不限于人、大鼠、小鼠、仓鼠、猪和鸡物种，可根据需要增加或减少物种；也不限于细胞样本，也可以检测组织样本。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为本专利技术的实施例的检测结果图。
具体实施方式
[0022]下面将结合本专利技术实施方式，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本专利技术一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本专利技术中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。
[0023]一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒，包括胶体金试纸条、细胞裂解液和PBS；所述胶体金试纸条包括样品垫、金标垫、NC膜和吸水垫；所述金标垫包含胶体金标记的内参通用抗体A，所述NC膜包被二抗羊抗小鼠IgG和内参特异性单抗B。
[0024]内参通用抗体A/内参特异性单抗B制备：
[0025]S1，根据相应NCBI信息，分别选择不同物种(人、大鼠、小鼠、仓鼠、猪和鸡)通用片段/特异性片段，合成相应多肽，并偶联BSA后免疫小鼠；
[0026]S2，小鼠血清效价检测达1:20000以上时，取小鼠脾脏与SP2/0通过PEG方法进行融合，获得相应杂交瘤细胞；
[0027]S3，对杂交瘤细胞上清进行筛选，选择阳性杂交瘤细胞；
[0028]S4，阳性杂交瘤细胞注射小鼠腹腔形成腹水，取腹水离心后获得上清；
[0029]S5，腹水上清经ProteinA/G纯化，获得内参通用抗体A/内参特异性单抗B。
[0030]稀释液由如下质量分数的各组分组成：0.1
‑
1％的OVA，0.8％的氯化钠，0.1
‑
1％的冰乙酸，0.01
‑
0.1％的叠氮化钠，0.02％的氯化钾，0.144％的磷酸氢二钠和0.024％的磷酸二氢钾，溶剂为去离子水。
[0031]PBS由如下质量分数的各组分组成：0.8％的氯化钠，0.02％的氯化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒，其特征在于：包括胶体金试纸条、细胞裂解液和PBS；所述胶体金试纸条包括样品垫、金标垫、NC膜和吸水垫；所述金标垫包含胶体金标记的内参通用抗体A，所述NC膜包被二抗羊抗小鼠IgG和内参特异性单抗B。2.如权利要求1所述的一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒，其特征在于：所述内参通用抗体A制备方法：选择内参蛋白beta
‑
Actin或GAPDH不同物种的通用片段合成相应多肽，并偶联BSA或KLH后免疫小鼠，然后制备小鼠抗体得到内参通用抗体A，用稀释液稀释备用。3.如权利要求1所述的一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒，其特征在于：所述内参特异性单抗B制备方法为：选择内参蛋白beta
‑
Actin或GAPDH不同物种的特异性片段合成相应多肽，并偶联BSA或KLH后免疫小鼠，然后制备小鼠抗体得到内参特异性单抗B，用稀释液稀释备用。4.如权利要求2或3所述的一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒，其特征在于：所述稀释液由如下质量分数的各组分组成：0.1
‑
1％的OVA，0.8％的氯化钠，0.1
‑
1％的冰乙酸，0.01
‑
0.1％的叠氮化钠，0.02％的氯化钾，0.144％的磷酸氢二钠和0.024％的磷酸二氢钾，溶剂为去离子水。5.如权利要求1所述的一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒，其特征在于：所述硝酸纤维素膜中包被的内参特异性单抗B为检测线。6.如权利要求1所述的一种基于胶体金法对细胞种属鉴定的试剂盒，其特征在于：所述硝酸纤维素膜中包被的羊抗小鼠IgG二抗为质控线。...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓福林，戴琦，包春平，
申请(专利权)人：武汉尚恩生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：