【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及培养基，尤其涉及一种无血清培养基及其应用。
技术介绍
1、经过筛选获得的杂交瘤细胞可以分泌针对特定抗原的单克隆抗体，为了获得纯化的单克隆抗体，通常有注射腹水和体外培养两种方式。前者是通过将杂交瘤细胞注射到经过处理的小鼠腹腔内培养，小鼠产生腹水后通过腹水纯化获得抗体；后者是将杂交瘤细胞体外培养，收集其培养上清并纯化获得抗体，其使用的培养体系又分为含血清培养体系和无血清培养体系。含血清体外培养法在生产过程中会有小鼠本体抗体或牛抗体存在，影响单克隆抗体的特异性和灵敏度。无血清培养体系不含抗体成分，可以避免杂抗体污染，提高有效抗体含量最终提高抗体特异性和灵敏度，应用广泛。
2、专利号为cn115029321a的专利技术专利公开了一种杂交瘤细胞体外培养的无血清培养基，该培养基在使用时需要进行无血清驯化，且细胞增殖缓慢。为此需要一种可以无需训化，可以直接培养，且细胞增殖率高的无血清培养基。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提出了一种可直接培养，且细胞增殖率高的无血清培养基及其应用。
2、本专利技术的技术方案是这样实现的：一方面，本专利技术提供了一种无血清培养基，所述无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括牛血清白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、还原型谷胱甘肽、油酸、亚油酸、氨基乙醇、β-葡聚糖和硫酸亚铁。
3、在以上技术方案的基础上，优选的，以体积计，所述添加剂包括牛血清白蛋白1-10g/l、胰岛素0.5-5g/l、转铁蛋白0.5-5g
4、在以上技术方案的基础上，优选的，所述添加剂还包括肌醇10-20mg/l。
5、在以上技术方案的基础上，优选的，所述添加剂还包括葡萄糖酸钠1-5g/l。
6、在以上技术方案的基础上，优选的，所述基础培养基：添加剂的体积比为100-150：1。
7、在以上技术方案的基础上，优选的，所述基础培养基为imdm培养基。
8、另一方面，本专利技术提供了一种无血清培养基在培养杂交瘤细胞或在制备单克隆抗体中的应用。
9、在以上技术方案的基础上，优选的，将杂交瘤细胞直接接种于无血清培养基中培养，固液分离得到上清液，然后将上清液纯化后得到单克隆抗体。
10、在以上技术方案的基础上，优选的，所述杂交瘤细胞的接种量为1×106个/ml-5×106个/ml。
11、在以上技术方案的基础上，优选的，培养条件为培养温度35-39℃，4％-6％co2。
12、本专利技术的一种无血清培养基及其应用相对于现有技术具有以下有益效果：(1)本专利技术添加剂中的牛血清白蛋白、胰岛素是常用无血清培养基添加剂，转铁蛋白和硫酸亚铁可以有效保证细胞铁元素供应，油酸、亚油酸、氨基乙醇是细胞脂类物质合成原料。还原型谷胱甘肽除了作为氨基酸原料外还具有消除细胞产生的氧自由基的作用，可以维持细胞高密度生长。β-葡聚糖可以有效降低细胞对胰岛素等细胞因子依赖、提高细胞对葡萄糖及脂类的利用率，促进细胞代谢和增殖，同时提高细胞抗体分泌。
13、(2)肌醇是一种重要的维生素类物质，可以维持细胞稳定性，与β-葡聚糖协同，提高细胞对营养物质的摄取，促进杂交瘤细胞增生以及抗体的分泌速率。
14、(3)葡萄糖酸钠具有维持杂交瘤细胞稳定性的作用，与β-葡聚糖和肌醇协同具有保持细胞活率，延长培养基保存时间的效果，添加剂体系可以在-20℃保存至少2年。
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1.一种无血清培养基，其特征在于：所述无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括牛血清白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、还原型谷胱甘肽、油酸、亚油酸、氨基乙醇、β-葡聚糖和硫酸亚铁。
2.如权利要求1所述的一种无血清培养基，其特征在于：以体积计，所述添加剂包括牛血清白蛋白1-10g/L、胰岛素0.5-5g/L、转铁蛋白0.5-5g/L、还原型谷胱甘肽80-800mg/L、油酸10-100mg/L、亚油酸6-60mg/L、氨基乙醇0.1-1mg/L、β-葡聚糖10-100μg/L和硫酸亚铁5-50mmol/L。
3.如权利要求2所述的一种无血清培养基，其特征在于：所述添加剂还包括肌醇10-20mg/L。
4.如权利要求3所述的一种无血清培养基，其特征在于：所述添加剂还包括葡萄糖酸钠1-5g/L。
5.如权利要求4所述的一种无血清培养基，其特征在于：所述基础培养基：添加剂的体积比为100-150：1。
6.如权利要求1所述的一种无血清培养基，其特征在于：所述基础培养基为IMDM培养基。
7.如权利要求1所述的一种
8.如权利要求7所述的一种无血清培养基在培养杂交瘤细胞或在制备单克隆抗体中的应用，其特征在于：将杂交瘤细胞直接接种于无血清培养基中培养，固液分离得到上清液，然后将上清液纯化后得到单克隆抗体。
9.如权利要求8所述的一种无血清培养基在培养杂交瘤细胞或在制备单克隆抗体中的应用，其特征在于：所述杂交瘤细胞的接种量为1×106个/mL-5×106个/mL。
10.如权利要求8所述的一种无血清培养基在培养杂交瘤细胞或在制备单克隆抗体中的应用，其特征在于：培养条件为培养温度35-39℃，4％-6％CO2。
...【技术特征摘要】
1.一种无血清培养基，其特征在于：所述无血清培养基包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括牛血清白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、还原型谷胱甘肽、油酸、亚油酸、氨基乙醇、β-葡聚糖和硫酸亚铁。
2.如权利要求1所述的一种无血清培养基，其特征在于：以体积计，所述添加剂包括牛血清白蛋白1-10g/l、胰岛素0.5-5g/l、转铁蛋白0.5-5g/l、还原型谷胱甘肽80-800mg/l、油酸10-100mg/l、亚油酸6-60mg/l、氨基乙醇0.1-1mg/l、β-葡聚糖10-100μg/l和硫酸亚铁5-50mmol/l。
3.如权利要求2所述的一种无血清培养基，其特征在于：所述添加剂还包括肌醇10-20mg/l。
4.如权利要求3所述的一种无血清培养基，其特征在于：所述添加剂还包括葡萄糖酸钠1-5g/l。
5.如权利要求4所述的一种无血清培养基，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓福林，向婷婷，张书玉，
申请(专利权)人：武汉尚恩生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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