【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】判别方法、荧光测定装置和检查剂
[0001]本专利技术涉及一种用于判别牙周病的病原菌的基因型的判别方法、荧光测定装置和检查剂。
技术介绍
[0002]在人体的口腔内，存在着几百种的口腔内细菌。这些口腔内细菌中的牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)、齿垢密螺旋体(Treponema denticola)、福赛坦氏菌(Tannerella forsythia)这3种被分类为与牙周病的相关性高的红色复合体(Red complex)。
[0003]牙周病是由口腔内细菌引起的炎症疾病，其不仅对牙周组织产生影响，而且被指出除了心肌梗塞、糖尿病等以外，还与动脉硬化等全身性疾病相关。以往，牙周病的诊断采用使用探针来检查牙周袋的深度或有无出血的探测检查、用于观察牙槽骨等的X射线检查等。另外，如专利文献1、2所记载的那样，还开发出一种用于检查病原菌的存在的体外诊断用的检查剂。
[0004]在细菌学、临床的领域中，认为在被分类为红色复合体的3种细菌之中，对牙周病的重症化、即牙槽骨吸收的进展产生重大影响...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种判别方法，其判别牙周病的病原菌的基因型，其特征在于，向液体试样照射激发光，根据从所述液体试样发出的荧光的强度来判别所述基因型，其中，所述液体试样包含牙周病的病原菌的菌体或菌体提取物、和荧光标记所述病原菌的酶反应的底物而成的试剂，且被调整为pH7.0以上且pH8.5以下进行了酶反应。2.根据权利要求1所述的判别方法，其特征在于，所述病原菌为牙龈卟啉单胞菌，所述基因型为编码菌毛蛋白的具有多态性的fimA基因的基因型。3.根据权利要求2所述的判别方法，其特征在于，所述液体试样为包含基因型未知的所述病原菌的菌体或菌体提取物的试验区的液体试样、以及包含基因型已知的所述病原菌的菌体或菌体提取物，并且被调整为与所述试验区的液体试样相同的pH值的对照区的液体试样，在所述基因型的判别中，当测定所述试验区而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量与测定所述对照区而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量彼此相同或者近似时，判定为所述试验区中的该液体试样的所述病原菌的fimA基因是与基因型已知的所述病原菌的fimA基因相同的基因型。4.根据权利要求2所述的判别方法，其特征在于，所述液体试样为包含基因型未知的所述病原菌的菌体的判别对象的液体试样、以及包含基因型已知的所述病原菌的菌体或基因型未知的所述病原菌的菌体，并且被调整为与所述判别对象的液体试样相同的pH值的多个液体试样，在所述基因型的判别中，当测定所述判别对象的液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量被分类为，测定所述多个液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量的测定值组中排在前面第一位的测定值组时，判定为该液体试样的所述病原菌的fimA基因为II型。5.根据权利要求2所述的判别方法，其特征在于，所述液体试样为包含基因型未知的所述病原菌的菌体的判别对象的液体试样、以及包含基因型已知的所述病原菌的菌体或基因型未知的所述病原菌的菌体，并且被调整为与所述判别对象的液体试样相同的pH值的多个液体试样，在所述基因型的判别中，当测定所述判别对象的液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量被分类为，测定所述多个液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量的测定值组中排在前面第二位的测定值组时，判定为该液体试样的所述病原菌的fimA基因为IV型。6.根据权利要求2所述的判别方法，其特征在于，所述液体试样为包含基因型未知的所述病原菌的菌体的判别对象的液体试样、以及包含基因型已知的所述病原菌的菌体或基因型未知的所述病原菌的菌体，并且被调整为与所述判别对象的液体试样相同的pH值的多个液体试样，在所述基因型的判别中，当测定所述判别对象的液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量被分类为，测定所述多个液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量的测定值组中排在最后的测定值组时，判定为该液体试样的所述病原菌的fimA基
因为I型。7.根据权利要求2所述的判别方法，其特征在于，所述液体试样为包含基因型未知的所述病原菌的菌体提取物的判别对象的液体试样、以及包含基因型已知的所述病原菌的菌体提取物或基因型未知的所述病原菌的菌体提取物，并且被调整为与所述判别对象的液体试样相同的pH值的多个液体试样，在所述基因型的判别中，当测定所述判别对象的液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量被分类为，测定所述多个液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量的测定值组中排在前面第一位的测定值组时，判定为该液体试样的所述病原菌的fimA基因为I型。8.根据权利要求2所述的判别方法，其特征在于，所述液体试样为包含基因型未知的所述病原菌的菌体提取物的判别对象的液体试样、以及包含基因型已知的所述病原菌的菌体提取物或基因型未知的所述病原菌的菌体提取物，并且被调整为与所述判别对象的液体试样相同的pH值的多个液体试样，在所述基因型的判别中，当测定所述判别对象的液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量被分类为，测定所述多个液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量的测定值组中排在前面第二位的测定值组时，判定为该液体试样的所述病原菌的fimA基因为IV型。9.根据权利要求2所述的判别方法，其特征在于，所述液体试样为包含基因型未知的所述病原菌的菌体提取物的判别对象的液体试样、以及包含基因型已知的所述病原菌的菌体提取物或基因型未知的所述病原菌的菌体提取物，并且被调整为与所述判别对象的液体试样相同的pH值的多个液体试样，在所述基因型的判别中，当测定所述判别对象的液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量被分类为，测定所述多个液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量的测定值组中排在最后的测定值组时，判定为该液体试样的所述病原菌的fimA基因为II型。10.根据权利要求1至9中任一项所述的判别方法，其特征在于，所述试剂为异丁氧基羰基
‑
甘氨酰基
‑
甘氨酰基
‑
L
‑
精氨酰基
‑4‑
甲基香豆基
‑7‑
酰胺(iBoc
‑
Gly
‑
Gly
‑
Arg
‑
MCA)。11.根据权利要求1至9中任一项所述的判别方法，其特征在于，所述激发光的波长为355nm以上且375nm以下。12.根据权利要求1至9中任一项所述的判别方法，其特征在于，所述荧光的波长为430nm以上且455nm以下。13.根据权利要求1至9中任一项所述的判别方法，其特征在于，所述液体试样为pH缓冲液，所述pH缓冲液以三羟基甲基氨基甲烷(Tris)作为主要成分。14.根据权利要求1至9中任一项所述的判别方法，其特征在于，
所述液体试样的温度为4℃以上且45℃以下。15.一种荧光测定装置，其判别牙周病的病原菌的基因型，其特征在于，具有照射机构、检测机构和判别机构，其中，所述照射机构用于向液体试样照射激发光，所述液体试样包含牙周病的病原菌的菌体或菌体提取物、和荧光标记所述病原菌的酶反应的底物而成的试剂，且被调整为pH7.0以上且pH8.5以下进行了酶反应；所述检测机构用于检测从所述液体试样发出的荧光；所述判别机构根据检测出的荧光的强度来判别所述基因型。16.根据权利要求15所述的荧光测定装置，其特征在于，所述病原菌为牙龈卟啉单胞菌，所述基因型为编码菌毛蛋白的具有多态性的fimA基因的基因型。17.根据权利要求16所述的荧光测定装置，其特征在于，所述液体试样为包含基因型未知的所述病原菌的菌体或菌体提取物的试验区的液体试样、以及包含基因型已知的所述病原菌的菌体或菌体提取物，并且被调整为与所述试验区的液体试样相同的pH值的对照区的液体试样，所述判别机构具有存储部和数据比较部，其中，所述存储部用于存储测定所述对照区而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量；当测定所述试验区而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量与测定所述对照区而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量彼此相同或者近似时，所述数据比较部判定为所述试验区中的该液体试样的所述病原菌的fimA基因是与基因型已知的所述病原菌的fimA基因相同的基因型。18.根据权利要求16所述的荧光测定装置，其特征在于，所述液体试样为包含基因型未知的所述病原菌的菌体的判别对象的液体试样、以及包含基因型已知的所述病原菌的菌体，并且被调整为与所述判别对象的液体试样相同的pH值的多个液体试样，所述判别机构具有存储部和数据比较部，其中，所述存储部存储有第1阈值；所述数据比较部将测定所述判别对象的液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量与预先设定的第1阈值进行比较，当测定所述判别对象的液体试样而获得的荧光强度值或荧光强度的经时变化量为所述第1阈值以下时，判定为该液体试样的所述病原菌的fimA基因为I型，...
【专利技术属性】
技术研发人员：石原和幸，菊地亘，细川真弓，伊东爱，
申请(专利权)人：株式会社吉田制作所，
类型：发明
国别省市：
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