组合因子及其应用制造技术

本发明专利技术属于细胞工程技术领域，具体涉及一种组合因子对及其应用。该组合因子分别为肝细胞来源的TRIM31、RHBDF2；所述TRIM31与所述RHBDF2存在此消彼长的关系。所述组合因子对可以作为非酒精性脂肪肝病(NAFLD)/非酒精性脂肪肝炎(NASH)和/或代谢紊乱的标志物中的应用，可以精确有效的鉴定NAFLD/NASH和/或代谢紊乱或肝细胞变性。而且TRIM31可以作为胰岛素抵抗或肝脂肪变性或炎症和肝纤维化的消除剂的应用，可以有效缓解胰岛素抵抗或肝脂肪变性或炎症和肝纤维化的情况。或炎症和肝纤维化的情况。或炎症和肝纤维化的情况。

【技术实现步骤摘要】
组合因子及其应用


[0001]本专利技术属于细胞工程
，具体涉及一种组合因子对及其应用。

技术介绍

[0002]最新的流行病学研究发现，肥胖及其代谢并发症已成为最严重的公共卫生危机之一。随着肥胖高危人群的增加，持续、长时间的高能量饮食摄入增加了发生包括肥胖、高脂血症、高脂血症以及严重的心脑血管疾病等全身性代谢综合征的风险。事实上，非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)等与肥胖相关的共病的患病率同步增加，NAFLD已经是最常见的慢性肝病。NAFLD 的严重程度从单纯脂肪变性到伴有恶性转化和坏死性炎症改变的肝细胞损伤，以非酒精性脂肪性肝炎(NASH)为特征，揭示了患者更容易发生肝纤维化和肝细胞癌。更严重的是，形成的 NASH反过来将进一步促进其并发症,例如，胰岛素抵抗的发展，高血压，慢性肾病(CKD)和2 型糖尿病(T2D)。然而不幸的是，到目前为止，世界上还没有经过批准和证明的完全有效的治疗NASH的药物治疗方法，缓解该疾病引起的相关并发症的努力也没有完全达到预期。 NAFLD/NASH的有效药物和治疗方案的开发，主要依赖于靶向关键信号调节或与致病机制密切相关的调控过程。
[0003]Rhomboid 5Homolog 2(RHBDF2)，也被称为iRhom2，是Rhomboid膜内蛋白酶家族的非活性成员，已被确定为炎症相关疾病的关键致病调节因子，如肥胖、关节炎、肾炎、动脉粥样硬化和纤维化等疾病。而且RHBDF2通过招募MAP3K7显著提高其磷酸化水平并激活下游炎症信号。RHBDF2
‑
MAP3K7信号通路的激活有助于NAFLD的发生，而NAFLD可导致肝纤维化。同时，RHBDF2具有被泛素化(另一个重要的调控修饰)调控的能力。有研究推测，在蛋白酶抑制剂的存在下，RHBDF2的半衰期显著延长，进一步表明在细胞质结构域可能存在K48 连接的泛素化位点，从而发生蛋白酶体降解。然而，是否存在某些调控因子调控RHBDF2泛素化和RHBDF2介导的NAFLD/NASH发病机制仍不清楚。
[0004]同时考虑到NASH的复杂发病机制，目前尚无临床有效的治疗NASH的药物。因此，全面细致地了解非酒精性脂肪性肝病的发病机制和过程，寻找关键的信号调节因子，已成为NASH 治疗药物开发的迫切问题。

技术实现思路

[0005]鉴于NAFLD和NASH的病理过程是一种与代谢综合征和全身炎症反应综合征(SIRS)相关的纠缠性进展，应针对致病信号通路中的关键因素设计完善的靶点。胰岛素抵抗、肝脏脂肪变性、长期炎症、胶原沉积等因素共同促进了代谢综合征和NASH的病理形成。而且，长期高热量饮食治疗能够刺激肝脏产生严重的胰岛素抵抗，使肝脏中胰岛素调节葡萄糖代谢的正常功能被抑制。然而，胰岛素促进脂肪生成的功能被完全保留。因此，严重的胰岛素抵抗导致肝脏中过量脂质的异常积累。此外，高脂的摄入也会引发炎症反应，并协同促进胰岛素抵抗的产生和发展。
[0006]具体地，E3泛素连接酶——三结构域蛋白31(TRIM31)的三部分已经被确定为先天
免疫应答的“Janus
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faced”调控因子，通过泛素修饰促进目标底物降解或信号转导。TRIM31 失调的动物通常表现出严重的肠道炎症和肠道菌群失衡，TRIM31失调会诱导内毒素血症的产生，并提高NLRP3炎症小体的活化。另一方面，在败血症中，TRIM31通过促进细胞凋亡和NF
‑
κB 信号通路，导致心肌功能障碍。而NF
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κB信号介导的慢性炎症可增强结直肠癌的侵袭和转移。这些看似矛盾的发现揭示了TRIM31在不同的病理过程中发挥了完全不同的功能。
[0007]所以，本专利技术目的在于提供一种组合因子对，所述组合因子分别为肝细胞来源的 TRIM31、RHBDF2。所述TRIM31包含如sequenceNO：1或sequenceNO：2所示的氨基酸序列；所述RHBDF2包含如sequenceNO：3或sequenceNO：4所示的氨基酸序列。其中编码TRIM31 的核酸序列包括如sequenceNO：5或sequenceNO：6所示的序列；编码RHBDF2的核酸序列包括如sequenceNO：7或sequenceNO：8所示的序列。
[0008]在某些具体实施例中，编码TRIM31的核酸序列也可以是sequenceNO：6所示的序列的人源化序列；编码RHBDF2的核酸序列也可以是sequenceNO：8所示的序列的人源化序列。
[0009]进一步，所述TRIM31与所述RHBDF2存在此消彼长的关系。即若所述TRIM31分泌增加，则会抑制RHBDF2分泌，即RHBDF2分泌减少。
[0010]具体地，在某些具体实施例中，使用肝细胞特异性TRIM31敲除的小鼠(THKO)/转基因小鼠(THTG)和慢病毒介导的离体基因治疗(LV
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TRIM31)小鼠，本专利技术确定肝脏TRIM31是高脂饮食(HFD/HFHF)诱导或遗传诱导的慢性炎症、胰岛素抵抗、肝脏脂肪变性和NASH的显著负调节因子。对潜在分子机制的研究发现，在长期的高热量饮食下，体内和体外实验中明显观察到TRIM31的减少，这导致RHBDF2
‑
MA3K7信号通路激活的增加。在TRIM31功能失调的情况下，强烈激活的RHBDF2
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MAP3K7信号传导进一步介导下游信号通路表达的增加，包括JNK
‑
IRS1相关的胰岛素信号传导、IκBα
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NF
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κB
‑
c
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Jun通路、AKT
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GSK3β
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FOXO1磷酸化水平的抑制和 CTGF
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TIMP1通路，促进受损的胰岛素信号传导(胰岛素抵抗)、慢性炎症作用、异常的葡萄糖代谢紊乱和肝脏中的胶原沉积的发生，从而加重异常的脂质代谢，以及肝脏脂肪变性和NASH 表型的产生。
[0011]在复杂的肝脏代谢调节的网络中，高脂饮食诱导的肝脏脂肪变性期间RHBDF2
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MAP3K7 信号通路活性和下游促炎因子的增加被肝脏特异性TRIM31过表达显著抑制，表明TRIM31对 RHBDF2
‑
MAP3K7介导的炎症反应、胰岛素抵抗和脂肪变性具有抑制作用。利用阳性离体基因治疗恢复小鼠TRIM31的表达也表明，它能有效抑制RHBDF2的活性，缓解上述三种病理表型。而且，有研究发现TRIM31的功能可能在调节免疫相关疾病中具有“Janus
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face”(双面)作用，表现为可催化靶向底物降解或者通过泛素化的信号转导使底物降解。有研究表明，TRIM31缺乏失去了对结肠炎炎症反应的抑制作用；但另一方面，TRIM31被确定为阳性启动子，可加剧炎症相关信号引发的心肌病。这些看似相反的结论可能表明TRIM31的功能与器官类型和细胞类型密切相关。
[0012]本专利技术目的在于还提供一种前述的组合因子本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.TRIM31在制备NAFLD/NASH中的标志物中的应用，所述TRIM31包含如sequenceNO：1或sequenceNO：2所示的氨基酸序列。2.TRIM31联合RHBDF2共同制备NAFLD/NASH中的标志物中的应用，所述TRIM31包含如sequenceNO：1或sequenceNO：2所示的氨基酸序列。3.组合因子对，其特征在于，肝细胞来源的TRIM31和RHBDF2；所述TRIM31包含如sequenceNO：1或sequenceNO：2所示的氨基酸序列；所述RHBDF2包含如sequenceNO：3或sequenceNO：4所示的氨基酸序列。4.根据权利要求3所述的组合因子对，其特征在于，所述TRIM31的与所述RHBDF2在量上存在此消彼长的关系。5.权利要求3所述的组合因子对在制备代谢紊乱的标志物中的应用。6.TRIM31的促进剂作为制备NAFLD、NASH或代谢紊乱的药物中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述促进剂包括基因类促进剂、蛋白类促进剂、化学类促进剂、中药类促进剂。8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述促进剂包括以下几种物质中的一种或多种：(1)生物碱类化合物或组合物，包括小檗碱，木兰花碱，骆驼蓬碱，蛇根碱，益母草碱，粉防己碱，常山碱，浙贝母碱，秋水仙碱，胡椒碱，钩藤碱，喜树碱，延胡索乙素，药根碱，白屈菜碱，石蒜碱，山油柑碱，苦参碱，氧化苦参碱中的一种化合物或多种化合物组成的组合物；(2)黄酮类化合物或组合物，包括槲皮素，二氢槲皮素，木犀草素，桑色素，桑皮黄素，芹菜素，香叶木素，白杨素，苜蓿素，葛根素，花青素，原花青素，大豆黄素，芹菜素，黄芩素，野黄芩素，白杨素，汉黄芩素，矢车菊...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭君，徐敏轩，葛晨旭，孙岩，代先玲，况琴，赵俊杰，
申请(专利权)人：重庆美普蓝科技有限公司，
类型：发明
国别省市：