一种基于OVR基因鉴定禽类产蛋性状的分子标记及其鉴定方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种基于OVR基因鉴定禽类产蛋性状的分子标记及其鉴定方法和应用，该分子标记是基于卵母细胞卵黄生成受体基因OVR开发的能够影响其表达量的多态位点，OVR基因的表达受C/EBPα结合转录调控区效率的影响，该分子标记为位于OVR基因转录启始位点上游

【技术实现步骤摘要】
一种基于OVR基因鉴定禽类产蛋性状的分子标记及其鉴定方法和应用


[0001]本专利技术涉及分子标记
，具体涉及一种基于OVR基因鉴定禽类产蛋性状的分子标记及其鉴定方法和应用。

技术介绍

[0002]产蛋量作为繁殖性状之一受卵泡发育成熟和排卵影响，卵泡发育成熟卵黄前体物合成与转运调节至关重要。卵黄前体物主要包括极低密度脂蛋白(VLDLy)和卵黄生成素(VTG)。卵黄前体物可通过母禽分泌雌激素刺激肝脏合成释放进入血液循环，转运至卵泡。卵泡快速发育阶段，VLDLy和VTG等营养物质通过卵泡膜表面血管进入卵泡膜颗粒细胞层，与颗粒细胞表面卵黄生成受体(Oocyte vitellogenesis receptor,OVR)结合后，细胞膜内陷封闭形成有被小泡，将其运输到生长中的卵母细胞。随后配体
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受体复合物分离，受体重新回到卵母细胞表面继续下一轮转运。分离后的VLDLy在溶菌酶的作用下降解，供卵母细胞吸收形成卵黄内物质。可见，卵黄发育主要取决于VLDLy进入卵母细胞的数量，即颗粒细胞层表面受体OVR/VLDLR表达量决定了卵黄内物质含量和卵泡发育速度。
[0003]产蛋初期卵黄物质合成受激素调控，但卵泡膜颗粒细胞表面卵黄受体OVR的表达主要受其转录调控区C/EBPα结合调控，而不受激素调控。因此，OVR基因表达调控区基因序列的多态性直接影响其表达量，进而影响卵泡发育。
[0004]产蛋量作为繁殖性状之一，在父本家系的遗传力较低，且作为经济性状受微效多基因控制，一直以来，以个体产蛋量作为主要选择依据，导致选育进展缓慢。OVR基因点突变可导致来航禽类限制性产蛋。可见，OVR基因通过促进卵泡发育直接影响产蛋量。因此，选择OVR基因作为候选基因，以其表达调控转录因子结合位点为研究区段，筛选可用于产蛋量性状选育的分子标记，为禽类育种直接技术手段。基于上述内容，提出一种基于OVR基因鉴定禽类产蛋性状的分子标记及其鉴定方法和应用。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目是针对禽类低遗传力繁殖性状，提供了一种基于OVR基因鉴定禽类产蛋性状的分子标记，以利用分子标记技术实现早期检测，克服表型记录耗时久的技术问题。
[0006]本专利技术通过以下技术方案来实现上述目的：
[0007]本专利技术提供了一种基于OVR基因鉴定禽类产蛋性状的分子标记，所述分子标记为G或T，所述分子标记位于OVR基因的转录启始位点上游
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399bp处。该分子标记是基于卵母细胞卵黄生成受体基因OVR开发的能够影响其表达量的多态位点，OVR基因的表达受C/EBPα结合转录调控区效率的影响，该分子标记位于C/EBPα转录调控结合区，具体为位于OVR基因转录启始位点上游
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399bp处的G/T突变。
[0008]如SEQ ID NO.1所示序列为部分OVR基因序列及其上游序列，所述OVR基因的转录启始位点(ATG)位于SEQ ID NO.1所述序列的816
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818位，分子标记位于该OVR基因的转录启
始位点上游
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399bp处，即位于SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的第417位。
[0009]本专利技术还提供了一种上述基于OVR基因鉴定禽类产蛋性状的分子标记在鉴定禽类产蛋性状中的应用。
[0010]本专利技术还提供了一种利用上述分子标记鉴定禽类产蛋性状的鉴定方法，包括以下步骤：
[0011](1)提取禽类血液或任一组织的总DNA；
[0012](2)以所述分子标记所在位点的上下游的OVR核苷酸序列为模板，设计特异性扩增引物，再以所述总DNA为模板，利用特异性扩增引物进行PCR扩增，获得扩增产物；
[0013](3)对扩增产物进行基因分型检测和测序，获得待测禽类的分子标记类型；
[0014](4)根据分子标记类型判断禽类产蛋性状。
[0015]进一步改进在于，所述扩增产物具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
[0016]进一步改进在于，所述分子标记所在位点的上游扩增产物的长度与下游扩增产物的长度均大于100bp，且所述分子标记所在位点的上游扩增产物的长度与下游扩增产物的长度的长度差大于20bp。
[0017]进一步改进在于，所述特异性扩增引物序列为：
[0018]Forward primer：GGGACAGGGCCATACAGTTT；
[0019]Reverse primer：TCAGTACTCCCCTGCTCATACA。
[0020]进一步改进在于，所述分子标记类型检测的方法为采用NdeⅠ酶切PCR扩增产物，获得酶切产物，电泳检测酶切产物，若酶切产物：
[0021](1)包含一条条带，则为GG型；
[0022](2)包含两条条带，则为TT型；
[0023](3)包含三条条带，则为TG型。
[0024]进一步改进在于，所述根据分子标记类型判断禽类产蛋性状的具体步骤为：
[0025](1)若待测禽类分子标记类型为GG型，该禽类产蛋性状最优；
[0026](2)若待测禽类分子标记类型为TT型，该禽类产蛋性状较差；
[0027](3)若待测禽类分子标记类型为TG型，该禽类产蛋性状一般。
[0028]本专利技术还提供了一种利用上述分子标记筛选具有优良产蛋性状禽类的方法，提取禽类组织细胞总DNA，利用所述分子标记对禽类的基因型进行分型检测，选择基因型为GG的禽类个体，即为具有优良产蛋性状禽类品种。
[0029]本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种基于OVR基因鉴定禽类产蛋性状的分子标记及其鉴定方法和应用，本专利技术可以弥补常规检测方法的不足，实验步骤少，周期短，且所用试剂常见，成本较低；通过鉴定该分子标记在禽类基因组中存在类型，可以在早期通过分子筛选来判断禽类个体产蛋性能，为禽类产蛋性能选育提供了直接的技术手段，通过早期选育，降低饲养成本的同时，从遗传上提高个体产蛋水平，加快遗传选育进展。
附图说明
[0030]图1为部分样品PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图；
[0031]图2为部分样品PCR扩增产物的酶切琼脂糖凝胶电泳图；
[0032]图3为混池样品DNA序列测定多态位点。
具体实施方式
[0033]下面结合附图对本申请作进一步详细描述，有必要在此指出的是，以下具体实施方式只用于对本申请进行进一步的说明，不能理解为对本申请保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述申请内容对本申请作出一些非本质的改进和调整。
[0034]1、材料
[0035]本实施例所用方法如无特别说明均为本领域的技术人员所知晓的常规方法，所用的试剂等材料，如无特别说明，均为市售购买产品。
[0036]2、方法
[0037]2.1获得禽类OVR基因多态位点
[0038]2.1.1基因组DNA提取与检测
[0039]选取皖西白鹅群体共250只母鹅为试验本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于OVR基因鉴定禽类产蛋性状的分子标记，其特征在于，所述分子标记为G或T，所述分子标记位于禽类卵母细胞卵黄生成受体基因OVR的转录启始位点上游
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399bp处。2.根据权利要求1所述的一种基于OVR基因鉴定禽类产蛋性状的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的第417位。3.一种如权利要求1
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2任一所述的基于OVR基因鉴定禽类产蛋性状的分子标记在鉴定禽类产蛋性状中的应用。4.一种利用如权利要求1
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2任一所述分子标记鉴定禽类产蛋性状的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取禽类血液或任一组织的总DNA；(2)以所述分子标记所在位点的上下游的OVR核苷酸序列为模板，设计特异性扩增引物，再以所述总DNA为模板，利用特异性扩增引物进行PCR扩增，获得扩增产物；(3)对扩增产物的分子标记类型进行检测；(4)根据分子标记类型判断禽类产蛋性状。5.根据权利要求4所述的一种利用分子标记鉴定禽类产蛋性状的鉴定方法，其特征在于，所述分子标记所在位点的上游扩增产物的长度与下游扩增产物的长度均大于100bp，且所述分子标记所在位点的上游扩增产物的长度与下游扩增产物的长度的长度差大于20bp。6.根据权利要求5所述的一种利用分子标记鉴定禽类产蛋性状的鉴...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈兴勇，杜叶叶，刘政权，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：