一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法、黄粉虫抗菌肽的制备方法及其应用技术

本发明专利技术属于生物抗菌肽技术领域，具体涉及一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法、黄粉虫抗菌肽的制备方法及其应用。本发明专利技术提供了一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法，包括如下步骤：采用混合有大肠杆菌菌液的饲料饲喂空腹处理的黄粉虫幼虫，得到饲喂诱导后的黄粉虫幼虫；针刺所述饲喂诱导后的黄粉虫幼虫背部节间处，得到针刺诱导后的黄粉虫幼虫；将所述针刺诱导后的黄粉虫幼虫于紫外光下照射后，培养24小时，得到含有抗菌肽的黄粉虫。与常规诱导方法相比，本发明专利技术对黄粉虫采用复合诱导，采用本发明专利技术提供的诱导方法和诱导顺序对黄粉虫进行刺激，能够更大程度地提高抗菌肽的含量。程度地提高抗菌肽的含量。程度地提高抗菌肽的含量。

【技术实现步骤摘要】
一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法、黄粉虫抗菌肽的制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物抗菌肽
，具体涉及一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法、黄粉虫抗菌肽的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，随着我国水产养殖业的不断发展，鱼类感染链球菌病的现象也不断发生。我国养殖户预防鱼类受到病原菌侵染的手段一般是在每年夏季疾病爆发期来临之前，向养殖区域里投入大量抗生素，初期有一定效果，但随着时间延长，细菌容易出现耐药性，减弱了抗生素的效果。并且，2019年农村农业部发布“禁抗令”，停止生产含有促生长类的药物添加剂的动物饲料。因此，亟需寻求一种抗生素替代物。
[0003]现有研究表明抗菌肽对真菌、细菌均有抑制作用，将其添加至饲料中还能够促进畜禽生长，应用至水产养殖业能够抵御链球菌的侵染。黄粉虫抗菌肽是黄粉虫在自然状态或者诱导条件下产生的一种小分子多肽，然而自然状态或现有的诱导条件下黄粉虫体内抗菌肽的含量太低。因而，提供一种可有效提高黄粉虫体内抗菌肽含量的方法对提高黄粉虫抗菌肽的产量和应用具备至关重要的作用。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法、黄粉虫抗菌肽的制备方法及其应用，本专利技术提供的诱导黄粉虫产抗菌肽的方法可以有效提高黄粉虫体内抗菌肽的含量。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法，包括如下步骤：采用混合有大肠杆菌菌液的饲料饲喂空腹处理的黄粉虫幼虫，得到饲喂诱导后的黄粉虫幼虫；
[0007]针刺所述饲喂诱导后的黄粉虫幼虫背部节间处，得到针刺诱导后的黄粉虫幼虫；
[0008]将所述针刺诱导后的黄粉虫幼虫于紫外光下照射后，培养24小时，得到含有抗菌肽的黄粉虫。
[0009]优选的，所述黄粉虫幼虫的龄期为6～15龄；所述针刺的次数为1～3次；所述针刺包括直接针刺或蘸取大肠杆菌菌液针刺。
[0010]优选的，所述饲料与所述大肠杆菌菌液的质量体积比为1.5～3g:1～2mL；所述大肠杆菌的浓度为0.5～1个麦氏浊度。
[0011]优选的，所述紫外光所使用紫外灯的功率为22～28W；所述针刺诱导后的黄粉虫幼虫距所述紫外灯的垂直距离为20～30cm；所述紫外光的照射时间为30～60min。
[0012]本专利技术提供了一种黄粉虫抗菌肽的制备方法，包括如下步骤：将上述技术方案中诱导得到的含有抗菌肽的黄粉虫幼虫经乙酸铵提取液提取获得抗菌肽粗提液；
[0013]将所述抗菌肽粗提液经葡聚糖凝胶层析柱过滤，得到黄粉虫抗菌肽。
[0014]优选的，所述含有抗菌肽的黄粉虫幼虫与所述乙酸铵提取液的质量体积比为1～2g:2.5～3mL。
[0015]优选的，所述乙酸铵提取液包括乙酸铵缓冲液、苯甲基磺酰氟和巯基乙醇；
[0016]所述乙酸铵缓冲液的物质的量浓度为0.04～0.05mol/L，pH为5；
[0017]所述苯甲基磺酰氟的质量浓度为32～36μg/mL；
[0018]所述巯基乙醇的质量百分浓度为1.8～2
‰
。
[0019]优选的，所述葡聚糖凝胶层析柱过滤使用的洗脱液包括乙酸铵缓冲液或生理盐水；所述洗脱液的流速为0.65～0.7mL/min；
[0020]所述葡聚糖凝胶层析柱的分离范围为1500～30000；
[0021]所述葡聚糖凝胶层析柱为Sephadex
‑
50，所述层析柱的规格为60cm
×
3cm。
[0022]本专利技术还提供了上述制备方法诱导得到含有抗菌肽的黄粉虫幼虫或黄粉虫抗菌肽在制备动物抗菌饲料中的应用。
[0023]优选的，所述动物包括水产动物或哺乳动物；
[0024]所述菌包括链球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中的一种或多种。
[0025]有益效果：
[0026]本专利技术提供了一种诱导黄粉虫产抗菌肽的的方法，包括如下步骤：采用混合有大肠杆菌菌液的饲料饲喂空腹处理的黄粉虫幼虫，得到饲喂诱导后的黄粉虫幼虫；针刺刺伤所述饲喂诱导后的黄粉虫幼虫背部节间处，得到针刺诱导后的黄粉虫幼虫；将所述针刺诱导后的黄粉虫幼虫于紫外光下照射后，培养24小时，得到含有抗菌肽的黄粉虫。
[0027]与常规诱导方法相比，本专利技术对黄粉虫采用复合诱导，采用本专利技术提供的诱导方法和诱导顺序对黄粉虫进行刺激，能够更大程度地提高抗菌肽的含量。
[0028]此外，采用本专利技术方法得到的抗菌肽可以作为饲料添加剂用于水产养殖业，代替饲料中的抗生素抑制病菌对水产动物的侵害，很大程度上解决因抗生素禁用而产生的难题；并且，提取抗菌肽后的黄粉虫虫粉还可替代鱼粉作为养殖饲料，不仅为水产养殖饲料的短缺提供了解决途径，并且黄粉虫制备成虫粉抵御链球菌的工艺成本也比较低，制备流程更加简单。
[0029]同时，黄粉虫体内的蛋白质、油脂、几丁聚糖可广泛应用于药品、保健品领域，油脂肪酸组成以不饱和脂肪酸为主，具有调节血脂和增强抗氧化功能的作用。抗菌肽具有广谱的抑菌能力，可作为天然防腐剂应用于食品保鲜领域。
[0030]另外，本专利技术所用的原材料为黄粉虫，该原料来源广泛，养殖成本低。
附图说明
[0031]图1为实施例1中黄粉虫抗菌肽粗提液凝胶过滤图；
[0032]图2为实施例1中黄粉虫抗菌肽对链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌结果图，其中左上为大肠杆菌的抑菌结果，右上为链球菌的抑菌结果，左下为金黄色葡萄球菌的抑菌结果。
具体实施方式
[0033]本专利技术提供了一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法，包括如下步骤：采用混合有大肠
杆菌菌液的饲料饲喂空腹处理的黄粉虫幼虫，得到饲喂诱导后的黄粉虫幼虫；针刺所述饲喂诱导后的黄粉虫幼虫背部节间处，得到针刺诱导后的黄粉虫幼虫；将所述针刺诱导后的黄粉虫幼虫于紫外光下照射后，培养24小时，得到含有抗菌肽的黄粉虫。
[0034]如无特殊要求，本专利技术所用组分为本领域技术人员所熟知的市售产品。
[0035]本专利技术采用混合有大肠杆菌菌液的饲料饲喂空腹处理的黄粉虫幼虫，得到饲喂诱导后的黄粉虫幼虫。本专利技术优选选用体表完整、颜色纯正、无黑化和活动能力强的黄粉虫幼虫，所述黄粉虫幼虫更加健康活力强，免疫力好、代谢快，且喜群集，通过诱导后可以产生更多的抗菌肽。在本专利技术中，所述黄粉虫幼虫的龄期优选为6～15龄，更优选为7～12龄，所述龄期黄粉虫幼虫的抗菌肽产出率较其他龄期更高。在本专利技术中，所述得到饲喂诱导后的黄粉虫幼虫的标准为所述黄粉虫幼虫自动停止取食。本专利技术对所述混合有大肠杆菌菌液的饲料饲喂总量没有特殊限定，按照本领域常规饲喂量给予充足即可。
[0036]在本专利技术中，所述空腹处理包括将所述黄粉虫进行连续禁食，所述禁食的时间优选为1～2天，更优选为2天。在本专利技术中，所述空腹处理结合后续诱导可更好地调动所述黄粉虫幼虫的免疫反应。本专利技术优选在培养箱中进行所述空腹处理；所述空腹处本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导黄粉虫产抗菌肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：采用混合有大肠杆菌菌液的饲料饲喂空腹处理的黄粉虫幼虫，得到饲喂诱导后的黄粉虫幼虫；针刺所述饲喂诱导后的黄粉虫幼虫背部节间处，得到针刺诱导后的黄粉虫幼虫；将所述针刺诱导后的黄粉虫幼虫于紫外光下照射后，培养24小时，得到含有抗菌肽的黄粉虫。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述黄粉虫幼虫的龄期为6～15龄；所述针刺的次数为1～3次；所述针刺包括直接针刺或蘸取大肠杆菌菌液针刺。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述饲料与所述大肠杆菌菌液的质量体积比为1.5～3g:1～2mL；所述大肠杆菌的浓度为0.5～1个麦氏浊度。4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述紫外光所使用紫外灯的功率为22～28W；所述针刺诱导后的黄粉虫幼虫距所述紫外灯的垂直距离为20～30cm；所述紫外光的照射时间为30～60min。5.一种黄粉虫抗菌肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1～4任一项得到的所述含有抗菌肽的黄粉虫幼虫经乙酸铵提取液提取获得抗菌肽粗提液；将所述抗菌肽粗提液经葡聚糖凝胶层析柱过滤，得到黄粉虫抗菌肽。6.根据权利要求5所述的制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟赫诚，蔡萍瑶，林勇，黎先锋，刘勇，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：