表达vvIBDV-VP2蛋白的重组4型禽腺病毒活载体疫苗株及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种表达vvIBDV

【技术实现步骤摘要】
表达vvIBDV
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VP2蛋白的重组4型禽腺病毒活载体疫苗株及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及一株表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒活载体疫苗株及其构建方法和应用。本专利技术属于医药


技术介绍

[0002]禽腺病毒(FAdVs)在全世界广泛流行，流行毒株主要有FAdV
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4、FAdV
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11、FAdV
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1、FAdV
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8a、FAdV
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8b等血清型，给家禽养殖业造成了严重的经济损失。FAdVs感染最早于1987年在巴基斯坦的安卡拉地区发现，因此该病也称为“安卡拉病”，之后在中国、日本、韩国、印度、美国、加拿大等不同国家和地区都有相关的报道。FAdVs根据群特异性抗原的不同可以分为3个群：I群包括传统的从鸡、火鸡、鹅及其他禽类获得的腺病毒；II群主要是和火鸡出血性肠炎、大理石脾病相关的腺病毒；III群主要是与减蛋综合征病毒有关的一类病毒。I群腺病毒根据分子结构可以进一步分为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒(FAdV
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4)疫苗株，其特征在于，所述的疫苗株是在血清4型禽腺病毒反向遗传疫苗株rHN20的基础上，在FAdV
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4基因组开放阅读框42和43之间的长度为1966
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bp天然核苷酸缺失位点插入传染性法氏囊病病毒超强毒的VP2基因获得的，其中所述的FAdV
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4反向遗传疫苗株rHN20是通过反向遗传技术将我国新发毒株HLJFAd15的Hexon基因替换为天然弱毒株ON1的Hexon基因而获得。2.如权利要求1所述的表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒(FAdV
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4)疫苗株，其特征在于，所述的传染性法氏囊病病毒超强毒为传染性法氏囊病病毒超强毒HLJ
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0504，其NCBI登录号为GQ451330.1。3.如权利要求1所述的表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒(FAdV
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4)疫苗株，其特征在于，传染性法氏囊病病毒超强毒HLJ
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0504VP2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。4.如权利要求1
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4任一项所述的表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒(FAdV
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4)疫苗株，其特征在于，所述的疫苗株是通过以下方法构建得到的：(1)vvIBDV
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VP2表达盒质粒(CMV
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VP2)的构建以传染性法氏囊病病毒超强毒HLJ
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0504cDNA为模板，使用引物VP2 F:ttagtgaaccgtcagatccgctagcgccaccATGACAAACCTGCAAGATCAAACC和VP2 R:ctgattatgatctagagtcgcggccgctttaCCTTAAGGCCCGAATTATGTC扩增VP2基因编码区，回收PCR产物；将pEGFP
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N1用NheI和NotI限制性内切酶进行双酶切，回收较大片段；将PCR产物与酶切后的载体大片段用ClonExpress II One Step Cloning Kit进行重组连接，转化至DH5α感受态中，涂板，获得重组质粒，将测序正确的质粒命名为CMV
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VP2；(2)Fos
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rHN20
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vvIBDV
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VP2感染性克隆粘粒的构建使用Counter
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Selection BAC Modification Kit构建Fos
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rHN20
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vvIBDV
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VP2感染性克隆粘粒，方法如下：首先将Fos
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rHN20电转进DH10B感受态细胞中，通过氯霉素抗生素筛选阳性克隆；然后再将Counter
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Selection BAC Modification Kit试剂盒中的重组酶质粒pRed E/T电转进含Fos
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rHN20的DH10B感受态细胞中，通过氯霉素和链霉素筛选阳性克隆；以Counter
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Selection BAC Modification Kit试剂盒中的rpsl
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neo表达盒DNA为模板，使用引物1966
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rpslneo F和1966
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rpslneo R扩增带有FAdV
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4天然缺失1966

【专利技术属性】
技术研发人员：潘青，王笑梅，高玉龙，祁小乐，崔红玉，刘爱晶，刘长军，张艳萍，李凯，高立，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心，
类型：发明
国别省市：