实现全脑突触后神经元胞体标记的重组腺相关病毒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种通过将特定类型启动子介导的、耦连核定位序列H2B的荧光蛋白元件构建成双链载体，然后包装成高滴度的血清型1型重组腺相关病毒，可高效实现全脑范围内多种细胞类型突触后神经元胞体的标记。相比使用染料和其他重组腺相关病毒只能标记轴突投射的神经纤维，本发明专利技术可以直接标记神经元胞体且标记亮度和效率更高。相比于嗜神经病毒，本发明专利技术的标记毒性更小、安全性更高且能介导目的基因长时间稳定表达。本发明专利技术不仅适用于机械手工切片，而且适用于自动或半自动的全脑成像系统，用于展示突触后神经元胞体的标记。进一步的，结合全脑成像系统，能更直观在三维水平展示特定脑区和脑区内细胞突触后神经元胞体在全脑水平的整体分布以及在全脑范围内众多脑区和亚脑区的分布，还在同一个样本中并行展示和比较不同实验个体、不同脑区、同一脑区不同细胞类型对输出环路中不同脑区或不同类型突触后神经元调控强弱的差异。神经元调控强弱的差异。神经元调控强弱的差异。

【技术实现步骤摘要】
实现全脑突触后神经元胞体标记的重组腺相关病毒及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种重组腺相关病毒及其应用和突触后神经元胞体的标记制剂，具体涉及重组腺相关病毒标记制剂用于实现对全脑范围内多种类型细胞突触后神经元胞体的高效标记。

技术介绍

[0002]神经环路是大脑神经系统结构和功能的基础，由神经输入环路和输出环路两部分组成，神经环路内特定类型的神经元或神经元群体通过树突上数目众多的树突棘接收上游其他脑区多种类型神经元的信息输入(输入环路)，在胞体进行信息整合后通过长程投射的轴突将信息进一步传递给皮层及皮层下的众多脑区(输出环路)。因此深入系统的解析神经输入和输出环路将有助于理解脑的结构组成和信息处理的机制，并为脑疾病的诊断治疗提供科学依据。更确切的，对于神经输出环路高度可视化的探究将有助于我们理解靶定脑区与下游众多投射脑区之间、各脑区内不同细胞类型之间、特定类型的神经元之间的连接关系，进而理解脑在介观水平(脑区
‑
脑区)和微观水平(神经元突触前
‑
突触后)等不同尺度内如何行使功能的机制。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组腺相关病毒，其特征在于，该重组腺相关病毒的制备方法为：通过启动子介导的耦连核定位序列H2B的荧光蛋白元件构建成双链载体，再用包装细胞包装成重组腺相关病毒。2.根据权利要求1所述的重组腺相关病毒，其特征在于，所述启动子选取hSyn、EF1α、CMV、CAG、CaMKII、Dlx、TH中的一种。3.根据权利要求1所述的重组腺相关病毒，其特征在于，荧光蛋白选自蓝色荧光蛋白、青色荧光蛋白、绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、橙色荧光蛋白、红色荧光蛋白、远红光荧光蛋白或上述荧光蛋白的衍生物。4.根据权利要求1所述的重组腺相关病毒，其特征在于，耦连核定位序列H2B的荧光蛋白元件的表达为单独表达，或由重组酶识别序列、四环素应答序列介导表达。5.根据权利要求1所述的重组腺相关病毒，其特征在于，重组酶识别序列选自loxP

【专利技术属性】
技术研发人员：孙佩，汪萌，刘珂，
申请(专利权)人：重庆大学，
类型：发明
国别省市：